ena多肽抗體譜免疫印跡檢測第1頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測

第一節(jié)

概述一、

何為ENA?ENA(Extractablenuclearantige)鹽水可提取性核抗原的總稱。第2頁/共38頁第六章

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核抗原：組蛋白

：不溶于水DNA；不溶于水

ENA：可溶于生理鹽水是非組蛋白核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，是許多小分子量的RNA和多肽組成。第3頁/共38頁第六章

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二、多肽抗體譜ENA抗體是指能與核中鹽水可提取抗原發(fā)生特異性結(jié)合抗體，既是抗核抗體的一部分。第4頁/共38頁第六章

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ENA多肽抗體譜是由許多小分子量的RNA和多肽組成。不同的uRNA各有其相應(yīng)的抗體。目前發(fā)現(xiàn)的相應(yīng)的抗體已有十余種，其中，國際上共認(rèn)的對風(fēng)濕有特異的診斷價值的有七種。故將這七種抗體叫做多肽抗體譜第5頁/共38頁第六章

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三、

免疫印跡免疫印跡（ImmunoblotIBT）又稱免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。是一項新的生化技術(shù)。它對研究工作的影響與內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和

PCR的基因擴(kuò)增技術(shù)是等量齊觀的。第6頁/共38頁第六章

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免疫印跡的基本原理：將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合起來，其主要的操作過程分三個步驟。1、分離鹽水可提取抗原（ENA）中多肽按分子量的大小，先用SDS—

聚丙烯酰胺凝膠分離第7頁/共38頁第六章

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免疫印跡的基本原理：2、轉(zhuǎn)移將分離的組份從凝膠上轉(zhuǎn)移到固相基質(zhì)上，如硝酸纖維膜第8頁/共38頁第六章

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免疫印跡的基本原理：3、測定對轉(zhuǎn)移后的組份進(jìn)行免疫法測定，顯示出蛋白帶。既通過抗體的反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫吸附法觀察與抗體反應(yīng)的多肽（呈顯色帶）的數(shù)量與分子量

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免疫印跡的基本原理：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)實際上是一項將凝膠電泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三者融為一體的免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。第10頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：第11頁/共38頁第六章

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免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：1、高分辨率免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了電泳技術(shù)分辨率強(qiáng)的特點。第12頁/共38頁第六章

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免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：2、高靈敏度免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)敏感性高的特點，可檢出最小蛋白質(zhì)1pg(10-12g)第13頁/共38頁第六章

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免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：3、高特異性免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)特異性，根據(jù)抗原抗體的特異反應(yīng)，同一條蛋白印跡上可做多項分析。第14頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：4、高度穩(wěn)定性蛋白印跡膜便于保存，可存放6-12

個月。第15頁/共38頁第六章

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免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點：5、設(shè)備簡單，操作容易免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)在臨床檢驗中必有遠(yuǎn)大前程，并可能代替許多現(xiàn)有的傳統(tǒng)檢驗方法。第16頁/共38頁第六章

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第二節(jié)

檢測對象ENA多肽抗體譜早期診斷SLE和多種風(fēng)濕病，有較高的特異性和敏感性，有助于結(jié)締組織病的診斷和鑒別診斷第17頁/共38頁第六章

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一、風(fēng)濕病的定義風(fēng)濕病學(xué)是一門以內(nèi)科學(xué)和臨床免疫學(xué)為基礎(chǔ)的新興學(xué)科其研究的對象是風(fēng)濕性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起的骨、關(guān)節(jié)、肌疾病。第18頁/共38頁第六章

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廣義：涉及所有骨、關(guān)節(jié)、肌肉疼痛和炎癥的疾病感炎性：萊姆（Lyme）氏病 代謝性：

痛風(fēng) 內(nèi)分泌性：甲狀旁腺功能亢進(jìn) 遺傳性；粘液多糖病 退化性：骨關(guān)節(jié)炎 生態(tài)環(huán)境性：大骨節(jié)病第19頁/共38頁第六章

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狹義：主要指自身免疫性結(jié)締組織疾病

類風(fēng)濕性疾病骨關(guān)節(jié)炎(RA) 系統(tǒng)紅斑狼瘡(SLE) 干燥綜合癥(SS) 硬皮病(PSS) 皮肌炎和多發(fā)行肌炎(DM/PM) 混合性結(jié)締組織病(MCTD)第20頁/共38頁第六章

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二、

適應(yīng)癥1、臨床上懷疑有風(fēng)濕性疾?。ńY(jié)締組織病或自身免疫性疾?。柽M(jìn)一步確診者。2、已診斷為某種風(fēng)濕性疾病，但需明確是否合并其它風(fēng)濕性疾病，以指導(dǎo)治療者。第21頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測二、

適應(yīng)癥3、診斷未明，但有下列癥狀，需排除或確診何種風(fēng)濕性疾病者：

⑴、原因不明發(fā)熱伴有關(guān)節(jié)或肌肉疼痛。⑵、淋巴結(jié)腫大或白血球減少或血小板減少或溶血性貧血。⑶、皮疹或不典型面部紅斑，光敏感。⑷、蛋白尿。第22頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測⑸、心包炎或胸膜炎。⑹、癲癇或精神、神經(jīng)癥狀。⑺、習(xí)慣性流產(chǎn)。⑻、雷諾氏現(xiàn)象。⑼、腫脹手或手指、足趾皮膚變硬。第23頁/共38頁第三章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測⑽、肌肉有壓痛或抬臂、下蹲起立時困難。⑾、下肢出現(xiàn)網(wǎng)狀青紫。⑿、肺間質(zhì)病變或肺動脈高壓。⒀、經(jīng)?？诟伞⒀鄹?、或反復(fù)腮腺炎。⒁、易口腔潰瘍或大量脫發(fā)。第24頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測⒂、吞咽困難，食道蠕動減弱。⒃、青年女性有偏頭痛。⒄、熒光抗核抗體陽性。⒅、關(guān)節(jié)疼痛。⒆、長期反復(fù)性原因不明低熱。第25頁/共38頁第三章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測三、送檢標(biāo)本

血清第26頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測四

報告方式反應(yīng)抗體分子量

1.抗Sm抗體+/- 29/28KD、13.5KD2.抗u1RNP抗體+/- 73KD、32KD、17.5KD3.抗Scl-70抗體+/- 86KD、70KD4.抗SSA抗體+/- 52KD5.抗SSB抗體+/- 48/47KD、45KD6.抗JO-1抗體+/- 55KD7.抗Rib抗體+/- 38KD\16KD\15KD+表示有該種自身抗體-表示無該種自身抗體第27頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測第三節(jié)臨床意義

第28頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義一．抗Sm抗體1.Sm為病人Smith（發(fā)現(xiàn)抗體的第一位病人）的名字縮寫2.抗Sm抗體是酸性糖蛋白3.是目前公認(rèn)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）標(biāo)記抗體，有利于SLE的早期診斷。、注意：關(guān)鍵是13.5KD一般是13.5KD和29/28KD同時出現(xiàn)，若單獨出現(xiàn)

29/28KD、無13.5KD不能判斷抗Sm抗體陽性4.陽性率30-50%，僅見于本病。第29頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義

二、抗u1RNP抗體(抗RNP)1、是混合性結(jié)締組織病(MCTD)的一項重要血清學(xué)特征。2、陽性率可達(dá)95%以上。3、73KD（國外報導(dǎo)為70KD）和32KD可同時出現(xiàn)，也可分別出現(xiàn)。17.5KD常拌

73KD和32KD、一起出現(xiàn)，單獨出現(xiàn)少見。4、其它結(jié)締組織病的陽性率系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）30%

干燥綜合癥(SS)20%硬皮病(PSS)7%第30頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義

三、抗Scl-70抗體1、抗Scl-70抗體中的Scl

Sclerosis的縮寫

70代表抗原分子量，為70KD（70000）

2、是彌漫型硬皮病(PSS)的標(biāo)記抗體。3、陽性率可達(dá)50-64%4、在86KD和70KD兩區(qū)帶間有時可見到兩條較弱的區(qū)帶，是100KD的降解產(chǎn)物。兩區(qū)帶一般同時出現(xiàn)。第31頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義

四、抗SSA抗體（抗RO抗體）1．SS為干燥綜合癥（Sjogren’ssyndrome）的縮寫。A為抗原子序列號2．曾以最先查到此抗體患者名字命名，又稱抗RO抗體。3．對干燥綜合癥（SS）診斷有意義。陽性率70~80%合并SLE30~50%

單純SLE8~10%

第32頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義

四、抗SSA抗體（抗RO抗體）4．可見于其它多種自身免疫性疾病。包括SLE，硬皮癥，多發(fā)性肌炎和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病。5、該抗體陽性也可引起亞急性皮膚狼瘡的皮損與SLE的廣泛光過敏性皮炎也相關(guān)，IgG類抗SSA抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒后可引起新生兒狼瘡綜合癥。6、個別因抗體與心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng)相結(jié)合可造成先天性心臟傳導(dǎo)阻滯。第33頁/共38頁第六章

ENA多肽抗體譜免疫印跡檢測臨床意義

五、抗SSB抗體1．抗SSB抗體常伴隨抗SSA抗體同時出現(xiàn)。2．抗SSB和抗SSA抗體并存，對診斷SS（