樹突狀細胞在慢性乙型肝炎中的免疫功能狀態(tài)樹突狀細胞在慢性乙型肝炎中的免疫功能狀態(tài)

作者：孫運芳，李永軍，孫運粉

【關鍵詞】

,乙型肝炎；慢性；免疫學

［摘要］乙肝病毒(HBV)的去除依賴于強大的、多克隆的、特異的CD8+細胞毒性T細胞和CD4+T輔助細胞來反抗病毒外表抗原、核心抗原和P蛋白抗原。而且，效應T細胞通過分泌淋巴因子能夠中止病毒復制而不損傷感染的肝臟細胞，這些效應T細胞需要APC用提呈的抗原、MHC分子、共刺激分子共同激活，樹突狀細胞(DC)敘述MHC1類和2類分子，并能夠在攝取抗原后上調細胞膜上的共刺激分子(CD40、CD80、CD86)，只有DC能直接使初始型T細胞活化，促進Th1和Th2細胞分化，增強CTL細胞功能。有研究認為長期慢性的乙肝感染與缺乏的CTL細胞以及TH細胞分化比例不同有關，而這些情況均可能與DC功能損傷有關。

［關鍵詞］乙型肝炎；慢性；免疫學

DCIntheChronicHepotitisBofImmunityFunctionAppearance

Abstract:TheeliminationofHBVdependonthestrong,multiclone，specialCD8+celltoxicityTcellsandCD4+helperTcellstoantagonizethesurfaceantigenofvirus,coreantigenandPproteinantigen.Furthurmore,effectiveTcellscanstopthereplicationofvirusthroughexcretinglymphgenebutnotdamaginginfectiouslivercells,theactivationoftheseeffectiveTcellsneedthepresentedantigenofAPC,MHCmoleculestogetherwithstimulatedmolecules.DCexpressMHC1andMHC2,andascendingupthestimulatedmoleculesofcellmembraneaftertakinginantigen.OnlyDCcanactivatethenaiveTcellsandpromotethedifferentiationofTh1andTh2andbuildupthefunctionofCTL.SomeresearchthinkthelongchronicinfectionofHepatitsBisrelataedwiththedeficientCTLandthedifferentdifferentiationratioofTHcells,allofthestatusisrelatedwiththedamagedfunctionofDC.

Keywords:HepatitisB；Chronic；Immunology

乙肝病毒(HBV)感染機體后，體內(nèi)的CTL通過殺傷靶細胞和分泌細胞因子的非細胞毒機制抑制病毒復制，因此抗病毒T細胞免疫反饋的強弱，很可能成為決定急性自限性感染或慢性感染的標志。在急性感染最終去除病毒的個體中，其對于HBV的CTL反饋是多克隆、多特異性的，而在慢性感染的個體，對于HBV的CTL反饋很弱、幾乎測不到，機體對HBV形成一種免疫耐受狀態(tài)而成為慢性遷延不愈。有研究認為長期慢性的乙肝感染與缺乏的CTL細胞以及TH細胞分化比例不同有關，而這些情況均可能與樹突狀細胞(DC)功能損傷有關。

1CD4+和CD8+記憶性T細胞的特性和功能

當致病原侵入機體時，體內(nèi)的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生較強的針對此抗原的免疫反饋去除致病原，進入免疫反饋的后期，多數(shù)效應T淋巴細胞和B淋巴細胞逐漸凋亡，但是有局部淋巴細胞分化成為長壽命的記憶性細胞，再次遭遇抗原時，可以反抗原產(chǎn)生很強的次級免疫反饋，通過殺傷感染的細胞和分泌細胞因子來打消致病原。根據(jù)外表標志及功能，分為CD4+和CD8+記憶性T細胞［1］。在免疫系統(tǒng)中T細胞占有極其重要的地位，T細胞不僅有效應功能，而且是機體調節(jié)免疫功能的主體，在去除HBV中，輔助性T細胞(helperTcell，Th)和CTL都起著至關重要的作用，T細胞的活化需要兩個信號：第一信號來自T細胞受體辨認APC外表的主要組織相容性抗原肽復合物；第二信號是由協(xié)同刺激分子相互作用提供的，包括CD28/B7等，這兩組信號都有APC參與作用，DC是其中最強的抗原呈遞細胞，其外表豐盛敘述主要組織相容性復合物分子、協(xié)同刺激分子B7和粘附分子，分泌IL12，從而誘導初級免疫反饋，活化初始型［2］。DC廣泛的分布于全身各器官，可以從外周攝取抗原，將其處理后呈遞給T細胞，誘導免疫反饋，因此DC是免疫反饋的啟動者［3］。

2DC的特性和功能

DC具有異質性，有人將其分為髓系和淋巴系兩大類，但至今仍無非常明確的分類規(guī)范。不同的DC擔負著不同的使命。胸腺髓質中的DC參與胸腺中的陰性選擇，它呈遞自身抗原與MHC的復合物給T細胞，然后使能夠辨認自身抗原并與之有較高親合力的T細胞克隆失能。髓系DC對T細胞免疫反饋可產(chǎn)生強烈的刺激作用，并可分泌IL12，調節(jié)T細胞和NK細胞功能，促進Th0朝Th1方向分化，顯著影響Th1和Th2的平衡［4］。DC在外周性免疫耐受中也起重要作用。淋巴系DC傾向于促進Th2分化，并可遞呈源自凋亡細胞的肽片段。據(jù)此，DC可通過遞呈來自體細胞的自身抗原給T細胞而誘導對自身蛋白的耐受。遷移中的髓系DC，包括LC，在遭遇外源抗原后產(chǎn)生活性，移向淋巴器官啟動免疫反饋［5,6］。DC對B細胞的生長和免疫球蛋白的分泌有重要作用。兩者雖同為APC，但DC有較高MHC及共刺激因子的敘述并能大量產(chǎn)生IL12；DC通過Fc及多聚凝集素(multilectin)受體中和抗原，B細胞那么有抗原特異性免疫球蛋白受體［7］。原始B細胞僅與間質內(nèi)非郎罕型DC反饋，在DC分泌的IL12作用下產(chǎn)生抗體；DC同時調控著B細胞所產(chǎn)生的免疫球蛋白的種類，IL10與TGFβ誘導IgA1的生成，IgA2的敘述那么嚴格依賴于B與DC的直接相互作用，這表明DC控制著黏膜的免疫［8］。濾泡型DC直接維持激活B細胞的活力、生長與分化，生發(fā)中心含有CD11c+DC，它可攜帶免疫復合物，有較強的刺激B細胞的能力，DC與B細胞間作用方式也遵循雙信號原那么，即DC上的特異性抗原被BCR接受產(chǎn)生第一信號，DC上CR2L與B細胞上CR結合，這對共刺激因子提供第二信號調控體液免疫［9］。近年來，越來越多的證據(jù)說明，由DC激活的細胞免疫特別是CTL介導的免疫反饋，在機體抵御惡性腫瘤和傳染性疾病中發(fā)揮著十分重要的作用，而且最近DC疫苗的臨床Ⅰ期、Ⅱ期試驗也取得了令人鼓舞的結果，顯示出DC疫苗在惡性腫瘤等疾病中的巨大前景［10］。DC是體內(nèi)最強的抗原呈遞細胞，成熟的DC可高敘述MHC分子、協(xié)同刺激分子和粘附分子從而刺激初始型T細胞誘導初級免疫反饋，同時通過分泌IL12活化NK細胞，促進Th1型細胞因子IL2、IFNr的分泌，因此DC被認為是一種很強的天然佐劑誘導細胞毒性T細胞反饋，在應用于抗感染和抗腫瘤免疫過程中發(fā)揮關鍵性的作用［11］。目前已知，DC發(fā)揮其功能并不是固定的、程序化的，而是隨著外界環(huán)境信號的不同而變化，影響因素包括：具有抗炎癥性質的細胞因子的作用(如IL10、TGFB)、致病原的性質等［12］。已知在麻疹病毒感染時，DC功能下降，不能刺激同種異體T淋巴細胞增殖。Chisari發(fā)現(xiàn)HBV轉基因小鼠DC功能正常，HBsAg特異性CTL存在，僅功能上處于靜息狀態(tài)，如果將經(jīng)細胞因子活化的DC回輸小鼠那么可以打破耐受，發(fā)揮抗病毒的CTL反饋［13］；相反的，Akbar［14］進行一系列實驗證明HBV轉基因小鼠DC的MHCⅡ(1a抗原)和CD86的敘述及誘導T細胞增殖效率方面遠低于正常小鼠。實驗用無血清培養(yǎng)基AIMV體外培養(yǎng)慢性乙肝患者DC，并比擬了慢性乙肝患者與正常人DC的差異：在細胞表型上，患者DC的CD80敘述顯著低于正常人DC，而HLA分子及其他協(xié)同刺繳分子無明顯差異；在功能上，乙肝患者的DC可刺激T細胞增殖，但其增殖能力低于正常人DC。我們知道刺激T細胞反饋需要協(xié)同刺激分子CD28B7提供第二信號系統(tǒng)，如果不足將導致T細胞無能。B7家族包含兩種B71(CD80)和B72(CD86)分子，到目前為止，這兩種信號的具體功能分工仍不十清楚確，有實驗說明，CD80信號促進Th1細胞的分化，誘導細胞免疫的發(fā)生，CD80基因敲除的小鼠有正常的免疫球蛋白超家族庫，如果不足CD86分子體液免疫將受到破壞。實驗發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者DC的CD80敘述低于正常人，可能與抑制了T細胞活化有關，同時可以解釋MLR實驗中乙肝患者DC反饋下降的情況。慢性乙肝患者DC功能降低，即不能有效的將抗原呈遞給T細胞誘導特異的細胞毒反饋，因此不能有效的殺傷感染細胞和抑制病毒增殖，導致乙肝慢性感染狀態(tài)［15］。DC廣泛的分布于全身各器官，可以從外周攝取抗原，將其處理后呈遞給T細胞，誘導免疫反饋，因此DC是免疫反饋的啟動者。Chisari［16］實驗中發(fā)現(xiàn)HBV轉基因小鼠不能對HBsAg產(chǎn)生免疫反饋，但是當將DC回輸給小鼠時，可以產(chǎn)生正常數(shù)量的針對HBsAg的CTL，研究說明HBV轉基因小鼠對HBsAg的耐受是由于T細胞無能或T細胞忽略形成的而不是由于T細胞的缺失，DC給T細胞提供了活化必需的信號，因此產(chǎn)生了特異的CTL。我們將DC事先以HBVC區(qū)CTL表位多肽刺激，再將刺激后的DC與自身淋巴細胞孵育，誘導CTL的產(chǎn)生，實驗結果顯示誘導后的T細胞均可分泌較高水平的細胞因子，與正常志愿者無明顯差異，而與其記憶性T細胞比擬分泌細胞因子的水平有顯著性提高。實驗揭示慢性乙肝患者外周血經(jīng)細胞因子活化的DC可以誘導特異的抗HBV的T細胞反饋［17］。DC作為專職抗原呈遞細胞在用于抗病毒免疫治療的方面具有很大潛能，乙肝患者的DC雖然在功能上較正常人低，但仍能敘述MHC和協(xié)同刺激分子，而且可刺激同種異體T細胞增殖，且與正常人一樣，經(jīng)過TNFa的刺激后可分泌大量的IL12，較未知加因子刺激時增加近10倍，IL12是DC分泌的一種關鍵性的細胞因它能夠有效的誘導特異性的CTL的產(chǎn)生，因此TNF的應用是DC分泌的一種關鍵性的細胞因子，它能夠有效的誘導特異性的CTL的產(chǎn)生，因此TNFα的應用是DC免疫治療的重要環(huán)節(jié)。慢性乙肝患者DC還可以刺激抗原特異的CD4+和CD8+T細胞的活化，分泌必要的細胞因子，誘導抗原特異的免疫反饋。經(jīng)免疫表位多肽誘導的慢性乙肝患者DC可以在體外誘導特異性效應T細胞活化，并分泌對病毒清有重要作用的細胞因子［18］。因此理論上，將這種經(jīng)誘導的DC回輸至患者體內(nèi)，可有望打破機體免疫耐受，去除體內(nèi)的HBV。

[1]

[2]

下一頁

3小結

總之,DC是體內(nèi)重要的一類抗原呈遞細胞，與巨噬細胞、B細胞抗原呈遞功能不同，只有DC能夠刺激初始型T細胞使之分化、激活，后者影響機體的細胞和體液免疫系統(tǒng)，因此，DC被認為是機體免疫反饋的始動者。乙型病毒性肝炎是我國最重要的傳染病之一，已有多項對DC生物學特征、與其他免疫細胞關系研究，臨床醫(yī)生評價DC在乙肝患者的功能、數(shù)量及臨床意義，并有學者嘗試應用體外激活的特異性乙肝病毒的DC回輸治療乙肝。SusanneBeckebaum等人［19］對慢性乙肝患者新鮮外周血中的PDC1與PDC2及培養(yǎng)后成熟DC1研究中發(fā)現(xiàn)：PDC2比例明顯升高，PDC1比例明顯下降，PDC1/PDC2比值缺乏正常人的1/2，經(jīng)細胞因子誘導成熟的DC1外表共刺激分子CD80與CD86敘述低于正常對照人群(P參考文獻：

［1］唐艷萍,邵沂.慢性乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞免疫功能的研究［J］.蘭州醫(yī)學院學報,2022,28(4):58.

［2］邢利和，王福生.慢性乙型肝炎患者樹突狀細胞的培養(yǎng)鑒定和功能特點［J］.中華傳染病雜志，2022，19(6):348351.

［3］李健，熊靈軍.乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群的檢測［J］.新消化病學雜志，1993，1(2):7778.

［4］AlexanderGJM.Contrstingrelationsbeteensappressorcellfunctionandsuppressorcellnumberinchronicliverdisease［J］.Lancet，1983，8337:1291.

［5］劉楓.乙型肝炎患者自發(fā)性抑制性T細胞功能及其與T細胞亞群的關系［J］.中華醫(yī)學雜志，1986，66(9):514.

［6］王磊.慢性活動性乙型肝炎CD4+/CD8+比值與體液免疫關系的探討［J］.山東醫(yī)科大學學報，1993，31(1):1719.

［7］李用國,羅云萍,梁增偉,等.慢性乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞對HBsAg的呈遞作用［J］.中華肝臟病雜志,2000,8:330331.

［8］邢利和,王福生,劉明旭,等.慢性乙型肝炎患者樹突狀細胞的培養(yǎng)鑒定和功能特點［J］.中華傳染病雜志,2022,19:348351.

［9］李假設冰,陳紅松.慢性乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞功能的研究［J］.中華醫(yī)學雜志,2022,82(13):887890.

［10］Lee,YS;Yovn,SJ.ImmuneresponseinducedbyimmunizationwithHepatitisviruscoreDNAisolatedfromchronicactivehepatitispatients［J］.Immunollett.2022，78(1):1320.

［11］Akbor,SM;Hoviike,N.ImmuneresponseinducedbyimmunizationwithHepatitsBviruscoreDNAisolatedfromchronicactivehepatitspatients.Immunollett［J］.2022，78(1):1320.

［12］賈戰(zhàn)生，慢性乙型肝炎病毒攜帶者外周單個核細胞體外抗原誘導的抗體反饋［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2000，20(7)：4547.

［13］姜榮龍.CD4+自然殺傷T細胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用［J］.中華內(nèi)科雜志，2022，65(8)：510.

［14］Belz,GabyielleT,georgM.N.behren,etc.TheCD8+dendriticcellisresponsibleforinducingperipheralselftolerancetotissueassociatedantigens［J］.2022,JournalofExperimentalMedicine196(8)October21:10991104.

［15］Berger,ThomasG,LargescalegenerationofmaturemonocytederivedDendriticcellsforclinicalapplicationincellfactlries［J