（優(yōu)選）基因工程的基本操作程序精華現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五基因工程基本操作的四個(gè)步驟：第一步：目的基因的獲取第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取1.什么是目的基因？——主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。補(bǔ)充：基因的結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)上游非編碼區(qū)編碼區(qū)下游啟動(dòng)子終止子(1)原核基因的結(jié)構(gòu)：與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)轉(zhuǎn)錄終點(diǎn)終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄編碼蛋白質(zhì)(編碼序列)調(diào)控遺傳信息的表達(dá)(調(diào)控序列)啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取1.什么是目的基因？——主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。補(bǔ)充：基因的結(jié)構(gòu)(2)真核基因的結(jié)構(gòu)：轉(zhuǎn)錄mRNA前體翻譯肽鏈內(nèi)含子

外顯子

編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動(dòng)子終止子加工成熟mRNA現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取1.什么是目的基因？——主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2.獲取方法：(1)從基因文庫(kù)中獲?。孩倩蛭膸?kù)：——將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。②基因文庫(kù)的分類(lèi)：按外源DNA片段的來(lái)源分類(lèi)基因組文庫(kù)：部分基因文庫(kù)：含有一種生物的全部基因含有一種生物的部分基因現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取1.什么是目的基因？——主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2.獲取方法：(1)從基因文庫(kù)中獲?。孩郢@取目的基因的根據(jù)：——根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，例如，根據(jù)基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來(lái)獲取目的基因。④建立基因文庫(kù)的目的：——為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因?，F(xiàn)在是6頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五(1)從基因文庫(kù)中獲?。孩莼蛭膸?kù)的構(gòu)建：基因組文庫(kù)的構(gòu)建：直接分離法(鳥(niǎo)槍法)提取某種生物的全部DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖幸欢ù笮〉腄NA片段將DNA片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因組文庫(kù)注意：基因文庫(kù)的組建過(guò)程就包含了基因工程的步驟。目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五(1)從基因文庫(kù)中獲?。孩莼蛭膸?kù)的構(gòu)建：cDNA文庫(kù)的構(gòu)建：反轉(zhuǎn)錄法某種生物的單鏈mRNA單鏈互補(bǔ)DNA雙鏈cDNA片段導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存與載體連接cDNA文庫(kù)反(逆)轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五(1)從基因文庫(kù)中獲取：⑤基因文庫(kù)的構(gòu)建：基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)的區(qū)別：文庫(kù)類(lèi)型cDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)文庫(kù)大小小大基因中啟動(dòng)子無(wú)有基因中內(nèi)含子無(wú)有基因多少某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取1.什么是目的基因？——主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2.獲取方法：(1)從基因文庫(kù)中獲?。孩迯幕蛭膸?kù)中獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)：——操作簡(jiǎn)便。⑦從基因文庫(kù)中獲取目的基因的缺點(diǎn)：——工作量大，具有一定的盲目性?，F(xiàn)在是10頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取2.獲取方法：(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：①什么是PCR？——PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。②PCR的原理：——利用DNA雙鏈復(fù)制的原理。③條件：——要有一段已知目的基因的核苷酸序列【前提條件】、四種脫氧核苷酸、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)等。現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：④過(guò)程：脫氧胞苷三磷酸脫氧腺苷三磷酸脫氧鳥(niǎo)苷三磷酸脫氧胸苷三磷酸現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：④過(guò)程：A.變性(90℃-95℃)：——雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。B.退火(55℃-65℃)：——系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。C.延伸(70℃-75℃)：——在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。D.多次重復(fù)：現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取2.獲取方法：(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：⑤方式：——以指數(shù)方式擴(kuò)增，即2n(n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù))?，F(xiàn)在是14頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五⑥PCR技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較：PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點(diǎn)原理原料條件不同點(diǎn)解旋方式場(chǎng)所酶結(jié)果堿基互補(bǔ)配對(duì)四種脫氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化體外復(fù)制細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整個(gè)DNA分子2.獲取方法：(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取2.獲取方法：(3)化學(xué)方法人工合成：——如果基因比較小，核苷酸序列又已知，也可以通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取練一練：1.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。PCR過(guò)程一般經(jīng)歷下述三十多次循環(huán)：95℃下使模板DNA變性、解鏈→55℃下復(fù)性(引物與DNA模板鏈結(jié)合)→72℃下引物鏈延伸(形成新的脫氧核苷酸鏈)。下列有關(guān)PCR過(guò)程的敘述中不正確的是()A．變性過(guò)程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵，也可利用解旋酶實(shí)現(xiàn)B．復(fù)性過(guò)程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成C．延伸過(guò)程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸D．PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比所需要酶的最適溫度較高C現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取練一練：2.獲取目的基因的方法有多種，下列不屬于目的基因獲取方法的是()A．從基因組文庫(kù)中獲取B．從cDNA文庫(kù)中獲取C．從含目的基因生物細(xì)胞中獲取D．利用PCR技術(shù)獲取C3.

PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA，需要的條件是()①目的基因②引物③四種脫氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖體A．①②③④B．②③④⑤C．①③④⑤D．①②③⑥A現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取練一練：4.有關(guān)基因工程的敘述正確的是()A．限制酶只在獲取目的基因時(shí)才用B．重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的C．質(zhì)粒都可以作為運(yùn)載體D．蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序可以為合成目的基因提供線索D5.在基因工程技術(shù)中，下列方法與目的基因獲得無(wú)關(guān)的是()A．輻射誘變法B．從基因文庫(kù)中獲取C．反轉(zhuǎn)錄法D．人工合成法A現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取練一練：6.下列關(guān)于基因工程的說(shuō)法中，正確的是()

A．基因工程的設(shè)計(jì)和施工都是在細(xì)胞水平上進(jìn)行的B．目前基因工程所有的目的基因都是從供體細(xì)胞中直接分離得到的C．只要檢測(cè)出受體細(xì)胞中含有目的基因，那么目的基因一定能成功進(jìn)行表達(dá)D．基因工程能使科學(xué)家打破物種界限，定向改造生物性狀D現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五一、目的基因的獲取練一練：7.下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是()①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲取目的基因②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因③反轉(zhuǎn)錄法④通過(guò)DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成A．①②③④B．①②③C．②③④ D．②③D現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.構(gòu)建目的：——使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.基因表達(dá)載體的組成：目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.構(gòu)建目的：——使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.基因表達(dá)載體的組成：想一想：?jiǎn)?dòng)子、終止子和標(biāo)記基因分別有什么作用？啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄。標(biāo)記基因：鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)?，F(xiàn)在是23頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.構(gòu)建表達(dá)載體：同一種限制酶載體(如質(zhì)粒)DNA分子(含目的基因)一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口(兩個(gè)黏性末端)的目的基因基因表達(dá)載體(如重組質(zhì)粒)DNA連接酶現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.構(gòu)建表達(dá)載體：(1)用一定的_______切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出________。(2)用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生________________。(3)將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的____處，黏性末端因_________________而相連，再加入適量___________，形成了一個(gè)重組DNA分子(重組質(zhì)粒)。限制酶黏性末端同一種限制酶切口堿基互補(bǔ)配對(duì)原則相同的黏性末端DNA連接酶現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.構(gòu)建表達(dá)載體：特別提醒：(1)用限制酶切割載體和含目的基因的DNA分子時(shí)，可以使用不同的限制性核酸內(nèi)切酶,但是必須切出相同黏性末端。(2)不同基因可以拼接的原因：不同生物的基因具有相同的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成，都是雙螺旋結(jié)構(gòu)，都由四種脫氧核糖核苷酸組成，都遵循相同的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則：A—T，G—C。(3)目的基因與載體的結(jié)合過(guò)程，實(shí)際上是不同來(lái)源的基因重組的過(guò)程?，F(xiàn)在是26頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建練一練：1.如圖為基因表達(dá)載體的模式圖，下列有關(guān)基因工程中載體的說(shuō)法錯(cuò)誤的是(

)A．基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體構(gòu)建B．任何基因表達(dá)載體的構(gòu)建都是一樣的，沒(méi)有差別C．圖中啟動(dòng)子位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位D．抗生素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因，用于鑒別受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因B現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建練一練：2.下列操作中不屬于基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程的是()A.用一定的限制酶切割質(zhì)粒露出黏性末端B.用同一種限制酶切割目的基因露出黏性末端C.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒切口處D.將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中D3.下列哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成部分()A.啟動(dòng)子B.終止子C.標(biāo)記基因D.復(fù)制原點(diǎn)D現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建練一練：4.下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是()A．啟動(dòng)子是與RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，是起始密碼B．啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，對(duì)mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用C．標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因從而便于篩選D．基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同而有所差別A現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.什么是轉(zhuǎn)化？——目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。2.常用的受體細(xì)胞：——大腸桿菌、枯草桿菌、農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理：——借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：①適用范圍：(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：——雙子葉植物和裸子植物。小知識(shí)：植物的分類(lèi)依據(jù)是否形成種子種子植物裸子植物：松、杉、柏、銀杏被子植物雙子葉植物：花生、大豆單子葉植物：水稻、玉米孢子植物藻類(lèi)植物：衣藻、水綿、海帶苔蘚植物：葫蘆蘚、地錢(qián)蕨類(lèi)植物：腎厥、滿江紅現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：②農(nóng)桿菌特點(diǎn)：(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：——在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。當(dāng)植物受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類(lèi)化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時(shí)農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：③轉(zhuǎn)化過(guò)程：(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：(2)基因槍法：適用范圍：——適用于單子葉植物，但成本較高。現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：(3)花粉管通道法：適用范圍：——適用于被子植物，且十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)。胚珠花藥花絲柱頭花柱子房壁子房雄蕊雌蕊現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞5.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞：(1)導(dǎo)入方法：——顯微注射法。(2)過(guò)程：——目的基因表達(dá)載體提純→從雌性動(dòng)物內(nèi)取出卵(卵在體內(nèi)或體外受精)并進(jìn)行顯微注射→含目的基因的受精卵→胚胎早期培養(yǎng)至囊胚期再移植到雌性動(dòng)物輸卵管或子宮，使其發(fā)育成具有新性狀的動(dòng)物?，F(xiàn)在是36頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞6.將目的基因?qū)胛⑸铮?1)原核生物特點(diǎn)：——繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少。(2)方法：——用Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子。現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞知識(shí)拓展：(1)不同生物的受體細(xì)胞不同：植物一般為體細(xì)胞(也可以受精卵)，動(dòng)物一般為受精卵，微生物一般為大腸桿菌。(2)上圖中發(fā)生②與發(fā)生①相比，②會(huì)使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，原因是在進(jìn)行細(xì)胞分裂時(shí)，細(xì)胞核上的DNA經(jīng)復(fù)制后平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中，保證了親子代遺傳性狀的穩(wěn)定性，而①細(xì)胞分裂時(shí)，細(xì)胞質(zhì)是不均分的，子細(xì)胞不一定含有目的基因?，F(xiàn)在是38頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞練一練：1.基因工程中科學(xué)家常采用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，主要原因是()A．結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便B．繁殖速度快C．遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單D．性狀穩(wěn)定,變異少B2.在培育下列作物的轉(zhuǎn)基因品種時(shí)，適合用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因的是()A．小麥B．玉米C．大豆D．水稻C現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞練一練：3.采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是()①將毒素蛋白注射到棉受精卵中②將編碼毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③將編碼毒素蛋白的DNA序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)人細(xì)菌，用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)④將編碼毒素蛋白的DNA序列，與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵A.①②B.②③C.③④D.④①C現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞練一練：4.回答有關(guān)基因工程的問(wèn)題：(1)構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生____末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。(2)利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是__________________________________________________________________________________________。在表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用________處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱(chēng)為_(kāi)___________________。為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成__________，常用____________雜交技術(shù)。平相同RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)人胰島素Ca2＋DNA分子雜交技術(shù)抗原—抗體現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞練一練：4.回答有關(guān)基因工程的問(wèn)題：(3)如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的__________中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的_______________上。T－DNA染色體的DNA現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平的檢測(cè)：(1)導(dǎo)入檢測(cè)：即檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因?！@是目的基因能夠在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。①方法：——DNA分子雜交技術(shù)。②過(guò)程：——將轉(zhuǎn)基因生物的DNA提取出來(lái)，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五②過(guò)程：放射性同位素標(biāo)記目的基因的DNA片段TACGGTCATGTCGCATGCTAGATGCCAGTACAGCGTACGATCGTACAGCGTA基因探針待測(cè)轉(zhuǎn)基因生物1染色體DNA單鏈TACGGTCATGTCGCATGCTAG待測(cè)轉(zhuǎn)基因生物2染色體DNA單鏈ATCCGGTGTAGGTCATGCTCGGTACAGCGTA基因探針GTACAGCGTA基因探針顯示出雜交帶不能顯示出雜交帶現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平的檢測(cè)：(1)導(dǎo)入檢測(cè)：即檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因。①方法：——DNA分子雜交技術(shù)。②過(guò)程：——檢測(cè)受體細(xì)胞是否具有標(biāo)記基因所控制的性狀，如果具有標(biāo)記基因所控制的性狀，就表明受體細(xì)胞中含有目的基因，從而可以篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞。想一想：欲檢測(cè)受體細(xì)胞中是否含有目的基因，除了DNA分子雜交法外，可以如何檢測(cè)？現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平的檢測(cè)：(2)轉(zhuǎn)錄檢測(cè)：即檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA?！@是檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步。①方法：——(DNA-RNA)分子雜交技術(shù)。②過(guò)程：——從轉(zhuǎn)基因生物中提取出mRNA，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記，以此作為探針，使探針與mRNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因在轉(zhuǎn)基因生物中已經(jīng)轉(zhuǎn)錄出了mRNA。現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五②過(guò)程：放射性同位素標(biāo)記目的基因的DNA片段TACGGTCATGTCGCATGCTAGATGCCAGTACAGCGTACGATCGTACAGCGTA基因探針待測(cè)轉(zhuǎn)基因生物1中的mRNAUACGGUCAUGUCGCAUGCUAG待測(cè)轉(zhuǎn)基因生物2中的mRNAAUCCGGUGUAGGUCAUGCUCGGTACAGCGTA基因探針GTACAGCGTA基因探針顯示出雜交帶不能顯示出雜交帶現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平的檢測(cè)：(3)翻譯檢測(cè)：即檢測(cè)目的基因是否翻譯成相應(yīng)的蛋白質(zhì)?！@是檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第二步。①方法：——抗原—抗體雜交技術(shù)。②過(guò)程：——從轉(zhuǎn)基因生物中提取出蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五②過(guò)程：目的基因動(dòng)物(如小鼠)體內(nèi)抗體轉(zhuǎn)基因生物中蛋白質(zhì)抗原蛋白質(zhì)表達(dá)顯示出雜交帶目的基因已形成蛋白質(zhì)現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定2.個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定：(1)實(shí)例1：一個(gè)抗蟲(chóng)或抗病的基因?qū)胫参锛?xì)胞后，是否賦予了抗蟲(chóng)或抗病的特性，需要做抗蟲(chóng)或抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否具有抗性以及抗性的程度。(2)實(shí)例2：有的基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品進(jìn)行功能活性比較，以確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同?，F(xiàn)在是50頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定練一練：1.1976年,美國(guó)的科學(xué)家首次將人的生長(zhǎng)抑制素釋放因子的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌,并獲得了表達(dá)，此文中的表達(dá)是指該基因在大腸桿菌()A.能進(jìn)行DNA復(fù)制B.能傳遞給細(xì)菌后代C.能合成生長(zhǎng)抑制素釋放因子D.能合成人的生長(zhǎng)素C現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五四、目的基因的檢測(cè)與鑒定練一練：2．利用外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，可生產(chǎn)人類(lèi)所需要的產(chǎn)品。下列選項(xiàng)中能說(shuō)明目的基因完成了在受體細(xì)胞中表達(dá)的是(

)A．棉花二倍體細(xì)胞中檢測(cè)到細(xì)菌的抗蟲(chóng)基因B．大腸桿菌中檢測(cè)到人胰島素基因及其mRNAC．山羊乳腺細(xì)胞中檢測(cè)到人生長(zhǎng)激素DNA序列D．酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素蛋白D現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五五、課堂練習(xí)1.基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的,在基因操作的基本步驟中,不進(jìn)行減基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是()A.人工合成目的基因B.目的基因與載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有59頁(yè)\編輯于星期五五、課堂練習(xí)2.下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是(

)A．目的基