現代儀器分析MODERNINSTRUMENTALANALYSISAppleLu3

高效液相色譜分析

HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC與GC差別相同：兼具分離和分析功能，均可以在線檢測主要差別：分析對象的差別和流動相的差別1．分析對象

GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品，高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品不可檢測占有機物的20%

HPLC：溶解后能制成溶液的樣品，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子和離子型樣品均可檢測用途廣泛，占有機物的80%2．流動相差別GC：流動相為惰性氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用

HPLC：流動相為液體流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起很大作用流動相種類較多，選擇余地廣流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相可以增大分離選擇性3．操作條件差別

GC：加溫操作

HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬小）影響色譜峰擴展及色譜分離的因素3-1H=A+B/u+C·u液體與氣體的不同？

H=

2λdp+CdDm/+Csdf2

/Ds+Cmdp2

/Dm+Csmdp2

/Dm

ABC主要因素：傳質相C提高柱效有效途徑：減小粒度Hmin小一個數量級柱外展寬：柱前峰展寬；柱后展寬試樣注入到填料中心之內1～2mm處，減少柱前擴散；連接管的體積和檢測器的死體積應盡可能小。主要類型與分離原理basicprincipleandmainseparatingtypes3-2一、液-液分配色譜liquid-liquidpartitionchromatogra二、液-固吸附色譜liquid-solidadsorptionchromatograph三、離子交換色譜ion-exchangechromatograph四、空間排阻色譜size-exclusionchromatograph二、液-固吸附色譜liquid-solidadsorptionchromatography

固定相：固體吸附劑如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑；流動相：各種不同極性的一元或多元溶劑?；驹恚涸嚇臃肿雍土鲃酉喾肿訉潭ㄏ啾砻娴母偁幬剑贿m用于分離相對分子質量中等的油溶性試樣，對具有官能團的化合物和異構體有較高選擇性；缺點：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；三、離子交換色譜

固定相：陰離子離子交換樹脂或陽離子離子交換樹脂；流動相：陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；

基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復可逆離子交換反應；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關。親和力大，保留時間長.

陽離子交換：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+

陰離子交換：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

離子交換樹脂上可解離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質離子進行可逆交換，根據不同離子對交換劑具有不同親和力實現分離。離子色譜法（IC）離子交換的基礎上發(fā)展而來。水溶液中陰離子分析的最佳方法。固定相：離子交換樹脂流動相：電解質溶液“用電導檢測器對陽離子和陰離子混合物作常量和痕量分析的色譜法。分析時在分離柱后串接一根抑制柱，來抑制流動相中的電解質的背景電導率”

固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)；

原理：按分子大小分離。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。全部在死體積前出峰？；可對相對分子質量在100-105范圍內的化合物按質量分離排阻色譜法不能用來分離大小相似、相對分子質量接近的分子只能分離相對分子質量差別在10%以上的分子可測定高聚物的相對分子質量的分級情況一、液相色譜固定相stationaryphaseofHPLC二、液相色譜流動相

mobilephaseofHPLC液相色譜的固定相與流動相stationaryphaseandmobilephaseofHPLC3-3（3）化學鍵合固定相

化學鍵合固定相:目前應用最廣、性能最佳的固定相；

a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—

C

穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機溶劑，應用最廣；

c.硅碳鍵型：≡Si—Cd.硅氮鍵型：≡Si—N化學鍵合固定相的特點（1）傳質快，表面無深凹陷，比一般液體固定相傳質快；（2）壽命長，化學鍵合，無固定液流失，耐流動相沖擊；耐水、耐光、耐有機溶劑，穩(wěn)定；（4）選擇性好，可鍵合不同官能團，提高選擇性；（5）有利于梯度洗脫；

存在著雙重分離機制：(鍵合基團的覆蓋率決定分離機理)高覆蓋率：分配為主；低覆蓋率：吸附為主；

2.液-固吸附分離固定相

種類：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等；結構類型：全多孔型和薄殼型；粒度：5～10μm；

4.空間排阻分離固定相（1）軟質凝膠葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網狀結構；水為流動相。適用于常壓排阻分離。（2）半硬質凝膠苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機凝膠；非極性有機溶劑為流動相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑（3）硬質凝膠多孔硅膠、多孔玻珠等；化學穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機械強度大，流動相性質影響小，可在較高流速下使用?？煽乜讖讲Ａ⑶颍哂泻愣讖胶驼６确植?。二、液相色譜的流動相mobilephasesofLC1.流動相特性

（1）液相色譜的流動相又稱為：淋洗液，洗脫劑。流動相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況；（2）親水性固定液常采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。（3）若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。4.選擇流動相時應注意的幾個問題（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。（2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產生沉淀并在柱中沉積。（4）流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。思考題：1.正相色譜2.反相色譜3.化學鍵和固定相4.洗脫劑及其作用離子對色譜強極性有機酸、有機堿的分離分析將一種（或多種）與溶質離子電荷相反的離子（對離子或反離子）加到流動相中使其與溶質離子結合形成疏水性離子對化合物，使其能夠