實(shí)驗(yàn)十的限制性內(nèi)切酶酶切第一頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私夂怂嵯拗菩詢?nèi)切酶的特點(diǎn)及其對(duì)DNA的酶切過(guò)程學(xué)會(huì)設(shè)計(jì)構(gòu)建體外重組DNA分子的方法，并根據(jù)目的基因合理選擇載體與限制性內(nèi)切酶以及DNA的酶切技術(shù)第二頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理EcoRI限制性內(nèi)切酶的識(shí)別與切割順序?yàn)椋?’……G↓AATTC……3’3’……CTTAA↑G……5’XholI限制性內(nèi)切酶的識(shí)別與切割順序?yàn)椋?’……C↓TCGAG……3’3’……TAGCT↑C……5’第三頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)材料

儀器：水浴鍋、制冰機(jī)、離心機(jī)、電泳設(shè)備、各式移液槍、核酸紫外檢測(cè)儀等。1.5ml離心管、移液槍槍頭等。DNA樣品：上一個(gè)實(shí)驗(yàn)獲得的質(zhì)粒DNA限制性內(nèi)切酶XholI和EcoRI（Takara）第四頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日四、實(shí)驗(yàn)步驟第五頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日第六頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日酶切體系：質(zhì)粒DNA5ulEcoRⅠ1ulXholⅠ1ul2×BufferH2ulSw11ulTotal20ul第七頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日用微量移液槍（20微升）依次吸取SW10倍酶切緩沖液DNAEcoRIXholI第八頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日蓋緊上述兩個(gè)1.5ml離心管的蓋子，在振蕩器上充分混勻2秒鐘，立即于離心機(jī)內(nèi)離心一下，以將管壁上的液體集中于管底。將離心管放置37℃水浴鍋中反應(yīng)3小時(shí)。在酶切反應(yīng)的同時(shí)，制備1.0%的瓊脂糖凝膠，并準(zhǔn)備好電泳裝置。第九頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)電泳結(jié)果，描述酶切的結(jié)果與效果。第十頁(yè)，共十一頁(yè)，2022年，8月28日M12←4900bp←1518bp

AnalysisofrecombinantexpressionvectorwithrestrictionenzymeM.

DNAMarker(LambdaDNA/HindIII+EcoRIMarkers)1.pGEX6p-1-hly/BamHI/XhoI2.pGEX6p-1/EcoRI重組質(zhì)粒pGEX6p-1-hly酶切結(jié)果bp19