人員衛(wèi)生和微生物

基礎(chǔ)知識培訓(xùn)

當(dāng)前1頁，總共133頁。2023/3/111一、第二十九條所有人員都應(yīng)當(dāng)接受衛(wèi)生要求的培訓(xùn)，企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立人員衛(wèi)生操作規(guī)程，最大限度地降低人員對藥品生產(chǎn)造成污染的風(fēng)險。

GMP!!藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版當(dāng)前2頁，總共133頁。2023/3/112一、第二十條

凡在潔凈區(qū)工作的人員（包括清潔工和設(shè)備維修工）應(yīng)當(dāng)定期培訓(xùn)，使無菌藥品的操作符合要求。培訓(xùn)的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)包括衛(wèi)生和微生物方面的基礎(chǔ)知識。未受培訓(xùn)的外部人員（如外部施工人員或維修人員）在生產(chǎn)期間需進入潔凈區(qū)時，應(yīng)當(dāng)對他們進行特別詳細(xì)的指導(dǎo)和監(jiān)督GMP!!藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版無菌附錄當(dāng)前3頁，總共133頁。2023/3/113主要內(nèi)容一、人員衛(wèi)生二、微生物基礎(chǔ)知識當(dāng)前4頁，總共133頁。2023/3/114法規(guī)要求

第三十條人員衛(wèi)生操作規(guī)程應(yīng)當(dāng)包括與健康、衛(wèi)生習(xí)慣及人員著裝相關(guān)的內(nèi)容。生產(chǎn)區(qū)和質(zhì)量控制區(qū)的人員應(yīng)當(dāng)正確理解相關(guān)的人員衛(wèi)生操作規(guī)程。企業(yè)應(yīng)當(dāng)采取措施確保人員衛(wèi)生操作規(guī)程的執(zhí)行。

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前5頁，總共133頁。2023/3/115法規(guī)要求

第三十一條企業(yè)應(yīng)當(dāng)對人員健康進行管理，并建立健康檔案。直接接觸藥品的生產(chǎn)人員上崗前應(yīng)當(dāng)接受健康檢查，以后每年至少進行一次健康檢查

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前6頁，總共133頁。2023/3/116法規(guī)要求

第三十二條企業(yè)應(yīng)當(dāng)采取適當(dāng)措施，避免體表有傷口、患有傳染病或其他可能污染藥品疾病的人員從事直接接觸藥品的生產(chǎn)。

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前7頁，總共133頁。2023/3/117法規(guī)要求

體表傷口患有傳染?。?/p>

呼吸道傳染病：流行性感冒，肺結(jié)核，腮腺炎，麻疹，百日咳等（空氣傳播）

體表傳染?。貉x病，沙眼，狂犬病，破傷風(fēng)，淋病等（接觸傳播）

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前8頁，總共133頁。2023/3/118法規(guī)要求

其他可能污染藥品疾?。浩ぐ_、真菌感染的皮膚病等一、人員衛(wèi)生當(dāng)前9頁，總共133頁。2023/3/119法規(guī)要求

其他可能污染藥品疾?。浩ぐ_、真菌感染的皮膚病等一、人員衛(wèi)生當(dāng)前10頁，總共133頁。2023/3/1110法規(guī)要求

第三十三條

參觀人員和未經(jīng)培訓(xùn)的人員不得進入——生產(chǎn)區(qū)和質(zhì)量控制區(qū)，特殊情況確需進入的，應(yīng)當(dāng)事先對個人衛(wèi)生、更衣等事項進行指導(dǎo)。

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前11頁，總共133頁。2023/3/1111法規(guī)要求

第三十五條進入潔凈生產(chǎn)區(qū)的人員不得化妝和佩帶飾物。

一、人員衛(wèi)生當(dāng)前12頁，總共133頁。2023/3/1112摘下個人飾物：耳環(huán)、手表、戒指、項鏈等不得留長指甲提醒：進入潔凈區(qū)人員不得化妝，否則需清洗去除化妝品當(dāng)前13頁，總共133頁。2023/3/1113一、人員衛(wèi)生人體是一個永不休止的污染媒介。人是藥廠中最不清潔的成份，是最大的污染源。我體檢過了,沒問題!當(dāng)前14頁，總共133頁。2023/3/1114

人類是第一的(主要)污染源。人們每24小時就會脫落皮膚表面上最外層的皮細(xì)胞。這等于每天高達109（1000，000，000）=10億個細(xì)胞的數(shù)量。當(dāng)前15頁，總共133頁。2023/3/1115人帶來的污染來源人的頭發(fā)和皮膚液滴衣著化妝品和珠寶手飾人的操作（生產(chǎn)過程中人員不當(dāng)?shù)牟僮魉鸬幕祀s和誤差）

當(dāng)前16頁，總共133頁。2023/3/1116人是

最大的

污染源人體內(nèi)外表面廣泛存在微生物人體攜帶的微生物根據(jù)衛(wèi)生情況不同因人而異當(dāng)前17頁，總共133頁。2023/3/1117未洗的手清水漂洗的手當(dāng)前18頁，總共133頁。2023/3/1118洗凈的手洗凈的手

(用皂液)(用消毒劑)當(dāng)前19頁，總共133頁。2023/3/1119難以覺察的口腔微滴（說話、噴嚏）人是最大的

污染源當(dāng)前20頁，總共133頁。2023/3/1120坐著不動能產(chǎn)生10萬個顆粒走能產(chǎn)生500萬個顆粒跑能產(chǎn)生1500萬個顆粒人是最大的污染源當(dāng)前21頁，總共133頁。2023/3/1121人是第一的(主要)污染源。怎么辦？當(dāng)前22頁，總共133頁。2023/3/1122根據(jù)污染源查找解決方法當(dāng)前23頁，總共133頁。2023/3/1123工作服及其質(zhì)量應(yīng)當(dāng)與生產(chǎn)操作的要求及操作區(qū)的潔凈度級別相適應(yīng)，其式樣和穿著方式應(yīng)當(dāng)能夠滿足------保護產(chǎn)品和人員的要求。法規(guī)要求：附錄第二十四條當(dāng)前24頁，總共133頁。2023/3/1124人是第一的(主要)污染源。清洗、包裹

根據(jù)不同潔凈區(qū)要求，穿戴不同衣服當(dāng)前25頁，總共133頁。2023/3/1125人是第一的(主要)污染源。包裹物件包括：帽子、口罩、眼罩、無菌服、鞋子/鞋套、手套當(dāng)前26頁，總共133頁。2023/3/1126解決方法

人的頭發(fā)和皮膚

清洗、包裹當(dāng)前27頁，總共133頁。2023/3/1127第一步：

用清水潤濕雙手及手腕以上10厘米洗手當(dāng)前28頁，總共133頁。2023/3/1128第二步：

均勻涂上洗手液洗手當(dāng)前29頁，總共133頁。2023/3/1129第三步：

掌心相對，手指并攏相互摩擦

洗手當(dāng)前30頁，總共133頁。2023/3/1130第四步：手心對手背沿指縫相互摩擦交換進行

洗手當(dāng)前31頁，總共133頁。2023/3/1131第五步：

掌心相對，雙手交叉，沿指縫相互摩擦

洗手當(dāng)前32頁，總共133頁。2023/3/1132第六步：彎曲各手指關(guān)節(jié)，在另一手掌旋轉(zhuǎn)搓擦，交換進行

洗手當(dāng)前33頁，總共133頁。2023/3/1133第七步：一手握另一手大拇指旋轉(zhuǎn)搓擦，交換進行

洗手當(dāng)前34頁，總共133頁。2023/3/1134第八步：搓洗手腕，交換進行。

洗手當(dāng)前35頁，總共133頁。2023/3/1135第九步：將手及手腕用水沖洗干凈，最后才可以用干凈的手將干凈的水龍頭關(guān)掉。洗手當(dāng)前36頁，總共133頁。2023/3/1136第十步：然后在烘手器下吹干洗手當(dāng)前37頁，總共133頁。2023/3/1137洗手手的細(xì)菌對照實驗當(dāng)前38頁，總共133頁。2023/3/1138未洗的手漂洗的手

(只用清水)當(dāng)前39頁，總共133頁。2023/3/1139洗凈的手洗凈的手

(用皂液)(用消毒劑)當(dāng)前40頁，總共133頁。2023/3/1140從上到下需要將頭發(fā)、胡須等相關(guān)部位遮蓋、包裹。穿上合適的鞋子和/或鞋套。確保包裹效果。避免帶入潔凈區(qū)外的污染物更潔凈衣當(dāng)前41頁，總共133頁。2023/3/1141萬級更衣：連體服須將鞋套套好，

戴上手套，手套將袖口包裹更潔凈衣當(dāng)前42頁，總共133頁。2023/3/1142法規(guī)要求：附錄第二十四條正確穿戴潔凈服，必須包蓋全部頭發(fā)、胡須及腳部，并能阻留人體脫落物；口罩要罩住口鼻；潔凈鞋應(yīng)能遮蓋住全腳。并定期按規(guī)定清洗。離開潔凈室，必須脫掉潔凈服裝。

當(dāng)前43頁，總共133頁。2023/3/1143更衣頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)YESNONO當(dāng)前44頁，總共133頁。2023/3/1144潔凈區(qū)更衣不能配戴手表、首飾當(dāng)前45頁，總共133頁。2023/3/1145更衣YESNO鞋套不能有破損當(dāng)前46頁，總共133頁。2023/3/1146定時或在任何關(guān)鍵操作前，應(yīng)消毒手套當(dāng)前47頁，總共133頁。2023/3/1147填寫批記錄后，手套應(yīng)消毒當(dāng)前48頁，總共133頁。2023/3/1148主要內(nèi)容一、人員衛(wèi)生二、微生物基礎(chǔ)知識當(dāng)前49頁，總共133頁。2023/3/1149微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、可以導(dǎo)致產(chǎn)品腐敗變質(zhì)、成品不合格的重要因素。當(dāng)前50頁，總共133頁。2023/3/1150微生物的危害當(dāng)前51頁，總共133頁。2023/3/1151微生物的危害當(dāng)前52頁，總共133頁。2023/3/1152

在藥品生產(chǎn)過程中，根據(jù)GMP中潔凈度級別要求以及產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，對物料、產(chǎn)品、生產(chǎn)環(huán)境需進行控制的污染（有害）微生物主要為

細(xì)菌和真菌（霉菌、酵母菌）。藥品生產(chǎn)需控制的微生物當(dāng)前53頁，總共133頁。2023/3/1153微生物五大共性體積小，面積大；吸收多，轉(zhuǎn)化快；生長旺，繁殖快；適應(yīng)強，易變異；分布廣，種類多；當(dāng)前54頁，總共133頁。2023/3/1154微生物的概念

是所有形體微小，單細(xì)胞或個體結(jié)構(gòu)較為簡單的多細(xì)胞，甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物的通稱。肉眼不能直接觀察到微生物，必須經(jīng)光鏡或電鏡放大幾百倍，乃至幾萬倍方能看到。當(dāng)前55頁，總共133頁。2023/3/1155微生物的分類微生物類群十分龐雜，主要包括細(xì)菌、放線菌、真菌（霉菌、酵母菌）、立克次體、螺旋體、枝原體、衣原體與病毒等，還包括顯微藻類和原生動物。當(dāng)前56頁，總共133頁。2023/3/1156幾種微生物的比較當(dāng)前57頁，總共133頁。2023/3/1157細(xì)菌的大小圖

當(dāng)前58頁，總共133頁。2023/3/1158細(xì)菌的繁殖

(1)充足的營養(yǎng)物質(zhì)（碳源、氮源、無機鹽、水）(2)適宜的酸堿度(3)合適的溫度(4)必要的氣體環(huán)境（CO2和氧氣）

生長繁殖的條件

當(dāng)前59頁，總共133頁。2023/3/1159繁殖最適條件對比當(dāng)前60頁，總共133頁。2023/3/1160微生物的分類按細(xì)胞結(jié)構(gòu)的有無，可分為兩大類群非細(xì)胞型微生物（不具細(xì)胞結(jié)構(gòu)）

無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，由單一核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)衣殼組成，必須在活細(xì)胞內(nèi)增殖。如：病毒、噬菌體、類病毒和朊病毒當(dāng)前61頁，總共133頁。2023/3/1161烈性噬菌體生活周期概要當(dāng)前62頁，總共133頁。2023/3/1162埃博拉病毒

virus-ebola噬菌體當(dāng)前63頁，總共133頁。2023/3/1163禽流感病毒當(dāng)前64頁，總共133頁。2023/3/1164流感病毒

virus-influenza當(dāng)前65頁，總共133頁。2023/3/1165微生物的分類細(xì)胞型微生物原核細(xì)胞型：單細(xì)胞生物，細(xì)胞核分化程度低，只有DNA盤繞而成的擬核，無核仁和核膜。如：細(xì)菌、放線菌、螺旋體、立克次體、衣原體、枝原體等當(dāng)前66頁，總共133頁。2023/3/1166細(xì)菌的形態(tài)當(dāng)前67頁，總共133頁。2023/3/1167大腸埃希菌

Escherichiacoli

金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus當(dāng)前68頁，總共133頁。2023/3/1168沙門菌Salmonella銅綠假單孢菌

Pseudomonasaeruginosa當(dāng)前69頁，總共133頁。2023/3/1169枯草芽孢桿菌

Bacillussubtilis生孢梭菌

Clostridium

當(dāng)前70頁，總共133頁。2023/3/1170放線菌當(dāng)前71頁，總共133頁。2023/3/1171細(xì)菌的繁殖二分裂的無性繁殖（即裂殖，通過細(xì)胞分裂的方式繁殖）一般細(xì)菌約20~30分鐘繁殖一代

細(xì)菌的繁殖方式

當(dāng)前72頁，總共133頁。2023/3/1172<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖桿菌二分裂過程模式圖當(dāng)前73頁，總共133頁。2023/3/1173細(xì)菌的繁殖速度細(xì)菌一般每20-30分鐘即可分裂一次當(dāng)前74頁，總共133頁。2023/3/1174勾端螺旋體當(dāng)前75頁，總共133頁。2023/3/1175立克次體（rickettsiae）

一種微小的寄生的細(xì)菌。

右圖是動物的淋巴細(xì)胞，紅色的是寄生的立克次體。當(dāng)前76頁，總共133頁。2023/3/1176衣原體

姬姆薩染色，油鏡10*100，見到一個大單核細(xì)胞，胞漿內(nèi)有球形和橢圓形的包含體——衣原體。當(dāng)前77頁，總共133頁。2023/3/1177枝原體掃描電鏡圖片枝原體（mycoplasma）以前被認(rèn)為是最小的能獨立存活的原核生物，以前也被認(rèn)為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細(xì)胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著枝原體。當(dāng)前78頁，總共133頁。2023/3/1178微生物的分類細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型：細(xì)胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色體，能進行有絲分裂。如：真菌（酵母菌、念珠菌、霉菌）、藻類等。當(dāng)前79頁，總共133頁。2023/3/1179真菌單細(xì)胞：呈圓形或卵圓形。如酵母菌、白色念珠菌。多細(xì)胞：由菌絲和孢子組成，并交織成團，稱絲狀菌或霉菌。結(jié)構(gòu)復(fù)雜，個體較大的，如蘑菇。當(dāng)前80頁，總共133頁。2023/3/1180真菌：酵母菌形態(tài)：通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀和香腸狀等。結(jié)構(gòu)：當(dāng)前81頁，總共133頁。2023/3/1181酵母菌當(dāng)前82頁，總共133頁。2023/3/1182酵母菌繁殖方式

無性繁殖——芽殖(主要方式)、

裂殖

有性繁殖——產(chǎn)生子囊孢子

當(dāng)前83頁，總共133頁。2023/3/1183白色念珠菌當(dāng)前84頁，總共133頁。2023/3/1184霉菌Mold是一些絲狀真菌的通稱，其菌體由分枝或不分枝的菌絲構(gòu)成，許多菌絲交織成團。

大小：菌絲直徑約2~10μm，比一般的桿菌及放線菌菌絲約寬幾到幾十倍。

當(dāng)前85頁，總共133頁。2023/3/1185黑曲霉可引起燒傷病人皮膚感染或真菌性肺部感染當(dāng)前86頁，總共133頁。2023/3/1186青霉菌及其菌落當(dāng)前87頁，總共133頁。2023/3/1187霉菌繁殖方式無性繁殖——無性孢子繁殖（最常見），菌絲也可延伸、分枝而生長。有性繁殖——有性孢子繁殖（不常見）當(dāng)前88頁，總共133頁。2023/3/1188霉菌繁殖方式當(dāng)前89頁，總共133頁。2023/3/1189因為孢子繁殖是霉菌的主要繁殖方式，孢子數(shù)量大，具一定抗性，繁殖能力極強,一條菌絲可產(chǎn)生很多個孢子，孢子又可生長發(fā)育為菌絲，所以潔凈室一旦發(fā)生霉菌污染，必須立即采取措施，否則擴散越廣越難控制。真菌對熱的抵抗力不強，一般加熱60～70℃1小時即被殺死，對干燥、日光、紫外線和一些化學(xué)消毒劑有抵抗力，但對2.5％碘酒、10％甲醛、過氧乙酸則較敏感。當(dāng)前90頁，總共133頁。2023/3/1190芽孢某些細(xì)菌到一定的生長階段，在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形、橢圓形或圓柱形的、對不良環(huán)境條件具較強抗性的休眠體，稱為芽孢。能形成芽孢的細(xì)菌均為G+菌。當(dāng)前91頁，總共133頁。2023/3/1191芽孢在條件適宜時，芽孢可形成新的菌體。一個細(xì)菌只形成一個芽孢，一個芽孢也只能形成一個菌體。芽孢的形成不是細(xì)菌的繁殖方式，而是營養(yǎng)缺乏的一種反應(yīng)，是細(xì)菌的休眠狀態(tài)。與芽孢相比，未形成芽孢而具有繁殖能力的菌體稱為繁殖體。當(dāng)前92頁，總共133頁。2023/3/1192芽孢的特征含水量低（40%）不易著色有多層厚而致密的膜結(jié)構(gòu)（壁）含有2,6-吡啶二羧酸（DPA）及耐熱性很強的酶當(dāng)前93頁，總共133頁。2023/3/1193微生物及無菌知識培訓(xùn)一、前言

我們所生活的環(huán)境中，到處都存在著大量的微生物。在一般空氣中，微生物達800~3500個/m3，在土壤中達1~500×108個/g，在嚴(yán)重污染的水中可達107個/ml。（飲用水要求細(xì)菌總數(shù)≤100個/ml，大腸桿菌≤3個/ml。經(jīng)水塔或貯水池貯存后，短期內(nèi)可繁殖至105~106個/ml。）人的頭皮上有140萬個/cm2，兩手上約有4~40萬個，1g指甲污垢有38億個，1g糞便可達10~1000億個。可以說微生物是無處不在，無處不有。許多以前被人們認(rèn)為是極端（高溫、高壓、強酸、強堿、低溫等）甚至是致死的環(huán)境，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著各種類型的微生物（稱為極端微當(dāng)前94頁，總共133頁。2023/3/1194生物）。事實說明，微生物有特別頑強的生存、繁殖和變異能力來適應(yīng)環(huán)境。

微生物種類繁多，有的對人有益，有的有害，有的無益也無害。但在藥品生產(chǎn)過程中，不可能對環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對待，為保證藥品的安全有效，需要對其進行控制?？諝庵械奈⑸锒鄶?shù)附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1μm以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會逐漸沉下來而形成菌塵。所以也要對塵粒進行控制。

大量臨床資料表明，注射劑（尤其是靜脈注射劑）如污染了7~12μm的塵粒，可導(dǎo)致熱原反應(yīng)、肺動脈炎、微血栓或異物肉芽腫等，嚴(yán)重的還會致人死命。而如果污染了細(xì)菌，輕則局部紅腫化膿，重則引起全身細(xì)菌性感當(dāng)前95頁，總共133頁。2023/3/1195染。因此，對微生物和塵粒進行更加嚴(yán)格的控制對于針劑生產(chǎn)潔凈室非常重要。

人是潔凈室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分鐘向周圍排放1000個以上的含菌粒子，女性為750個以上。穿無菌服時，靜止時的發(fā)菌量為10~300個/min，一般活動時發(fā)菌量為150~1000個/min，行走時發(fā)菌量為900~2500個/min。咳嗽一次發(fā)菌量為70~700個/min，噴嚏一次為4000~60000個/min。所以在潔凈室中，人的數(shù)量和活動應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。

二．微生物簡介

當(dāng)前96頁，總共133頁。2023/3/1196微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微小（直徑小于1mm）、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須藉助光學(xué)或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬倍才能觀察到的生物。需要說明的是，微生物是一個比較籠統(tǒng)的概念，界線有時非常模糊。如單細(xì)胞藻類和一些原生動物也應(yīng)算是微生物，但通常它們并不放在微生物中進行研究。

微生物具有以下特點：①體積小，面積大；②吸收多，轉(zhuǎn)化快（2000倍體重/h）；③生長旺，繁殖快（20min分裂一次）；④易變異，適應(yīng)強；⑤分布廣，種類多（10萬種以上）。

微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等差異可分成三大類：

1．真核細(xì)胞型細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞質(zhì)內(nèi)有完整的細(xì)胞當(dāng)前97頁，總共133頁。2023/3/1197器（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線粒體等）。真菌屬于此類型微生物。

2．原核細(xì)胞型細(xì)胞核分化程度低，僅有原始核質(zhì)，沒有核膜與核仁；細(xì)胞器不很完善。這類微生物種類眾多，有細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。

3．非細(xì)胞型沒有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，亦無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)生長繁殖。體積微小，能通過除菌濾器。病毒屬于此類型微生物。

微生物在自然界中的分布極為廣泛，空氣、土壤、江河、湖泊、海洋等都有數(shù)量不等、種類不一的微生物存在。在人類、動物和植物的體表及其與外界相通的腔道中也有多種微生物存在。

當(dāng)前98頁，總共133頁。2023/3/1198絕大多數(shù)微生物對人類和動、植物的生存是有益而必需的。自然界中氮、碳、硫等多種元素循環(huán)靠微生物的代謝活動來進行。例如空氣中的大量氮氣只有依靠微生物的作用才能被植物吸收，土壤中的微生物能將動、植物蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為無機含氮化合物，以供植物生長的需要，而植物又為人類和動物所利用。因此，沒有微生物，植物就不能新陳代謝，而人類和動物也將無法生存。

另一方面，由極少數(shù)微生物引起的傳染病發(fā)病快、死亡率高、傳播迅速、傳播范圍廣，嚴(yán)重危害著人民健康。

三．微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)

當(dāng)前99頁，總共133頁。2023/3/11991．細(xì)菌（原核單細(xì)胞生物）

細(xì)菌按形狀可分為：球菌（0.5~2μm）、桿菌（長1~5μm，寬0.3~1μm）和螺形菌（大小與桿菌相似）。

按革蘭氏染色法染色的不同，分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁表面含較多的磷壁酸，會產(chǎn)生外毒素，如金黃色葡萄球菌；革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁表面多含脂蛋白和脂多糖，會產(chǎn)生內(nèi)毒素（即熱原），如大腸桿菌。

細(xì)菌一般有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，有的還有莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊結(jié)構(gòu)。

細(xì)菌一般為無性繁殖，以二分法繁殖，幾十分鐘或1~2小時分裂一次。

當(dāng)前100頁，總共133頁。2023/3/11100資料：關(guān)于芽孢

在溫度逐漸降低或營養(yǎng)缺乏時，芽胞桿菌屬（如炭疽桿菌）及梭狀芽胞桿菌屬（如破傷風(fēng)桿菌）能在菌體內(nèi)形成一個折光性很強的不易著色小體，稱為芽胞。芽胞是處于休眠狀態(tài)的細(xì)菌，并非細(xì)菌的繁殖體，當(dāng)環(huán)境適宜時，可恢復(fù)生長繁殖。

芽胞在自然界分布廣泛，要注意防止污染。芽胞的抵抗力強，對熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等理化因素均有強大的抵抗力，用一般的方法不易將其殺死。有的芽胞可耐100℃沸水煮沸數(shù)小時。殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。當(dāng)進行消毒滅菌時往往以芽胞是否被殺死作為判斷滅菌效果的指標(biāo)。

2．霉菌（絲狀真菌的通稱，真核多細(xì)胞生物）

當(dāng)前101頁，總共133頁。2023/3/11101霉菌是真菌的一部分。在培養(yǎng)基上長成絨毛狀或棉絮狀的菌絲體的真菌統(tǒng)稱為霉菌。

霉菌細(xì)胞呈狹長的管狀，稱為菌絲。菌絲直徑比細(xì)菌、放線菌大，約2~10μm。菌絲分枝連接，交錯集合在一起的總體稱為菌絲體。

霉菌大多數(shù)是多細(xì)胞微生物，菌絲細(xì)胞由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和各種細(xì)胞器組成。細(xì)胞壁很薄，往往在表面產(chǎn)生色素，使菌落出現(xiàn)各種顏色。

霉菌靠孢子繁殖，有無性繁殖和有性繁殖兩種方式，以無性繁殖為主。

有些真菌可用釀酒造醬，或用于發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸、葡萄糖酸、酶、抗生素（如青霉素、頭孢菌素）；少數(shù)真菌能引起各種真菌病。真菌產(chǎn)生的真菌毒素（如黃曲霉素）有毒。

當(dāng)前102頁，總共133頁。2023/3/111023．酵母菌（真核單細(xì)胞生物，屬真菌）

酵母菌以單細(xì)胞存在，呈圓形、卵圓形和香腸形，比細(xì)菌大，細(xì)胞長5~30μm，寬1~5μm。細(xì)胞結(jié)構(gòu)有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和各種細(xì)胞器等。

酵母菌的增殖分無性繁殖和有性繁殖兩個階段，有三種方式：芽殖、裂殖、孢子生殖。

酵母菌是重要的工業(yè)微生物，用于釀酒，生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白、B族維生素、核酸、輔酶A、細(xì)胞色素C等。一般對人體無害。

4．放線菌（原核單細(xì)胞生物）

放線菌有生長發(fā)育良好的菌絲體，呈分枝狀，菌絲寬為0.2~1.2μm，革蘭氏陽性。其內(nèi)部構(gòu)造與細(xì)菌相似，無完整的細(xì)胞核。菌落常呈幅射狀，因此稱放線菌。

當(dāng)前103頁，總共133頁。2023/3/11103繁殖方式為無性孢子繁殖。最適pH6.7~7.5，溫度25~30℃。

放線菌可用于生產(chǎn)抗生素、維生素和酶類，少數(shù)可引起人畜放線菌病。

5．病毒

病毒是一類體積十分微小，結(jié)構(gòu)簡單，只含一種核酸（DNA或RNA），沒有產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。病毒在自然界分布非常廣泛，在所有其它生物中都有病毒寄居。病毒是最常見的致病微生物，人類傳染病中大約75%是由病毒引起的。

病毒體主要由核酸和蛋白質(zhì)組成。病毒體積微小，最大直徑300nm（如牛痘病毒），最小直徑20nm（如口蹄疫病毒），絕大多數(shù)在當(dāng)前104頁，總共133頁。2023/3/11104150nm以下，能通過細(xì)菌濾器，用普通光學(xué)顯微鏡看不見，必須用電子顯微鏡放大數(shù)千至數(shù)萬倍才能看見。形態(tài)多呈球形，少數(shù)為桿狀或磚形。噬菌體（細(xì)菌病毒）有呈蝌蚪狀的。

朊病毒于1982年發(fā)現(xiàn)，它很特殊，與一般病毒不同，是一種異常蛋白質(zhì)，不含有核酸。與瘋牛?。ㄅ：＞d狀腦病）及人克雅氏病關(guān)系密切。其復(fù)制方式不明。

四．微生物的營養(yǎng)

1．水分：水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分。較普遍的觀點認(rèn)為：只有當(dāng)前105頁，總共133頁。2023/3/11105在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L期存活。

2．碳源：碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自有機碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機酸等（同時利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需有機碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。

3．氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。

4．無機鹽類：細(xì)菌所需無機鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。

5．生長因子：生長因子是某些微生物生長發(fā)當(dāng)前106頁，總共133頁。2023/3/11106育所必需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶等。五．微生物生長的影響因素

1．營養(yǎng)物

2．pH值：各種微生物都有其最適宜的pH值，大多數(shù)細(xì)菌最適pH為6.8~7.4，但一般有較大的容忍度，在4~9也可存活和生長，少數(shù)細(xì)菌能在極端pH值范圍內(nèi)生長。真菌適于pH值3~6的微酸性環(huán)境，但在2~10也可生長。

3．溫度：微生物適于生長繁殖要有適宜的溫度，當(dāng)超過其最低或最高可耐受的溫度時，即停止生長或死亡。一般細(xì)菌最適溫度為當(dāng)前107頁，總共133頁。2023/3/1110730~40℃，真菌為20~30℃。

4．氧氣：大多數(shù)細(xì)菌和所有霉菌都是需氧菌（在有氧環(huán)境中才能生長），少數(shù)細(xì)菌是厭氧菌（在無氧環(huán)境中才能生長），有些細(xì)菌和酵母菌是兼性需氧厭氧的，在有氧或無氧環(huán)境中都能生長繁殖。

5．滲透壓：微生物細(xì)胞膜和所有生物膜一樣是一種半透膜，可讓水自由通過，對溶質(zhì)則有選擇性。由于細(xì)胞壁的保護，微生物能存活在低滲透壓的水中。而在高滲溶液（如高濃度的鹽溶液或糖溶液、40%甘油）中，細(xì)胞會脫水并停止生長繁殖。但也有一些專性耐高鹽細(xì)菌只有在高鹽（10~15%）條件下才生長。

6．表面張力：表面活性劑可降低表面張力當(dāng)前108頁，總共133頁。2023/3/11108它是影響細(xì)菌生長的因素之一。很多革蘭氏陰性菌，特別是大腸菌群可很好地在表面活性劑包圍的介質(zhì)中生長，而大多數(shù)革蘭氏陽性菌在表面張力低時（0.05N/m）不能很好生長。陽離子表面活性劑對很多有機體有毒性，陰離子表面活性劑毒性很小，非離子表面活性劑幾乎沒有毒性，并可成為某些微生物的營養(yǎng)物。

六．消毒與滅菌

消毒與滅菌是微生物實驗技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗的人員都應(yīng)當(dāng)了解消毒與滅菌的方法及其意義，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則會影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。

1．概念

當(dāng)前109頁，總共133頁。2023/3/111091．概念

無菌——不存在活的生物（GMP指南）。

“無菌”從定義上來說是一個絕對的概念，但遺憾的是，在科學(xué)和技術(shù)高度發(fā)展的今天，藥品的絕對無菌即做不到，也無法加以證實。然而，無菌制劑的安全性要求人們設(shè)定無菌的相對標(biāo)準(zhǔn)。

FDA、歐洲制藥工業(yè)界曾將百萬分之一微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無菌”的相對標(biāo)準(zhǔn)，它和蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物存活的概率為10-6（即產(chǎn)品的無菌保證值為6），系同一標(biāo)準(zhǔn)的不同表示法。這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USPXX中，如今已為世界各國普遍接受和采用。

滅菌——使達到無菌狀態(tài)的方法（GMP指南當(dāng)前110頁，總共133頁。2023/3/11110南）。用物理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物，使其達到無菌（GB）。通常是指殺滅或除去全部活的微生物（包括繁殖體和芽孢）。

消毒——用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達到無害化（GB）。通常是指殺死病原微生物的繁殖體，但不能破壞其芽孢。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。

無菌制劑——不存在活的微生物的制劑（GMP指南）。

非無菌制劑——所含活的微生物量符合衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的制劑（GMP指南）。

2．常用消毒劑

消毒劑

常用量

用途

當(dāng)前111頁，總共133頁。2023/3/11111乙醇

①70%~75%水溶液

②0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油

用于皮膚、器具等消毒

供洗手用消毒

異丙醇

75%水溶液

用于皮膚、器具等消毒

甲醛

37%~40%甲醛液8~9ml，再加入4~5g高錳酸鉀

每m3熏蒸量，密閉12~24h。刺激性強

戊二醛

2%水溶液

用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒。刺激性較輕。

新潔爾滅（苯扎溴銨）

0.1%水溶液

用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效。抗菌譜較窄。

當(dāng)前112頁，總共133頁。2023/3/11112杜滅芬（消毒寧）

0.05%~0.1%水溶液

用于皮膚、器具等消毒

過氧乙酸

①0.2%~0.5%水溶液

②新配0.5%水溶液

③1g/m3

用于器具等消毒抗菌譜廣，可

用于皮膚消毒殺滅某些病毒

熏蒸但性質(zhì)不穩(wěn)定

乳酸

①0.33~1mol/L

②1~1.5ml/m3熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸

噴霧，用于空氣消毒，有強殺菌作用

熏蒸，密閉12h以上

麝香草酚

5%麝香草酚溶于50%乙醇

噴灑墻面、地面，殺霉菌

當(dāng)前113頁，總共133頁。2023/3/111133．常用滅菌法

1）干熱滅菌法常見的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等。

①火焰、燒灼：通常用于實驗室無菌操作中金屬或其它耐火材料制成的器具的滅菌。

②干烤和紅外線：利用干熱空氣或熱輻射進行滅菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需2h以上，170~180℃需1h以上，180~200℃需0.5~1h。除熱原則需250℃30min，或200℃45min，180℃2h。

空氣傳熱慢，穿透力不強，故干熱滅菌時間長。干熱滅菌時烤箱內(nèi)裝入物品應(yīng)留有空隙，以利空氣流動，否則使箱內(nèi)溫度不均，部分物品滅菌不徹底。

當(dāng)前114頁，總共133頁。2023/3/111142）濕熱滅菌法通過熱蒸汽或沸水使蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。濕熱穿透力強，滅菌效果較干熱好。

①煮沸或流通蒸汽滅菌：常壓下沸水和蒸汽的溫度是100℃，一般處理30~60min可殺死細(xì)菌繁殖體，但不能完全殺滅芽孢。此法適用于不能高壓蒸汽滅菌的物品。

②低溫間隙滅菌（巴斯德滅菌法）：將物品先用60~80℃加熱（或煮沸）1h，然后置20~25℃保存24h（或常溫過夜），使其中殘存的芽孢萌發(fā)成繁殖體，再用以上條件滅菌，如此反復(fù)三次。本法適用于不耐高溫或高溫下易變質(zhì)的物品，但很費時。

③高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌法）：超過一個大氣壓時，水的沸點高于100℃，反之亦然。當(dāng)前115頁，總共133頁。2023/3/11115高壓蒸汽滅菌就是通過加壓提高蒸汽溫度，滅菌效果最好。它簡便、經(jīng)濟、可靠、無毒，是最可靠、應(yīng)用最廣泛的滅菌法。此法適用于耐高溫和潮濕的物品。常用條件為：

115.5℃

30min

121.5℃

20min

126.5℃

15min

注意事項：

a.必須完全排出滅菌器內(nèi)的空氣。否則會影響滅菌器內(nèi)溫度達到規(guī)定的要求。

b.注意被滅菌物品的溫度。滅菌器內(nèi)溫度與被滅菌物品的溫度一般是一致的，但在蒸汽輸入過快時，后者可能低于前者，所以升溫時要有一定的預(yù)熱時間。另外，降溫過快易引起玻璃炸裂。因此，對于一種滅菌產(chǎn)品，當(dāng)前116頁，總共133頁。2023/3/11116應(yīng)制定一固定的滅菌曲線（象凍干曲線一樣）。

c.定期檢查滅菌器內(nèi)溫度的準(zhǔn)確性。

3）化學(xué)滅菌法利用化學(xué)試劑形成的氣體來殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑為環(huán)氧乙烷（又稱氧化乙烯）。環(huán)氧乙烷是廣譜殺菌劑，能殺滅細(xì)菌、芽孢和多種病毒，還能殺死昆蟲及蟲卵。但由于環(huán)氧乙烷易燃易爆且有毒（有致變異性），用于藥品方面極有限，多用于醫(yī)療器械、塑料制品等滅菌。（不能用于橡膠和乳膠手套，能將其溶解。）

4）濾過除菌法利用細(xì)菌不能通過致密具孔濾材的原理，除去對熱不穩(wěn)定的藥品溶液或液體物質(zhì)中的細(xì)菌的方法。過濾法一般只能除菌，不能除去支原體和病毒。

當(dāng)前117頁，總共133頁。2023/3/11117過濾除菌的效果與濾膜的性能、孔徑的大小、密度、濾膜的厚度等因素有關(guān)。

濾過除菌法要求最終過濾的濾膜孔徑為0.22μm。由于各廠家生產(chǎn)的相同規(guī)格的濾膜質(zhì)量并不一致，為了保證除菌效果，在使用前后應(yīng)檢查濾器的完好性（如壓力維持試驗或起泡點試驗）。

一個過濾器的使用時間應(yīng)根據(jù)品種驗證后確定，一般不應(yīng)超過8小時。

5）輻射滅菌法輻射有兩種類型：一種是電磁波輻射，如紫外線、紅外線、微波；一種是電離輻射，如可引起被照射物電離的X射線、γ射線。

①紫外線：紫外光波長在136~390nm之間，其中260nm左右能破壞核酸，殺菌作用最強。當(dāng)前118頁，總共133頁。2023/3/11118另外，空氣中的氧受紫外線照射后，可微量轉(zhuǎn)變?yōu)槌粞豕餐饸⒕饔?。紫外線消毒的效果與光源的功率、光源與被照射物的距離、照射時間、溫度和濕度等因素有關(guān)。我國規(guī)定紫外燈照射強度在距離1m處不低于70μW/cm2（以紫外線測強儀測定）。在操作面上要求強度達40μW/cm2以上。一般每10m2裝30W燈管1支，工作前開30~60min。

紫外燈的輸出功率隨使用時間增加而降低。國產(chǎn)紫外燈的平均壽命（點到70%額定功率的時間）一般為2000h，超過平均壽命時，就達不到預(yù)期效果，必須更換。

紫外線的穿透力很弱，不能穿透一般包裝材料，如玻璃、塑料薄膜、紙等。玻璃能強烈吸收小于350nm的紫外線，石英玻璃能吸收當(dāng)前119頁，總共133頁。2023/3/11119小于200nm的紫外線。因此，它主要用于空氣和物體表面消毒，特制的紫外燈裝置也可用于水的消毒。

紫外線對眼、皮膚有損壞，照射過程中產(chǎn)生的臭氧對眼、鼻腔有刺激，臭氧過多時使人頭暈、胸悶、血壓下降。

②紅外線：通過加熱碳化硅板產(chǎn)生的輻射熱能，由空氣傳導(dǎo)加熱滅菌。如紅外線烤箱，溫度可達180℃左右。熱效應(yīng)特點是由表及里。

③微波：微波滅菌主要是因其熱效應(yīng)。微波加熱升溫快，溫度高且均勻，殺菌作用強。熱效應(yīng)特點是由里及表。不同性質(zhì)的物品吸收微波的能力不同，其熱效應(yīng)和消毒效果也不同。

當(dāng)前120頁，總共133頁。2023/3/11120微波有一定穿透力，但不強。微波對人體有害，要注意防護。

④60Co滅菌：放射性同位素60Co（或137Cs）衰變時可放射出γ射線，γ射線的能量高、穿透力強，可使細(xì)胞內(nèi)各種活性物質(zhì)發(fā)生化學(xué)變化，從而使細(xì)菌損傷或死亡。

經(jīng)60Co輻射滅菌的物品溫度升高很少，一般僅約5℃，故又稱“冷滅菌”。

60Co輻射存在兩個方面的安全問題：一是輻射的直接作用。γ射線對人體細(xì)胞同樣有害；二是經(jīng)過輻射的食品、藥品的安全性。1984年美國農(nóng)業(yè)部食品安全實驗室用輻射處理的雞肉喂飼小鼠，發(fā)現(xiàn)患**腫瘤增加，包括加重癌病損害。因此60Co輻射用于食品和藥品都應(yīng)經(jīng)過安全試驗，進行科學(xué)的、全面的評當(dāng)前121頁，總共133頁。2023/3/11121價，高劑量的輻射藥品更應(yīng)慎重。

美國藥典（？版）規(guī)定25kGy為有效滅菌劑量。1997年我國衛(wèi)生部頒發(fā)了60Co中藥滅菌標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)限國內(nèi)流通中藥可用60Co輻照滅菌，規(guī)定了允許輻照的藥材和中成藥的品種和劑量。

中藥輻照最大吸收劑量標(biāo)準(zhǔn)：

散劑

3kGy

片劑

3kGy

丸劑

5kGy

中藥原料粉

6kGy附錄：

1．藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度等級（GMP1998）

潔凈度級別

塵粒最大允許數(shù)（個/m3）

微生物