一、危險(xiǎn)程度分類(lèi)（一）分類(lèi)危險(xiǎn)度分級(jí)傳染病管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作與生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求第一頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料：（一）一般生物學(xué)特性

1.病原學(xué)特性

2.培養(yǎng)特性（二）艾滋病毒對(duì)外界環(huán)境的穩(wěn)定性1.自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對(duì)溫度的敏感性

2.化學(xué)因子的敏感性

3.對(duì)紫外線等的敏感性第二頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料（三）HIV的致病性

（四）HIV的傳播途徑（五）艾滋病的預(yù)防、診斷和治療

1.預(yù)防

2.診斷

3.治療第三頁(yè)，共28頁(yè)。三、擬從事實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的危險(xiǎn)性分析及相應(yīng)的預(yù)防措施四、工作人員的預(yù)防接種和工作人員素質(zhì)五、評(píng)估結(jié)論（一）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的防護(hù)措施（二）感染的控制和健康監(jiān)護(hù)

第四頁(yè)，共28頁(yè)。一、危害程度分類(lèi)（一）分類(lèi)危險(xiǎn)度分級(jí)傳染病管理根據(jù)2006年中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部制定的

《人間傳染的病原微生物名錄》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2004）

WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》（第三版.2004），Humanimmunodeficiencyvirus（HIV）typy1and2virus人類(lèi)獲得性免疫缺陷病毒（艾滋病毒I型和II型）屬于危害程度第二類(lèi)的病原微生物,其危險(xiǎn)度Ⅲ級(jí)。根據(jù)2006年《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》，艾滋病屬于乙類(lèi)傳染病。第五頁(yè)，共28頁(yè)。微生物危害程度分級(jí)等級(jí)危害Ⅰ

（低個(gè)體危害，低群體危害）：不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病、的)：能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、細(xì)菌真菌、病毒和寄生蟲(chóng)等生物因子危害等級(jí)Ⅱ(中等個(gè)體危害，有限群體危害群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)感染有限第六頁(yè)，共28頁(yè)。微生物危害程度分級(jí)危害等級(jí)Ⅲ（高個(gè)體危害，低群體危害）：能引起人類(lèi)或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或成嚴(yán)造重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲(chóng)藥治療的病原體危害等級(jí)Ⅳ(高個(gè)體危害，高群體危害)：能引起人類(lèi)或動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原體第七頁(yè)，共28頁(yè)。

運(yùn)輸包裝分類(lèi)AUN2814（僅病毒培養(yǎng)物為A類(lèi)）BUN3373（診斷標(biāo)本、臨床標(biāo)本、生命物質(zhì)）第八頁(yè)，共28頁(yè)。

（二）實(shí)驗(yàn)室操作與生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求1.病毒培養(yǎng)BSL-32.動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)ABSL-33.未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作BSL-24.滅活材料及無(wú)感染性材料的操作BSL-1。第九頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料

（一）一般生物學(xué)特性1．病原學(xué)特性人免疫缺陷病毒分兩型，即HIV-1和HIV-2。兩者均能引起艾滋病，均為單鏈RNA病毒，分類(lèi)上屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae)，慢病毒亞科(Lentivirus)。本病毒為圓形或橢圓形，直徑約90—140nm，外層為類(lèi)脂包膜，表面有鋸齒樣突起，內(nèi)有圓柱狀核心，由RNA逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA多聚酶和結(jié)構(gòu)蛋白等組成。病毒的包膜是糖蛋白gp120及gp41。gpl20為外膜蛋白，gp41為透膜蛋白(transmem—braneprotein)，起協(xié)助HIV進(jìn)入宿主細(xì)胞的作用。結(jié)構(gòu)蛋白包括p24核心蛋白和p18基質(zhì)蛋白。

第十頁(yè)，共28頁(yè)。

HIV有9個(gè)基因，其中3個(gè)基因編碼結(jié)構(gòu)蛋白，即群抗原基因(groupspecificanti-gen，gag)編碼核心蛋白p24，多聚酶基因(polymerase，pol)編碼多聚酶，包膜蛋白基因(envelope，env)編碼包膜蛋白gpl20和gp41。尚有3個(gè)調(diào)節(jié)基因，即反式激活因子(transactivator，tat)對(duì)HIV基因起正調(diào)控作用，病毒蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)因子(regulatorofexpressionofvirionproteins，rev)能增加gag和env基因?qū)Y(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)，和負(fù)因子(negativefactor，nef)具有抑制HIV增殖作用。另外還有四個(gè)基因即病毒感染因子(virioninfectivityfactor，vif)，其作用是在一些細(xì)胞因子協(xié)同下促進(jìn)HIV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，R蛋白(viralprotein，R.vpr)，能使HIV在巨噬細(xì)胞中增殖；U蛋白(viralprotein，U.vpu)僅存在于HIV-1中，它能促進(jìn)HIV-1從細(xì)胞膜上釋放。HIV-2核苷酸序列中近40％一50％與HIV-1相同，在基因組中，不存在vpu基因而有X蛋白(viralprotein，X．vpx)，這是HIV-2在淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖時(shí)所必需，且能促進(jìn)病毒粒子的形成。HIV-2毒力較弱，臨床上潛伏期較長(zhǎng)，進(jìn)展為AIDS所需時(shí)間亦較久。

第十一頁(yè)，共28頁(yè)。根據(jù)env基因V3段堿基排列的不同，HIV-1可分為9個(gè)亞型即A、B、C、D、E、F、G和O亞型。HIV既有嗜淋巴細(xì)胞性又有嗜神經(jīng)性，主要感染CD4+T淋巴細(xì)胞，也能感染單核巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞等。

HIV侵入人體后雖然能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，但中和抗體很少，且作用極弱。在血清中同時(shí)有抗體和病毒存在的情況下，此血清仍有傳染性。

第十二頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料

2.培養(yǎng)特性人的外周或骨髓中淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激48～72小時(shí)作體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2）1～2周后，病毒增殖可釋放至細(xì)胞外，并使細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，最后細(xì)胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細(xì)胞系如HT-H9、Molt-4細(xì)胞作分離及傳代。第十三頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料HIV動(dòng)物感染范圍窄，僅黑猩猩和長(zhǎng)劈猿，一般多用黑猩猩做實(shí)驗(yàn)。用感染HIV細(xì)胞或無(wú)細(xì)胞的HIV濾液感染黑猩猩，或?qū)⒏腥綡IV黑猩猩血液輸給正常黑猩猩都感染成功，但無(wú)論黑猩猩或長(zhǎng)臂猿感染后都不發(fā)生疾病。第十四頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料（二）艾滋病毒對(duì)外界環(huán)境的穩(wěn)定性1.自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對(duì)溫度的敏感性

HIV對(duì)熱敏感。56℃30分失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。不加穩(wěn)定劑病毒-70℃冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰凍3個(gè)月仍保持活性。2.化學(xué)因子的敏感性對(duì)消毒劑和去污劑亦敏感，0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來(lái)蘇爾處理5′能滅活病毒，1%NP-40和0.5%triton-X-100能滅活病毒而保留抗原性。3.對(duì)紫外線等的敏感性HIV0.1％甲醛溶液、紫外線和γ射線不敏

第十五頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料（三）HIV的致病性HIV感染人體后直接和間接作用于CD4+T淋巴細(xì)胞，細(xì)胞功能受損和大量破壞，導(dǎo)致細(xì)胞免疫缺陷，免疫系統(tǒng)功能?chē)?yán)重缺損因而促使并發(fā)各種嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染和腫瘤的發(fā)生。發(fā)展到最后，導(dǎo)致艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合征)常合并嚴(yán)重的機(jī)會(huì)感染，常見(jiàn)的有細(xì)胞（鳥(niǎo)分枝桿菌）、原蟲(chóng)（卡氏肺囊蟲(chóng)、弓形體）、真菌（白色念珠菌、新型隱球菌）、病毒（巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒，乙型肝炎病毒），Kaposis肉瘤或惡性淋巴瘤。最后死亡。第十六頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料（四）HIV的傳播途徑HIV感染者和AIDS病人是傳染源

傳播途徑有：

1．性傳播：通過(guò)男性同性戀之間及異性間的性接觸感染。

2．血液傳播：通過(guò)輸血、血液制品或靜脈嗜毒者共用不經(jīng)消毒的注射器和針頭

3．母嬰傳播：包括經(jīng)胎盤(pán)、產(chǎn)道和哺乳方式傳播。。第十七頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料（五）艾滋病的預(yù)防、診斷和治療

1.預(yù)防人類(lèi)研究艾滋病疫苗已有20余年了，現(xiàn)國(guó)際上已進(jìn)行了120多個(gè)艾滋病疫苗的臨床測(cè)試，測(cè)試疫苗包括重組病毒載體疫苗、DNA疫苗、蛋白/多肽疫苗以及不同疫苗的組合。無(wú)論是艾滋病抗體疫苗還是細(xì)胞免疫疫苗均尚處于早期階段，所研制的疫苗在理論上均難以克服艾滋病毒所帶來(lái)的挑戰(zhàn)。因?yàn)榘滩《綢型至少包括9個(gè)亞型和眾多的重組型。而且，病毒可不斷通過(guò)遺傳變異，逃逸免疫系統(tǒng)的識(shí)別與控制。至今還沒(méi)有研制出有效預(yù)防艾滋病的疫苗。第十八頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料

2.診斷

1）抗體檢測(cè)篩查：主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）確證：抗體篩查陽(yáng)性者可做Westernblot（WB，蛋白印跡法）進(jìn)一步確證。

2)抗原檢測(cè)用ELISA檢測(cè)P24抗原,在HIV感染早期尚未出現(xiàn)抗體時(shí),血中就有該抗原存在.由于P24量太少,陽(yáng)性率通常較低。現(xiàn)有用解離免疫復(fù)合物法或濃縮P24抗原，來(lái)提高敏感性。第十九頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料

3）核酸檢測(cè)用PCR法檢測(cè)HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn)，目前該法已被應(yīng)用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。

4）病毒分離常用方法為共培養(yǎng)法，即用正常人外周血液分離單個(gè)核細(xì)胞，加PHA刺激并培養(yǎng)后，加入病人單個(gè)核細(xì)胞診斷及艾滋病的研究。第二十頁(yè)，共28頁(yè)。二、背景資料3.治療已有的抗病毒藥物和治療方法，雖不能治愈艾滋病，但實(shí)施規(guī)范的抗病毒治療可有效抑制病毒復(fù)制，降低傳播危險(xiǎn)，延緩發(fā)病，延長(zhǎng)生命，提高生活質(zhì)量。

第二十一頁(yè)，共28頁(yè)。三、擬從事實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的危險(xiǎn)性分析及相應(yīng)的預(yù)防措施

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：要求在生物安全二級(jí)防護(hù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，操作者應(yīng)著防護(hù)裝備，戴手套。實(shí)驗(yàn)室的污染廢棄物均須無(wú)害化處理后方能移出實(shí)驗(yàn)室并交特種垃圾場(chǎng)處置。發(fā)生感染性材料的溢出/灑漏，必須使用吸水材料覆蓋，使用0.5%的次氯酸鈉或其他有效的消毒劑由外向中心噴灑，作用30min后移出。第二十二頁(yè)，共28頁(yè)。四、工作人員的預(yù)防接種和工作人員素質(zhì)

根據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》WHO《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》等制定艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員健康管理規(guī)定。1.經(jīng)過(guò)規(guī)范的生物安全和艾滋病檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格考核合格者方能進(jìn)入其相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作區(qū)2.實(shí)驗(yàn)室人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作，皮膚破損者應(yīng)有嚴(yán)格的保護(hù)措施或暫時(shí)停止工作。3.建立健康監(jiān)護(hù)檔案，每年進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)。由于人源物質(zhì)存在其他潛在的感染因子，應(yīng)盡可能提供有效的預(yù)防接種，如乙型肝炎疫苗的接種等。4.貴州省CDC艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室共有技術(shù)人員8名,其中申請(qǐng)進(jìn)入BSL-2的人員8名,所有技術(shù)人員均參加過(guò)生物安全培訓(xùn),經(jīng)檢測(cè)HIV抗體陰性,健康狀態(tài)良好.第二十三頁(yè)，共28頁(yè)。五、評(píng)估結(jié)論

（一）實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的防護(hù)措施凡是涉及HIV檢測(cè)的操作,均可能發(fā)生通過(guò)破損的皮膚和黏膜接觸、銳器刺傷等實(shí)驗(yàn)室意外感染，因此涉及HIV陽(yáng)性樣本的操作應(yīng)在A2型生物安全柜中進(jìn)行。上崗前必須接受?chē)?yán)格的生物安全及艾滋病檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，按照BSL-2實(shí)驗(yàn)室級(jí)別進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。實(shí)驗(yàn)完畢后能高壓的廢棄物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)121℃高壓處理20min后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室，不能高壓的物品用0.5%有效氯的次氯酸鈉浸泡30min以上。第二十四頁(yè)，共28頁(yè)。五、評(píng)估結(jié)論（二）感染的控制和健康監(jiān)護(hù)

從事HIV研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入BSL-2實(shí)驗(yàn)室工作，出現(xiàn)下列情況不能進(jìn)入：孕婦和免疫力低下者，手部、顏面部皮膚破損且不易防護(hù)者，已經(jīng)在BSL-2實(shí)驗(yàn)室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作8小時(shí)或由于其他原因造成的處于疲勞狀態(tài)者都不宜從事HIV的檢測(cè)操作。第二十五頁(yè)，共28頁(yè)。五、評(píng)估結(jié)論（二）感染的控制和健康監(jiān)護(hù)

從事HIV研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室操作之初，必須先檢測(cè)HIV抗體，以后每年定期復(fù)檢。一旦發(fā)生實(shí)驗(yàn)室操作暴