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溶血性鏈球菌檢驗(yàn)革蘭氏陽(yáng)性球菌檢樣處理增菌培養(yǎng)檢樣處理固體樣品:25g(電子天平)液體樣品:25mL(25mL吸量管)+
225mL生理鹽水(量筒),混勻。注意:液體樣品先用無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH至7.0。稀釋瓶或具塞廣口瓶增菌取上述混合液5mL(吸量管)
50mL葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)(于36℃±1℃培養(yǎng)24h)葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)
1.取已培養(yǎng)好的增菌液1環(huán)血平板劃線培養(yǎng)(于36℃±1℃培養(yǎng)24h)葡萄糖肉浸液肉湯(陽(yáng)性)血平板平板劃線示意圖開(kāi)始處開(kāi)始處
2.取有典型菌落的陽(yáng)性血平板(在放陽(yáng)性物品處)灰白色,半透明或不透明,表面光滑,周圍有透明圈血平板劃線(分純)血平板涂布貼桿菌肽試紙(2~3片)革蘭氏染色典型菌落(同一菌落)于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h在無(wú)菌室中固定,到微生物實(shí)訓(xùn)室染色革蘭氏染色步驟:涂片——火焰固定——結(jié)晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脫色——水洗——吸干——番紅或沙黃復(fù)染——水洗——干燥——鏡檢涂片:在載玻片中央滴一滴生理鹽水,用無(wú)菌操作法挑取菌種于生理鹽水中,調(diào)勻并涂成薄膜。注意:生理鹽水不宜過(guò)多;涂片必須均勻。火焰固定:載玻片通過(guò)火焰1~2次固定,不可過(guò)熱,以載玻片不燙手背為宜。結(jié)晶紫初染:涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結(jié)晶紫1滴,染色1min。水洗:用自來(lái)水沖洗至沖下的水無(wú)色為止。碘液媒染:加碘液媒染1min,然后用水沖洗至沖下的水呈無(wú)色為止。乙醇脫色:用吸水紙將載玻片上的水吸凈,用95%的乙醇滴于涂片薄膜上,滴洗至流出的乙醇不出現(xiàn)紫色為止,大約需要20~30s。立即用自來(lái)水沖洗乙醇約30s,用吸水紙吸干水分。番紅或沙黃復(fù)染:在涂片薄膜上滴加番紅1滴,染色1~2min。水洗:用水沖洗至沖下的水呈無(wú)色為止。干燥:于室溫下自然干燥。觀察:干燥后,于涂片薄膜上滴香柏油1滴,置油鏡下觀察。結(jié)果:
革蘭氏陽(yáng)性菌——紫色;
革蘭氏陰性菌——紅色。桿菌肽敏感試驗(yàn)結(jié)果:試紙周圍有抑菌帶出現(xiàn)為陽(yáng)性血平板純化結(jié)果:
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