人教動(dòng)物細(xì)胞工程第1頁/共27頁高頻考點(diǎn)突破考點(diǎn)一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作流程2.考點(diǎn)解讀

(1)培養(yǎng)條件①無菌、無毒的環(huán)境——無菌處理、加抗生素殺菌、定期更換培養(yǎng)液。第2頁/共27頁②營養(yǎng)——葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽和微量元素+血清或血漿等天然成分。③溫度和pH——(36.5±0.5)℃和(7.2～7.4)。④氣體環(huán)境——95%空氣+5%CO2。

提醒

①CO2作用——調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH;②空氣中O2作用——細(xì)胞有氧呼吸;③所用裝置——CO2培養(yǎng)箱。

(2)原理：細(xì)胞增殖。

(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),一般選取幼齡動(dòng)物的組織、器官,其細(xì)胞的分化程序較低,增殖能力強(qiáng),有絲分裂旺盛,容易培養(yǎng)。第3頁/共27頁(4)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中,一般情況下10代以前的細(xì)胞核型不變,10代以后有些細(xì)胞核型發(fā)生改變,50代以后的細(xì)胞可能發(fā)生癌變。

(5)胰蛋白酶在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中的作用包括將組織分散成單個(gè)細(xì)胞,以及將貼壁細(xì)胞從瓶壁上分離下來,這樣做的目的是避免動(dòng)物細(xì)胞的接觸抑制現(xiàn)象。第4頁/共27頁3.應(yīng)用

(1)生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品：干擾素、疫苗、單克隆抗體。

(2)檢測(cè)并判斷某毒性物質(zhì)毒性的大小。

(3)臨床醫(yī)學(xué)研究。拓展提升

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的比較項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)相同點(diǎn)都需無菌條件;都進(jìn)行有絲分裂不同點(diǎn)原理細(xì)胞的增殖細(xì)胞的全能性培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基,動(dòng)物血清及其他營養(yǎng)物質(zhì)固體培養(yǎng)基,激素及其他營養(yǎng)物質(zhì)目的獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物等快速繁殖、培育無病毒植株等第5頁/共27頁對(duì)位訓(xùn)練1.關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述，正確的是()A.細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中

B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)素和動(dòng)物血清等

C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白

D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前和培養(yǎng)過程中都要用胰蛋白酶處理D第6頁/共27頁2.回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：（1）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面

時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是

。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是_______

。（2）隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性降低,

細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。相互接觸接觸抑制單層（或一層）胰蛋白酶衰老甚至死亡不死性減少第7頁/共27頁（3）現(xiàn)用某種大分子染料，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不染色，原因是

。（4）檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到

期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色（或由于死細(xì)胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)而著色）中第8頁/共27頁（5）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在________________

條件下保存細(xì)胞。因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中

的活性降低，細(xì)胞

的速率降低。（6）給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作

進(jìn)行攻擊。冷凍（或超低溫、液氮）酶新陳代謝抗原第9頁/共27頁考點(diǎn)二動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)與克隆動(dòng)物1.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)操作流程2.考點(diǎn)解讀

(1)原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性(不能說動(dòng)物細(xì)胞全能性)。

(2)卵母細(xì)胞選擇時(shí)期及原因減Ⅱ中期的卵母細(xì)胞,此時(shí)具備受精能力,細(xì)胞質(zhì)中合成與分裂分化有關(guān)的物質(zhì)能刺激融合后重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化,形成重組胚胎。第10頁/共27頁

(3)選卵細(xì)胞做受體細(xì)胞原因①大,易于操作；②卵黃多,營養(yǎng)豐富,為發(fā)育提供充足的營養(yǎng)；③激發(fā)重組細(xì)胞分裂分化。

(4)供體細(xì)胞：取供體動(dòng)物的體細(xì)胞培養(yǎng),一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞,因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型,保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。

(5)動(dòng)物體細(xì)胞不能經(jīng)培養(yǎng)直接發(fā)育成完整個(gè)體,

原因是動(dòng)物體細(xì)胞的全能性受到限制。用體細(xì)胞核移植技術(shù)能夠得到克隆動(dòng)物,說明動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。第11頁/共27頁

(6)該過程用到的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。

(7)核移植產(chǎn)生的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本不同原因：①克隆動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)基因來源于另一個(gè)親本。所以與植物組織培養(yǎng)不同(只來自于一個(gè)親本),克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來自2個(gè)親本。②在發(fā)育過程中可能發(fā)生基因突變,染色體變異導(dǎo)致性狀改變。③外界環(huán)境條件的影響引起不可遺傳的變異。第12頁/共27頁3.應(yīng)用及存在問題

(1)應(yīng)用：加速家畜遺傳改良進(jìn)程、促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育、保護(hù)瀕危物種、克隆器官用于移植等。

(2)存在問題①成活率低②克隆動(dòng)物的健康問題③克隆動(dòng)物食品的安全性問題。第13頁/共27頁對(duì)位訓(xùn)練4.下列哪項(xiàng)不屬于體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用（）

A.加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育

B.保護(hù)瀕危物種

C.獲得組織器官異體移植的供體

D.大量產(chǎn)生紫杉醇D第14頁/共27頁5.下列有關(guān)體細(xì)胞核移植技術(shù)的說法，不正確的是（）

A.體細(xì)胞核移植技術(shù)在多種動(dòng)物中獲得了成功，成功率非常高

B.克隆技術(shù)的各個(gè)環(huán)節(jié)有待于進(jìn)一步改進(jìn)

C.大多數(shù)克隆動(dòng)物還存在一些遺傳和生理缺陷類的健康問題

D.克隆動(dòng)物食品的安全性問題仍然存在爭(zhēng)議A第15頁/共27頁2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與

單克隆抗體一、動(dòng)物細(xì)胞融合二、單克隆抗體第16頁/共27頁考點(diǎn)三動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.單克隆抗體的操作流程第17頁/共27頁2.考點(diǎn)解讀

(1)誘導(dǎo)融合的2種細(xì)胞名稱及作用免疫過的B淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)——產(chǎn)生抗體;

骨髓瘤細(xì)胞——無限增殖。

(2)誘導(dǎo)融合與原生質(zhì)融合的不同方法動(dòng)物細(xì)胞誘導(dǎo)融合的特有方法——滅活病毒誘導(dǎo)。

(3)2次篩選的目的及方法①在特定的選擇性培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞

(漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)和融合的具有同種核的細(xì)胞(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞)都會(huì)死亡,只有融第18頁/共27頁

合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)才能生長(zhǎng)。這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖,又能產(chǎn)生單一的特異性抗體。②經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞(很多種雜交瘤細(xì)胞),需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選后就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。

(4)2個(gè)培養(yǎng)提取場(chǎng)所①體外培養(yǎng)——培養(yǎng)液提取。②體內(nèi)小鼠腹腔中培養(yǎng)——小鼠腹水中提取。第19頁/共27頁

提醒

取相應(yīng)B細(xì)胞前必需先注射相應(yīng)抗原,形象地說先“打針”,否則失敗。

(5)原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖。

拓展提升

植物體細(xì)胞雜交和單克隆抗體的制備的比較植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合(單克隆抗體的制備)理論基礎(chǔ)(原理)細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖融合前處理酶解法去除細(xì)胞壁(纖維素酶、果膠酶)注射特定抗原,免疫處理正常小鼠促融方法(1)物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等(2)化學(xué)法：聚乙二醇(PEG)(1)物、化法：與植物細(xì)胞融合相同

(2)生物法：滅活的病毒第20頁/共27頁過程第一步原生質(zhì)體的制備(酶解法)正常小鼠免疫處理第二步原生質(zhì)體的融合(物、化法)動(dòng)物細(xì)胞的融合(物、化、生法)第三步雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)第四步雜種植株的誘導(dǎo)與鑒定單克隆抗體的提純第21頁/共27頁意義和用途(1)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍(2)克服有性雜交的母系遺傳現(xiàn)象、獲得細(xì)胞質(zhì)基因的雜合子、研究細(xì)胞質(zhì)遺傳(1)制備單克隆抗體(2)診斷、治療、預(yù)防疾病。例如:單抗診斷盒、“生物導(dǎo)彈”治療癌癥第22頁/共27頁對(duì)位訓(xùn)練3.利用細(xì)胞工程方法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體

B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得大量針對(duì)SARS

病毒的單克隆抗體

C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞

D.利用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者D第23頁/共27頁解題思路探究思維誤區(qū)警示易錯(cuò)分析對(duì)克隆與組織培養(yǎng)、試管動(dòng)物(嬰兒)區(qū)分不清克隆組織培養(yǎng)試管動(dòng)物(嬰兒)生殖方式無性無性有性遺傳物質(zhì)來源2個(gè)親本1個(gè)親本2個(gè)親本性別決定提供核親本一般沒有精子類型用途優(yōu)良種畜快速繁育,可選擇性別快速繁殖無病毒植株解決不孕不育第24頁/共27頁糾正訓(xùn)練試管嬰兒、試管苗和克隆羊這三者可以說是現(xiàn)代生物科技的杰出成果,下列對(duì)其生物學(xué)原理及技術(shù)的敘述,正確的是()A.都屬于無性生殖

B.都利用了細(xì)胞工程的某些技術(shù)

C.都不會(huì)發(fā)生基因重組

D.都體現(xiàn)了已分化的細(xì)胞具有全能性B第25頁/共27