第三節(jié)吸光光度法的儀器第一頁，共十三頁，2022年，8月28日一、吸光光度計的基本部件一般由五部分組成：光源→單色器→吸收池→檢測系統(tǒng)→信號顯示系統(tǒng)第二頁，共十三頁，2022年，8月28日（一）光源作用：提供一定波長范圍的復合光。要求：能提供具有足夠發(fā)射強度、穩(wěn)定且波長連續(xù)的復合光，同時發(fā)射光的強度還應不隨波長的變化而明顯改變。常用的光源為612伏低壓鎢絲燈，發(fā)射的復合光的波長約在4002500nm。當在近紫外光區(qū)測定時應使用氫燈或氘燈作光源，發(fā)射的波長為185375nm。電源由恒溫器供給；為了保持光源強度的穩(wěn)定，以獲得準確的測定結果，電壓必須穩(wěn)定。第三頁，共十三頁，2022年，8月28日（二）單色器（分光系統(tǒng)）作用：把復合光中分出所需要的單色光。(1)棱鏡是根據(jù)不同波長光的折射率不同來分光的。(2)光柵是根據(jù)光的衍射和干涉原理來分光的。1.玻璃應在波長360~3200nm范圍使用，主要用于可見分光光度計。2.石英可用于波長范圍一般為200~4000nm

，適用于紫外-可見分光光度計。第四頁，共十三頁，2022年，8月28日（三）吸收池（比色皿）

作用：盛裝參比溶液、試液溶液。比色皿是用透明無色的光學玻璃制作的。大多數(shù)比色皿為長方形，也有圓柱形的。一般厚度為0.5、1、2和3厘米。(1)在可見光區(qū)測定時，使用玻璃吸收池；(2)在紫外光區(qū)測定時，使用石英吸收池。第五頁，共十三頁，2022年，8月28日（四）檢測系統(tǒng)(又叫光電轉化器)作用：檢測被吸收的光。在光度計中，常用的是硒光電池。曬光電池和眼睛相似，對于各種不同波長的光線，靈敏度是不同的，對光的響應范圍為300~800nm，對于波長為500~600nm的光線最靈敏，而對紫外線，紅外線則不能應用。光電管和光電倍增管用于較精密的分光光度計中。具有靈敏度高、光敏范圍廣及不易疲勞等特點。第六頁，共十三頁，2022年，8月28日（五）信號顯示系統(tǒng)作用：記錄、顯示測量結果。早期使用的是檢流計、微安表、電位計、數(shù)字電壓表、自動記錄儀等?，F(xiàn)代的分光光度計廣泛采用數(shù)字顯示器、函數(shù)記錄儀、示波器及數(shù)據(jù)處理臺等。第七頁，共十三頁，2022年，8月28日二、吸光度的測量原理分光光度計實際上測得的是光電流或電壓，通過轉換器將測得的電流或電壓轉換為對應的吸光度A。測定時，只要將待測物質推入光路，即可直接讀出吸光度值。測定步驟：

1.調節(jié)檢測器零點，即儀器的機械零點。

2.應用不含待測組分的參比溶液調節(jié)吸光零點。

3.測定待測組分的吸光度。第八頁，共十三頁，2022年，8月28日三、分光光度計的類型1.可見分光光度計2.紫外-可見分光光度計3.紅外分光光度計第九頁，共十三頁，2022年，8月28日(一)單光束分光光度計分為：721、722、751型。

751型分光光度計是一種波長范圍較寬(200~1000nm)、精密度較高的分光光度計。由光源(鎢絲燈或氫燈)發(fā)出的光線由反射鏡反射，使光線經狹縫的下半部，經準光鏡進入單色器棱鏡色散底，由準光鏡將光聚焦于狹縫上半部而射出，經液槽照射于光電管上。由此可見，儀器用同一狹縫作入光和出光狹縫，它們始終具有相同的寬度。第十頁，共十三頁，2022年，8月28日(1)波長200-320nm范圍用氫燈作光源，波長320-1000nm范圍用鎢絲燈作光源。(2)棱鏡和透鏡均由石英材料作成，反光鏡和準光鏡表面鍍鋁。所以全部系統(tǒng)保證紫外光譜通過。(3)波長200-625nm用藍敏光電管(GD-5)測量透射光強度，波長625-1000nm用紅放光電管(GD-6)測量透射光強度。(3)吸光度和透光度通過顯示屏讀出。第十一頁，共