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文檔簡(jiǎn)介

微生物的基本特點(diǎn)是什么??。?!微生物的分離和純培養(yǎng)在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體來研究其屬性數(shù)量取勝發(fā)酵——釀酒——酵母菌免疫——病原菌微生物的基本特點(diǎn)是什么??。?!微生物的分離和純培養(yǎng)在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體來研究其屬性數(shù)量取勝微生物的物種(菌株)一般也是以群體的形式進(jìn)行繁衍、保存;培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義!!培養(yǎng)物:人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物:含有多種微生物物種的培養(yǎng)物純培養(yǎng)物:只有一種微生物的培養(yǎng)物微生物的基本特點(diǎn)是什么??。?!微生物的分離和純培養(yǎng)數(shù)量取勝培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義??!培養(yǎng)物:人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物:含有多種微生物物種的培養(yǎng)物純培養(yǎng)物:只有一種微生物的培養(yǎng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)??!科赫建立的微生物基本操作技術(shù)微生物的基本特點(diǎn)是什么??。?!微生物的分離和純培養(yǎng)數(shù)量取勝培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義!!培養(yǎng)物:人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物:含有多種微生物物種的培養(yǎng)物純培養(yǎng)物:只有一種微生物的培養(yǎng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)??!問題:是不是對(duì)微生物研究和利用的時(shí)候都一定要用純培養(yǎng)物呢?微生物的基本特點(diǎn)是什么?小??!微生物的分離和純培養(yǎng)微生物個(gè)體微小的特點(diǎn)也決定了顯微技術(shù)是進(jìn)行微生物研究的另一項(xiàng)重要技術(shù),因?yàn)榻^大多數(shù)微生物的個(gè)體形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)只能通過顯微鏡才能進(jìn)行觀察和研究純培養(yǎng)技術(shù)顯微技術(shù)微生物學(xué)成為一門學(xué)科無菌的概念純培養(yǎng)的概念純培養(yǎng)物的獲得方法微生物的分離和純培養(yǎng)無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)微生物無處不在我們時(shí)刻都生活在“微生物的海洋”中多種微生物組成,混雜的存在形式分離從混雜的群體中分離特定的某一種微生物,是研究和利用微生物的第一步無菌技術(shù)無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)無菌技術(shù)用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時(shí)防止其它微生物的污染,其自身也不污染環(huán)境無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)1)微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌試管、錐形瓶、接種環(huán)、培養(yǎng)皿...培養(yǎng)皿(dish)←→培養(yǎng)平板(簡(jiǎn)稱平板,plate)使用之前必須先進(jìn)行滅菌(包裝滅菌)無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)1)微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌高壓蒸汽滅菌:將物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi),通過加熱,使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽,待水蒸氣將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡,關(guān)閉排氣閥,繼續(xù)加熱,蒸汽不能溢出,增加滅菌器內(nèi)的壓力,從而使沸點(diǎn)增高,得到高于100℃的溫度,導(dǎo)致致病菌蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的可殺死所有的微生物,包括最耐熱的某些微生物的休眠體;同時(shí)基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)1)微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌高溫干熱滅菌:160℃~170℃,時(shí)間長(zhǎng)(1~2h)干熱滅菌溫度不能超過180℃,否則,包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦,甚至引起燃燒塑料材質(zhì)不適于干熱滅菌紫外滅菌無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)1)微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌注意:為了防止雜菌,特別是空氣中的雜菌污染,試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽,它們只可讓空氣通過,而空氣中的其他微生物不能通過無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)2)接種操作

用接種環(huán)或接種針分離微生物,或在無菌條件下把微生物由一個(gè)培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)的操作(微生物學(xué)研究中最常用的基本操作)要點(diǎn):煤氣燈(或酒精燈)火焰附近進(jìn)行無菌操作箱(如生物安全超凈柜)或操作室內(nèi)進(jìn)行操作箱或操作室內(nèi)的空氣可在使用前一段時(shí)間內(nèi)用紫外線燈或化學(xué)藥劑滅菌有的無菌操作箱可通無菌空氣維持無菌狀態(tài)無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)2)接種操作

用接種環(huán)或接種針分離微生物,或在無菌條件下把微生物由一個(gè)培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)的操作(微生物學(xué)研究中最常用的基本操作)要點(diǎn):煤氣燈(或酒精燈)火焰附近進(jìn)行無菌操作箱(如生物安全超凈柜)或操作室內(nèi)進(jìn)行操作箱或操作室內(nèi)的空氣可在使用前一段時(shí)間內(nèi)用紫外線燈或化學(xué)藥劑滅菌有的無菌操作箱可通無菌空氣維持無菌狀態(tài)無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)2)接種操作常見規(guī)格及槍頭顏色0.5-20

μl,白色槍頭10-100

μl,黃色槍頭20-200

μl,黃色槍頭100-1000

μl,藍(lán)色槍頭1-5ml,白色槍頭1-10ml,白色槍頭超凈工作臺(tái):紫外消毒,通無菌空氣無菌操作箱無菌的概念微生物的分離和純培養(yǎng)2)接種操作用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基微生物的分離和純培養(yǎng)固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基用瓊脂或其他凝膠物質(zhì)固化的培養(yǎng)基明膠菌落:分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長(zhǎng)群體菌苔:固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片的狀態(tài)用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)固體培養(yǎng)基不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征(形狀,顏色),可以成為對(duì)該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)固體培養(yǎng)基用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)固體培養(yǎng)基樹木狀串珠狀小刺狀線狀根狀使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個(gè)菌落的基本方法:純培養(yǎng):一個(gè)微生物→菌落用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋!稀釋倒平板法涂布平板法平板劃線法稀釋搖管法待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中保溫培養(yǎng)注意培養(yǎng)基的溫度?。?!區(qū)別好氧和厭氧微生物?。?!用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋倒平板法如果稀釋得當(dāng),在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落,后者可能就是由一個(gè)微生物細(xì)胞繁殖形成的è挑取單個(gè)菌落,或重復(fù)以上操作數(shù)次,得到純培養(yǎng)已熔化的培養(yǎng)基倒人無菌培養(yǎng)皿,制成無菌平板生長(zhǎng)在表面??!用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)涂布平板法用無菌涂布棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面冷卻凝固將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)一、稀釋倒平板法二、涂布平板法操作較麻煩,對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好!使用較多的常規(guī)方法,但有時(shí)涂布不均勻!用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)一、稀釋倒平板法二、涂布平板法操作較麻煩,對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好!使用較多的常規(guī)方法,但有時(shí)涂布不均勻!

用接種環(huán)以無菌操作蘸取少許待分離的材料,在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線,微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)平板劃線法

用接種環(huán)以無菌操作蘸取少許待分離的材料,在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線,微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)平板劃線法用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋搖管法厭氧微生物的分離將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱,使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物,將培養(yǎng)基和空氣隔開分離的材料用這些試管梯度稀釋迅速搖勻試管、冷凝用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋搖管法厭氧微生物的分離將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱,使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物,將培養(yǎng)基和空氣隔開分離的材料用這些試管梯度稀釋迅速搖勻試管、冷凝用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋搖管法厭氧微生物的分離厭氧手套箱用固體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋搖管法厭氧微生物的分離將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱,使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物,將培養(yǎng)基和空氣隔開分離的材料用這些試管梯度稀釋迅速搖勻試管、冷凝一定是厭氧菌嗎??對(duì)象:個(gè)體大的細(xì)菌、原生動(dòng)物和藻類方法:稀釋法效果:稀釋法進(jìn)行液體分離必須在同一個(gè)稀釋度的許多平行試管中,大多數(shù)(一般應(yīng)超過95%)表現(xiàn)為不生長(zhǎng)機(jī)率有微生物生長(zhǎng)的試管可能是純培養(yǎng)缺點(diǎn):只能分離出混雜微生物群體中數(shù)量占優(yōu)勢(shì)的種類用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)注射器的最小吸取量:0.00062毫升1878年,Lister分離乳酸鏈球菌時(shí)所使用的微量注射器和酒杯培養(yǎng)裝置用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)注射器的最小吸取量:0.00062毫升1878年,Lister分離乳酸鏈球菌時(shí)所使用的微量注射器和酒杯培養(yǎng)裝置用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)注射器的最小吸取量:0.00062毫升1878年,Lister分離乳酸鏈球菌時(shí)所使用的微量注射器和酒杯培養(yǎng)裝置顯微鏡

采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)分離難度與大小成反比較大微生物:毛細(xì)管提取è滅菌培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移清洗幾次(去污染)(低倍顯微鏡)較小的微生物:顯微操作儀(通過機(jī)械、空氣或油壓傳動(dòng)裝置來減小手的動(dòng)作幅度),顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子無顯微操作儀:適當(dāng)稀釋è制備成小液滴在顯微鏡下觀察,選取只含一個(gè)細(xì)胞的液滴單細(xì)胞(孢子)分離微生物的分離和純培養(yǎng)沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物生長(zhǎng)的要求,在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的選擇培養(yǎng)已知某種微生物的生長(zhǎng)需要,設(shè)計(jì)一套特別適合該種微生物生長(zhǎng)的特定環(huán)境,使得即使在混雜的微生物群體中占比很少,也能選擇培養(yǎng)出來牛肉膏蛋白胨/LB培養(yǎng)基細(xì)菌高氏1號(hào)培養(yǎng)基放線菌馬丁培養(yǎng)基/PDA真菌滿足需要才能生長(zhǎng)選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)策略:根據(jù)微生物的特點(diǎn),包括營(yíng)養(yǎng)、生理、生長(zhǎng)條件...目標(biāo)菌在群落中的數(shù)量上升抑制其他大多數(shù)微生物生長(zhǎng)造成有利于該菌生長(zhǎng)的環(huán)境平板稀釋等方法純培養(yǎng)分離目的馬丁培養(yǎng)基中的孟加拉紅和鏈霉素均可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)1)選擇平板培養(yǎng)產(chǎn)蛋白酶菌添加牛奶或酪素產(chǎn)生蛋白酶透明的蛋白質(zhì)水解圈不產(chǎn)生蛋白酶無水解圈高溫菌高溫培養(yǎng)抗性菌抗生素(四環(huán)素、氨芐青霉素,卡那霉素)滑行菌(螺旋體、黏細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌)平板前沿挑菌(重復(fù))固氮菌不添加氮源選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)1)選擇平板培養(yǎng)產(chǎn)蛋白酶菌添加牛奶或酪素產(chǎn)生蛋白酶透明的蛋白質(zhì)水解圈不產(chǎn)生蛋白酶無水解圈高溫菌高溫培養(yǎng)抗性菌抗生素(四環(huán)素、氨芐青霉素,卡那霉素)滑行菌(螺旋體、黏細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌)平板前沿挑菌(重復(fù))固氮菌不添加氮源選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)藍(lán)白斑篩選基因工程常用的細(xì)菌重組子的篩選方法

野生型埃希氏大腸菌(E.coli)產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以將無色化合物X-gal切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì)5-溴-4-靛藍(lán)。5-溴-4-靛藍(lán)可使整個(gè)菌落產(chǎn)生藍(lán)色變化。在經(jīng)人工插入外源基因后,突變型大腸桿菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切斷,無法形成完整的β半乳糖苷酶,故不能對(duì)無色化合物X-gal進(jìn)行切割,菌落呈白色選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)2)富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同,制定特定的環(huán)境條件,使僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長(zhǎng),從而使其在群落中的數(shù)量大大增加,更容易地從自然界中分離到特定的微生物條件:溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣和營(yíng)養(yǎng)...最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一,營(yíng)養(yǎng)和生理?xiàng)l件的幾乎無窮盡的組合形式可從自然界選擇出特定微生物2)富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離微生物的分離和純培養(yǎng)從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源的培養(yǎng)基二元培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)

培養(yǎng)物中只含有二種微生物,而且是有意識(shí)的保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物病毒和

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