人教名校聯(lián)盟山東省新泰市二中學(xué)生物基因工程基本操作程序第1頁/共20頁基因工程的基本操作程序1.目的基因的獲取2.基因表達載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細胞4.目的基因的檢測與鑒定第2頁/共20頁目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等?；虿僮鞯幕静襟E一、提取目的基因——將需要的基因從供體生物

的細胞內(nèi)提取出來。供體生物細胞取出DNA用限制酶剪去多余部分目的基因限制酶第3頁/共20頁獲得目的基因的方法1.從基因文庫中獲取目的基因什么是基因文庫？什么是部分基因文庫？怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？第4頁/共20頁2.人工合成基因法——PCR擴增技術(shù)獲得目的基因的方法PCR(polymerasechainreaction)——聚合酶鏈式反應(yīng)是一項再生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。第5頁/共20頁PCR技術(shù)原理：前提：過程：PCR擴增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列目的基因DNA受熱變性，解鏈；引物與單鏈互補結(jié)合；合成鏈在DNA聚合酶作用下進行延伸。第6頁/共20頁二、基因表達載體的構(gòu)建——基因工程的核心基因操作的基本步驟目的：所需物質(zhì)：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。它們各自的作用是什么?第7頁/共20頁啟動子終止子標記基因復(fù)制原點目的基因表達載體第8頁/共20頁用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補配對后，在連接酶的作用下連接形成重組DNA分子。第9頁/共20頁三、將目的基因?qū)胧荏w細胞——轉(zhuǎn)化基因操作的基本步驟

基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細胞等。用人工的方法使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞，主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。目的基因?qū)胧荏w細胞后，就可以隨著受體細胞的繁殖而復(fù)制，由于細菌繁殖的速度非?？?，在很短的時間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。

第10頁/共20頁將目的基因?qū)胧荏w細胞并使之擴增導(dǎo)入擴增第11頁/共20頁將目的基因?qū)敫黝惣毎姆椒▽⒛康幕驅(qū)胫参锛毎麑⒛康幕驅(qū)雱游锛毎麑⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法顯微注射技術(shù)感受態(tài)細胞吸收DNA分子第12頁/共20頁農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法你能說說農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的大概過程嗎？根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？如果想將一個抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上你認為該怎么做？第13頁/共20頁顯微注射技術(shù)導(dǎo)入貯藏蛋白基因的超級羊和超級小鼠第14頁/共20頁將目的基因?qū)胛⑸锛毎?/p>

利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素。若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？第15頁/共20頁四、目的基因的檢測與鑒定檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)基因操作的基本步驟分子雜交技術(shù)第16頁/共20頁1）以下說法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體

C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接

D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來C練習(xí)第17頁/共20頁2)有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（）

A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來

B、限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得

C、目的基因須由運載體導(dǎo)入受體細胞

D、人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶