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常用抗體標記熒光染料的選擇CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor?系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等AlexaFluor?CFTM系列。CFTMAlexaFluor?系列具有以下幾點優(yōu)勢:型羅丹明核心羅丹明染料以優(yōu)異的耐光性和良好的熒光量子產(chǎn)量著稱。因此很多AlexaFluor?染料具有Biotium科學家覺察CF染料的產(chǎn)CF如:(以以下圖)已經(jīng)淬滅。特異性高的近紅外染料聚合體多、熒光量子產(chǎn)量差等問題。為了解決這些問題,很多商用的近紅外染料比方AlexaFluor?DyLight?dyes和IRDyes?近紅外染料,在制備時吸附了大量的帶負電荷的磺化更加嚴峻的問題,經(jīng)這種染料標記的生物耦聯(lián)物的非特異性結合。例如:與大量負電荷結合后可以顯著的轉變抗體的等電點,進而影響抗原抗體的特異性結合反響。綜合以上內(nèi)容,Biotium的科學家用革命性的方法設計出近紅外染料CF,在避開引入大量負電荷的狀況下,極大的保證了染料優(yōu)異的理化特性。Biotium近紅外的CF染料以花青或羅丹明染料為核心更好的水溶性。因此,近紅外CF染料比其他近紅外染料熒光強度更高,光穩(wěn)定性好。最重要CF染料標記蛋白質樣品相對于其他商業(yè)用近紅外染料制備的抗體偶聯(lián)物,最大限度的提高了信噪比。(見以以下圖)CF系列染料(右圖)是經(jīng)過型改造過的染料,不會存在上述狀況,而且染料的水溶性極好。.染料制備過程中含有大量帶負電的磺化基團,簡潔非特異性結合正電CF790的條帶特異性比照。優(yōu)異的標記效率生物偶聯(lián)后的活性染料一般很簡潔水解,會在運輸,操作及儲存中帶來諸多不便,最終致染AlexaFluor?dyes,DyLight?dyesandIRDyes?等嚴峻的磺化作用有較強的吸濕性,惡化水解作用等問題。例如:AlexaFluor?488在應用時琥珀酰亞胺脂酯SE活性局部遠低于〔8CFSEAlexaFluorSE更耐水解??傮w來說,CFSE產(chǎn)品一貫的給出更高的標記效率,供給應用戶更好的使用價值。選擇方案:藍色〔350-450nm〕CF350、AlexaFluor350、AMCA等CF350CF350AlexaFluor350AMCA的藍色熒光染料,CF350的AlexaFluor350、AMCA,50%,水溶性更好,耐光性格外優(yōu)秀亮,更簡潔與現(xiàn)有的綠色熒光基團區(qū)分。CF405S/CF405M、AlexaFluor405近乎完善的匹配藍色二極管激光器CF405S/CF405MAlexaFluor405405nm;譜線的藍色二極管激光器完善的匹配。在流式細胞儀上的分析結果顯示CF405S/CF405MAlexaFluor4051.7倍。綠色〔488nm〕CF488A 、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等----488nmCF488A以上染料其標記的抗體蛋白適用于全部配備488nmFL1通道檢測;或者可用于熒光顯微鏡技術;CF488A最低限度的帶電量降低了與抗體耦聯(lián)物的非特異性結合;在紅色通道溢出AlexaFluor488;耐光性好;水溶性好和pH料的標記率。ar8在較寬的H值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定〔;FITC488nm525nmPH值影響,PH值降低時其熒光強度減弱。橙紅色〔543-555nm〕CF543AlexaFluor546ATTO550,Cy3,DyLight549,Rhodamine(TRITC)543nm的橙色熒光染料;CF?543熒光條帶光明,耐光,水溶性好,確保了CF543染料與抗體的耦聯(lián)物保持優(yōu)異的水溶性,為該波段最亮的橙色熒光染料。例如:同等的標記程度下,CF543標記的羊抗鼠IgG抗體的亮度高于用AlexaFluor546標記的2~10倍。CF555、AlexaFluor555、Tetramethylrhodamine(TAMRA)等匹配Cy3濾光片的橙色熒光染料;紅色〔568-594nm〕CF568、AlexaFluor?568,ATTO565,RhodamineRed568nm處紅色熒光染料;CF568染料耐光性最好;高效水溶性;比AlexaFluor568標記的抗體亮度更亮;CF594、AlexaFluor?594,ATTO?594,DyLight?594,TexasRed 等最亮紅色熒光染料;CF594由于其高量子產(chǎn)量和優(yōu)異的水溶性而比AlexaFluor594光明2~4倍。同時CF594對光極其穩(wěn)定,使它能被抱負地應用于諸如共聚焦顯微鏡和單分子顯像條件苛刻的應用中去。遠紅外〔620-660nm〕CF620R、LightCyclerRed640620nm處;CF?620R是以紅色熒光染料羅假設丹〔rhodamine〕為根底的遠紅外的熒光染料,該染料有高熒光亮度和極度的耐光性。它的吸取和放射光譜為617和639nm,該染的水溶性有利于生物耦合在水介質中,更好的保持耦聯(lián)物的生物特異性結合。CF633、AlexaFluor633,AlexaFluor 647,Cy5,DyLight633,DyLight649等633/635nm激光線的最正確染料熒光染料;CF633染料的優(yōu)點:當被633nm氦氖激光或635nm紅色二極管激光激發(fā)時,產(chǎn)生最亮的抗體耦聯(lián)物;光穩(wěn)定性遠高于AlexaFluor647;高效的水溶性CF640、AlexaFluor647,ATTO647N,Cy5,DyLight649等遠紅外熒光染料;CF640R〔rhodamine〕Cy5、AlexaFluor647;但以羅丹明〔rhodamine〕為根底的紅色染料CF640R它最大的優(yōu)點就是對光穩(wěn)定性,Cy5和AlexaFluor647以花青素為根底,因此有著和花青素一樣的特點即耐光性較差。極好的亮度和耐光性使CF640R被抱負的用于共聚焦顯微鏡和單分子成像等條件苛刻的檢測中。CF647、AlexaFluor647,ATTO647N,DyLight649等遠紅外熒光染料;CF647Cy5、AlexaFluor647光明。CF660、AlexaFluor?660,Allophycocyanin(APC)等介于遠紅外近紅外之間的熒光染料;近紅外〔680-790nm處激發(fā)〕CF680R/680、AlexaFluor680,Cy5.5,IRDye680等近紅外熒光染料;CF680是高水溶性的以花青素為根底的染料,分子量大約為3000。該染料標記抗體極佳,發(fā)出最亮的熒光和在免疫染色光譜相像的染料中產(chǎn)生最高的信噪比。CF680R分子量約為900,更適合標記核酸或者相對小的生物分子。CF680R是型的以羅丹明〔rhodamine〕為根底的高熒光亮度,極度耐光性染料,這使它可被抱負地用于共聚焦顯微鏡,單分子成像等條件要求苛刻的應用中。CF750、CF?770andCF?790等近紅外熒光染料;CF750、CF770、CF790是領域內(nèi)真正
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