1吸光光度法是基于被測物質(zhì)的分子對光具有選擇性吸取的特性而建立起來的分析方法。化學(xué)分析與儀器分析方法比較化學(xué)分析：常量組分(>1%),Er0.1%～0.2%依據(jù)化學(xué)反應(yīng),運用玻璃儀器精確度高儀器分析：微量組分(<1%),Er1%～5%依據(jù)物理或物理化學(xué)性質(zhì),須要特殊的儀器靈敏度高2例:含F(xiàn)e約0.05%的樣品,稱0.2g,則m(Fe)≈0.1mg重量法

m(Fe2O3)≈0.14mg,稱不準(zhǔn)容量法

V(K2Cr2O7)≈0.02mL,測不準(zhǔn)光度法結(jié)果0.048%～0.052%,滿足要求310.1概述

1.光的基本性質(zhì)(電磁波)磁場向量電場向量傳播方向YZX4光學(xué)光譜區(qū)遠(yuǎn)紫外近紫外可見近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~400nm400nm

~750nm750nm~2.5m2.5m

~5.0m5.0m

~1000m52.溶液中溶質(zhì)分子對光的吸取與吸取光譜/nm顏色互補光400-450紫黃綠450-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紫紅560-580黃綠紫580-610黃藍(lán)610-650橙綠藍(lán)650-760紅藍(lán)綠不同顏色的可見光波長及其互補光6300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2AbsorbanceCr2O72-、MnO4-的吸取光譜35073.吸光光度法的特點靈敏度高：測定下限可達(dá)10－5～10－6mol/L,10-4%～10-5%精確度能夠滿足微量組分的測定要求：相對誤差2～5％（1～2％）操作簡便快速應(yīng)用廣泛810.1.2.光吸取基本定律:Lambert-Beer定律A=lg(I0/It)=kbcItI0bdxII-dIs吸光度介質(zhì)厚度(cm)T－透光度（透射比）（Transmittance）9吸光度與光程的關(guān)系A(chǔ)=bc

光源檢測器0.00吸光度檢測器b樣品光源0.22吸光度光源檢測器0.44吸光度b樣品b樣品10吸光度與濃度的關(guān)系

A=bc

吸光度0.00光源檢測器

吸光度0.22光源檢測器b

吸光度0.44光源檢測器b11A

=lg(I0/It)=lg(1/T)=-lgT

=kbc5.吸光度與透射度的關(guān)系126.吸光度的加和性與吸光度的測量1.加和性：

A=A1+A2+…+An2.測量：用參比溶液調(diào)T=100%（A=0），再測樣品溶液的吸光度，即消退了吸取池對光的吸取、反射，溶劑、試劑對光的吸取等。131.吸光系數(shù)（a）

a的單位:L·g-1·cm-1當(dāng)c的單位用g·L-1表示時，用a表示，

A＝abc的單位:L·mol-1·cm-12.摩爾吸光系數(shù)（）Molarabsorptivity

當(dāng)c的單位用mol·L-1表示時，用表示.

A＝bc

吸光系數(shù)、摩爾吸取系數(shù)及其桑德爾靈敏度越大,靈敏度越高:

104～5×104為中等靈敏度;>105為高靈敏度;<104為低靈敏度.14桑德爾靈敏度（S）：

定義：當(dāng)儀器的檢測極限為A=0.001時，單位截面積光程內(nèi)所檢出的吸光物質(zhì)的最低含量。定義式：S=Cminb（C:g/cm3;b:cm）推導(dǎo)式：S=M/（g/cm2）例一、例二、1510.2分光光度劑及吸取光譜便利、靈敏，精確度差。常用于限界分析。1.目視比色法162.吸光光度法和分光光度計光源單色器吸收池檢測系統(tǒng)穩(wěn)壓電源分光光度法的基本部件通過棱鏡或光柵得到一束近似的單色光.波長可調(diào),故選擇性好,精確度高.17722型分光光度計結(jié)構(gòu)方框圖光源吸取池檢測系統(tǒng)分光系統(tǒng)18分光光度計的主要部件光源：發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠 的光強度,穩(wěn)定。 可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm) 紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的 裝置。 棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm光柵:波長范圍寬,色散勻整,辨別性能好,運用便利19棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同單色器入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ280060050040020光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖原理：利用光通過光柵時發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.21吸取池：(比色皿)用于盛待測及參比溶液。 可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池 紫外區(qū)：石英池檢測器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號。 光電池，光電管，光電倍增管指示器： 低檔儀器：刻度顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動掃描記錄2210.3.1顯色反應(yīng)的選擇*選擇性好；靈敏度高，一般ε>104。*反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。*顯色劑在測定波特長無明顯吸取。比照性好,λmax>60nm.*顯色條件易于限制，重現(xiàn)性好。10.3光度分析法的設(shè)計232.顯色劑

CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PAR(4-（2-吡啶偶氨）-間苯二酚)NHNHNSNS型：雙硫腙NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸243.顯色條件的確定

1.顯色反應(yīng)酸度（c(M)、c(R)確定）pH1<pH<pH2pH25c(R)c(R)c(R)Mo(SCN)32+淺紅Mo(SCN)5橙紅Mo(SCN)6-淺紅Fe(SCN)n3-n2.顯色劑用量（c(M)、pH確定）263.顯色溫度及顯色時間另外，還有介質(zhì)條件、有機溶劑、表面活性劑等T1(℃)T2(℃)t(min)A276.干擾及消退1.限制酸度法測Fe3＋:(控制pH)Fe3+,Cu2+FeSS（紫紅）Cu2+pH2.5SS28測Co2＋(含F(xiàn)e3+):(掩蔽法)Co2＋,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(藍(lán))⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN－2.掩蔽劑掩蔽法3.氧化還原掩蔽法

294.利用校正系數(shù)。5.利用參比溶液消退顯色劑和某些共存有色離子的干擾Al3+,Co2＋，Ni2+Co2＋Ni2+AlF63-參比⑴F-2.其他顯色劑和試劑306、選擇適當(dāng)?shù)臏y定波長515655415500釷-偶氮砷III

鈷-亞硝基紅鹽

AA絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑3110.4吸光光度分析及誤差限制1.測量波長的選擇（吸取最大，干擾最小）一般來說，選擇max；如max處有干擾，則選擇無干擾處的進(jìn)行測定2.吸光度范圍的選擇（0.2~0.8）10.4.1測量波長和吸光度范圍的選擇321.試液與顯色劑均無色時，可用蒸餾水作參比。2.顯色劑為無色，而被測試液中存在其他有色離子，可用不加顯色劑的被測試液作參比。3.顯色劑有顏色，可選試劑空白作參比4.干擾組分與顯色劑有反應(yīng),又無法掩蔽消退時：1）掩蔽被測組分，再加入顯色劑，作參比.2）加入等量干擾組分到空白溶液中,作參比.3.參比溶液的選擇3301234mg/mlA。。。。*0.80.60.40.20溶液濃度的測定A＝bc工作曲線法(校準(zhǔn)曲線)6.2.5朗伯-比爾定律的分析應(yīng)用(p229)3410.4.2對朗伯-比爾定律的偏離1.非單色光2.介質(zhì)不勻整3.溶液本身的化學(xué)反應(yīng)（離解、絡(luò)合、締合）10.4.3吸光度測量的誤差一般選擇A=0.2~0.8之間引起的測量誤差較小。351.示差吸光光度法目的：提高光度分析的精確度和精密度解決高(低)濃度組分(i.e.A在0.2~0.8以外)問題分類：高吸光度差示法、低吸光度差示法、 精密差示吸光度法特點：以標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白原理：A相對=A=bcx-bc0=bc精確度：讀數(shù)標(biāo)尺擴(kuò)展,相對誤差削減,c0愈接近cx,精確度提高愈顯著10.7常用的吸光光度法36例：硫脲還原－硫氰酸鹽比色法測定鋼鐵中的鉬。酸溶，硫酸－高氯酸介質(zhì)中，硫脲還原鐵（III）為鐵(II),除干擾，還原鉬（VI）為五價，2.00mg/100ml的鉬標(biāo)準(zhǔn)溶液為參比溶液，用2.00-2.30mg/100ml的鉬標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制工作曲線和測定樣品溶液的吸光度,480nm測定A。372.雙波長吸光光度法目的：解決渾濁樣品光度分析消退背景吸取的干擾多組分同時檢測原理：A=Al1-Al2=（l1-l2）bc波長對的選擇：a.等吸光度點法，b.系數(shù)倍率法38選l1為參比波長,l2為測量波長得Al1=xl1bcx+

yl1bcyAl2=

xl2bcx+

yl2bcyΔA=Al2-Al1=(

xλ2bcx+

yl2bcy)-(

xl1bcx+

yl1bcy)在等吸光度的位置(G,F),

yl2＝

yl1，則上式成為

ΔA=(

xl2-

xl1）bcxΔA與cx成正比,可用于測定例,苯酚與2,4,6-三氯苯酚(y)混合物中苯酚(x)的雙波長分光光度法測定。393.導(dǎo)數(shù)吸光光度法目的：提高辨別率去除背景干擾

原理：dnA/dln~l

4010.8吸光光度法的應(yīng)用1測定弱酸和弱堿的離解常數(shù)

AHB和AB-分別為有機弱酸HB在強酸和強堿性時的吸光度，它們此時分別全部以[HB]或[B-]形式存在。HB＝H++B-[H+][B-]Ka

=[HB]pKa=pH+lg

[HB][B-]A=AHB+AB-pKa=pH+lg

AB--AA-AHBlg

AB--AA-

AHB對pH作圖即可求得pKa

412絡(luò)合物組成確定

飽和法（摩爾比法）制備一系列含釕3.0×10-5mol/L(固定不變)和不同濃度（小于12.0×10-5mol/L）的PDT溶液，按試驗條件，485nm測定吸光度,作圖。PDT:Ru=2:142等摩爾連續(xù)變更法固定[M]+[L],變更[M],獲得一系列吸光度