微生物實驗室培養(yǎng)人教第1頁/共89頁專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題1果酒的和果醋的制作課題2腐乳的制作課題3制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量第2頁/共89頁第3頁/共89頁

專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

課題1微生物的實驗室培養(yǎng)需要為微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件需要無菌操作

第4頁/共89頁課題目標(biāo)：1.了解有關(guān)微生物種類、培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識。2．進(jìn)行無菌技術(shù)的操作。3．進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。第5頁/共89頁生物技術(shù)實踐：微生物培養(yǎng)與利用：

利用微生物進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)特定的產(chǎn)物。生物學(xué)研究中的科學(xué)思想和一般方法：

設(shè)計可行的實驗方案和實驗裝置

對簡單的實驗方案做出恰當(dāng)?shù)脑u價和修訂《考試說明》從近年情況看，這部分知識在各區(qū)的模擬考查中多次涉及！尤其是關(guān)于滅菌方法和接種方法的選擇是高頻考點第6頁/共89頁微生物是一切肉眼看不見（但有些微生物是可以看見的，像屬于真菌的蘑菇、靈芝等。）或看不清的微小生物，個體微?。ㄒ话?lt;0.1mm），結(jié)構(gòu)簡單（有單細(xì)胞的，簡單多細(xì)胞的，非細(xì)胞的），通常要用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡才能看清楚的生物，統(tǒng)稱為微生物。

微生物的概念：一.微生物基礎(chǔ)知識第7頁/共89頁㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細(xì)胞類：藍(lán)藻、細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體個體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：衣藻、草履蟲、變形蟲等病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：一.微生物基礎(chǔ)知識第8頁/共89頁

知識梳理：細(xì)菌大腸桿菌淋病球菌肉毒梭菌霍亂弧菌（單細(xì)胞原核生物）1.細(xì)菌的形態(tài)（球、桿、弧、旋）第9頁/共89頁

知識梳理：細(xì)菌

芽孢：某些細(xì)菌在其生長發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體，稱為芽孢(內(nèi)生孢子）。能夠使細(xì)菌度過不良的環(huán)境。每一個細(xì)菌形成一個芽孢，所以其沒有繁殖功能。2.細(xì)菌的繁殖芽孢和孢子：二分裂

孢子：細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育成新個體。第10頁/共89頁

知識梳理：細(xì)菌2.細(xì)菌的結(jié)構(gòu)

芽孢第11頁/共89頁3.菌落（★高三考查較多）（1）定義：是一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見子細(xì)胞群體。P18舉例：有莢膜細(xì)菌：菌落光滑。S型

無莢膜細(xì)菌：菌落粗糙。R型（2）特征：表現(xiàn)在菌落的大小、形狀、光澤度、顏色、硬度透明度等方面。（3）功能：菌落特征是鑒別菌種的重要依據(jù)

知識梳理：細(xì)菌第12頁/共89頁幾種菌落及其形態(tài)第13頁/共89頁幾種菌落及其形態(tài)第14頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。2.培養(yǎng)基的成分：微生物的元素組成：C、H、O、N、P、S微生物生長需要的物質(zhì)——營養(yǎng)要素(一般含有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等四類)第15頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基2.培養(yǎng)基的成分：（1）碳源概念：能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)

物質(zhì)，需要量最大。種類：無機(jī)碳源

CO2、NaHCO3

有機(jī)碳源(有機(jī)物)

糖類、脂肪酸等

有機(jī)物；(天然成分混合物)花生粉餅石油等常用的碳源：糖類（尤其是葡萄糖）第16頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基2.培養(yǎng)基的成分：（1）碳源功能：

①構(gòu)成微生物的細(xì)胞質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；②異養(yǎng)微生物主要能源物質(zhì)第17頁/共89頁思考：

大腸桿菌，硝化細(xì)菌，藍(lán)細(xì)菌，乳酸菌分別選用哪種碳源？糖類，二氧化碳，二氧化碳，糖類第18頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基2.培養(yǎng)基的成分：（2）氮源概念：能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)種類：無機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽；

有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、氨基酸。功能：合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物（“含C、H、O、N”的有機(jī)物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等）第19頁/共89頁培養(yǎng)根瘤菌、大腸桿菌、硝化細(xì)菌時分別需要哪一類氮源？思考：N2，銨鹽或硝酸鹽、牛肉膏或蛋白胨等，NH3第20頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基2.培養(yǎng)基的成分：注意：關(guān)于能源物質(zhì)自養(yǎng)型： ①光能自養(yǎng)：太陽光 ②化能自養(yǎng)：無機(jī)物（氧化放能）【例】硝化細(xì)菌氨的氧化異養(yǎng)型：有機(jī)物（氧化分解放能）（3）水

（4）無機(jī)鹽第21頁/共89頁思考若乳酸菌、根瘤菌、固氮藍(lán)藻、硝化細(xì)菌混合在一起，我們配制什么樣的培養(yǎng)基可以將三種微生物分離？碳源氮源能源(物質(zhì))乳酸菌根瘤菌固氮藍(lán)藻硝化細(xì)菌光能糖類等含碳有機(jī)物N2有機(jī)物CO2銨鹽、硝酸鹽、有機(jī)氮糖類等含碳有機(jī)物有機(jī)物氨氨CO2N2第22頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基3.滿足微生物生長的條件：培養(yǎng)基除要提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)外，還滿足微生物生長的pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)

和氧氣

等要求。①pH：真菌5.0~6.0

細(xì)菌

6.5~7.5

放線菌

7.5~8.5第23頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基3.滿足微生物生長的條件：②特殊營養(yǎng)物質(zhì)——

概念：某些微生物正常生長代謝過程中必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機(jī)小分子；添加原因：微生物自身缺乏合成這些物質(zhì)的酶或合成能力有限種類：各種維生素、氨基酸、堿基、核苷酸等例如：培養(yǎng)乳酸菌時需要添加維生素生長因子第24頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基4.培養(yǎng)基的配制原則：（1）目的明確選材料（代謝特征、用途）（2）營養(yǎng)協(xié)調(diào)（注意營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例）（3）pH適宜

第25頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基（1）按物理性質(zhì)劃分：5.培養(yǎng)基的種類：（固體、半固體培養(yǎng)基需添加凝固劑，如瓊脂；兩者的差別是添加量的多、少）①液體培養(yǎng)基②半固體培養(yǎng)基③固體培養(yǎng)基（用于工業(yè)生產(chǎn)）（用于觀察微生物的運動、鑒定菌種）（用于微生物的分離、計數(shù)）微生物在其表面生長可形成菌落第26頁/共89頁(二)微生物培養(yǎng)基5.培養(yǎng)基的種類：（2）按化學(xué)成分劃分：

①合成培養(yǎng)基

②天然培養(yǎng)基

用化學(xué)成分已知的化合物配制含化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)，如酵母膏、牛肉膏前者常用于實驗室中對微生物的分類、鑒別；后者常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。第27頁/共89頁進(jìn)行選擇培養(yǎng)可以增加所需目的菌的濃度(二)微生物培養(yǎng)基5.培養(yǎng)基的種類：①選擇培養(yǎng)基：②鑒別培養(yǎng)基：加入某化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要微生物的生長。加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒定不同種類的微生物。特定菌種顯色，其他菌種不受抑制、但不顯色。（3）按用途劃分：（作用：分離微生物、進(jìn)行選擇培養(yǎng)）

（作用：鑒別微生物）

第28頁/共89頁青霉素抗青霉素基因選擇培養(yǎng)基在基因工程中，對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌的篩選第29頁/共89頁伊紅－美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基AABBCCDD

大腸桿菌在伊紅－美藍(lán)培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)黑色第30頁/共89頁常見的選擇培養(yǎng)基舉例：

（1）添加： ①青霉素：抑制細(xì)菌、放線菌 保留（分離）真菌，如霉菌、酵母菌 ②高濃度NaCl：抑制多種細(xì)菌， 分離金黃色葡萄球菌(二)微生物培養(yǎng)基5.培養(yǎng)基的種類：（3）按用途劃分：第31頁/共89頁常見的選擇培養(yǎng)基舉例：（2）缺少： ①培養(yǎng)基缺少有機(jī)碳源 分離自養(yǎng)型微生物（利用CO2

） ②培養(yǎng)基缺少氮源 分離固氮微生物（利用N2

）(二)微生物培養(yǎng)基5.培養(yǎng)基的種類：（3）按用途劃分：第32頁/共89頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基P84第33頁/共89頁練習(xí)1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源的是（）A．牛肉膏B．含碳有機(jī)物C．石油D．含碳無機(jī)物D第34頁/共89頁2.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是（）A．碳源B．氮源C．無機(jī)鹽D．生長因子A解析：自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的主要差別在于自養(yǎng)型微生物可以利用無機(jī)碳，異養(yǎng)型微生物只能以有機(jī)碳作為碳源．所以兩種培養(yǎng)基的主要差別在于碳源．第35頁/共89頁3.下列關(guān)于生長因子的說法中，不正確的一項是（）A．是微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物B．是微生物生長不可缺少的微量礦質(zhì)元素C．主要包括維生素、氨基酸和堿基等D．一般是酶和核酸的組成成分B第36頁/共89頁

4.通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在碳源為纖維素的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素，可以抑制細(xì)菌和放線菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出（）①大腸桿菌②霉菌③放線菌④纖維素分解菌

A.④②

B.①②

C.①③

D.③④

解析：選A。本題考查了微生物分離知識。纖維素分解菌可以利用纖維素，大部分微生物卻不能；培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌，但霉菌能夠生長。第37頁/共89頁（三）無菌技術(shù)

獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵(目的）是防止外來雜菌的入侵。1.無菌技術(shù)的概念

無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。第38頁/共89頁（三）無菌技術(shù)2.無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。第39頁/共89頁思考無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有什么目的？P15旁欄思考有效避免操作者自身被微生物感染思考：消毒和滅菌的區(qū)別？哪一個更徹底？什么時候需要消毒，什么時候需要滅菌？第40頁/共89頁消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物營養(yǎng)體（不包括芽孢和孢子）。滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌效果更徹底，用于各種金屬、玻璃器具。消毒用于各種實驗操作空間、操作者的衣著和手。（三）無菌技術(shù)2.無菌技術(shù)包括：第41頁/共89頁比較項理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能消毒與滅菌的比較第42頁/共89頁3.消毒方法：①煮沸消毒法：②巴氏消毒法：③化學(xué)藥劑消毒法:④紫外線消毒法：第43頁/共89頁①煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min可以殺死微生物細(xì)胞和一部分芽孢。3.消毒方法：第44頁/共89頁②巴氏消毒法：對于一些不耐高溫的液體，如牛奶，在70-75℃煮30min或在80℃煮15min，可以殺死牛奶中的微生物。第45頁/共89頁③化學(xué)藥劑消毒法:用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源。第46頁/共89頁④紫外線消毒法：表面滅菌和空氣滅菌等使用

紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。照射30min，可先噴灑石炭酸或煤酚皂溶液加強(qiáng)消毒效果。第47頁/共89頁（三）無菌技術(shù)4.滅菌方法：（1）灼燒滅菌法：用于金屬用具（接種環(huán)、接種針）、試管口和瓶口的滅菌；

灼燒滅菌微生物的接種工具

(接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍(1)

灼燒滅菌(2)干熱滅菌(3)

高壓蒸汽滅菌第48頁/共89頁（三）無菌技術(shù)4.滅菌方法：（2）干熱滅菌法：能耐高溫的需要保持干燥的物品,如玻璃器皿、金屬用具的滅菌，所用設(shè)備是干熱滅菌箱

；160~170℃，1~2小時第49頁/共89頁（三）無菌技術(shù)4.滅菌方法：（3）高壓蒸汽滅菌法：用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌，所用設(shè)備是

高壓蒸汽滅菌鍋

。高壓滅菌鍋121℃，100kPa，15-30分鐘第50頁/共89頁本實驗用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌兩個階段。二、實驗操作第51頁/共89頁

又稱牛肉浸膏，是采用新鮮牛肉經(jīng)過剔除脂肪、消化、過濾、濃縮而得到的一種棕黃色至棕褐色的膏狀物。

牛肉膏第52頁/共89頁第53頁/共89頁二、實驗操作

（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：2.稱量：3.溶化：加水定容，調(diào)pH4.滅菌：

5.倒平板：（或擱置斜面）

包好再高壓蒸汽滅菌（121℃，100kPa，15-30分鐘）。斜面培養(yǎng)基需先分裝，加棉塞，再包好、滅菌。培養(yǎng)基冷卻到50℃

，酒精燈火焰旁操作。第54頁/共89頁稱量第55頁/共89頁調(diào)pH第56頁/共89頁培養(yǎng)基分裝第57頁/共89頁1/5第58頁/共89頁加棉塞2/3第59頁/共89頁第60頁/共89頁包扎滅菌第61頁/共89頁擱置斜面斜面不超過試管總長的1/2第62頁/共89頁倒平板夾倒灼倒第63頁/共89頁答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？第64頁/共89頁3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第65頁/共89頁關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中，錯誤的是（）

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，進(jìn)行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5min～10min后，將平板倒過來放置

解析：選A。本題考查了牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備過程。其順序為：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，故A項錯誤。第66頁/共89頁【提醒關(guān)于斜面培養(yǎng)的問題】配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染。試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種面積。第67頁/共89頁（二）純化大腸桿菌：1.純化培養(yǎng)技術(shù)：自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純培養(yǎng)，首先要將單個細(xì)胞與其他細(xì)胞分離開，進(jìn)而培養(yǎng)成可見的群體（即菌落）。2.常見接種方法：★（高頻考點）平板劃線法：主要用于純化培養(yǎng)稀釋涂布平板法：主要用于分離菌種并計數(shù)第68頁/共89頁（二）純化大腸桿菌：其他接種方法：斜面接種、穿刺接種這些技術(shù)的操作方法各不相同，但其核心都是：___________________________________防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度第69頁/共89頁（二）純化大腸桿菌：2.常見接種方法：(1)平板劃線法：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的菌落。此法主要用于純化培養(yǎng)接種環(huán)...連續(xù)劃線，...逐步稀釋...第70頁/共89頁第71頁/共89頁將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)_______在_______旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞將試管口通過火焰.將已______的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃__________條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。.將試管通過火焰，并塞上棉塞火焰冷卻三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的_______開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。末端燒紅將平板_____放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

倒置第72頁/共89頁

平板劃線第73頁/共89頁（二）純化大腸桿菌：2.常見接種方法：(1)平板劃線法：接種過程中哪些步驟保證了無菌操作？對接種環(huán)、瓶(皿)口及時進(jìn)行灼燒滅菌；迅速進(jìn)行操作；將劃線后的平板倒置。第74頁/共89頁思考⑴為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一步灼燒：消滅接種環(huán)上的微生物避免污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒：為了殺死上一次劃線結(jié)束后，接種環(huán)殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。操作結(jié)束后灼燒：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境及感染操作者。第75頁/共89頁思考⑵在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種⑶在作第二次及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第76頁/共89頁（二）純化大腸桿菌：2.常見接種方法：(2)稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后，分別涂布到固體培養(yǎng)基表面。稀釋度足夠高時，能培養(yǎng)出單個菌落。主要用于分離菌種并計數(shù)。涂布器...梯度稀釋，...分別涂布...第77頁/共89頁將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中取少量稀釋液滴加到培養(yǎng)基表面待酒精燃盡后冷卻8～10s將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃灼燒用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻稀釋涂布平板法第78頁/共89頁思考：對涂布器、瓶(皿)口及時進(jìn)行灼燒滅菌；吸管頭不要接觸任何物體；在火焰周圍迅速操作。接種過程中如何進(jìn)行無菌操作？第79頁/共89頁三、結(jié)果分析與評價思考：若將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放在37℃恒溫箱中，培養(yǎng)一天，觀察到如下結(jié)果，請分析可能的原因。1.在培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿是否需要倒置？需要第80頁/共89頁三、結(jié)果分析與評價未接種培養(yǎng)基的作用是對照，應(yīng)該沒有菌落生長，若有菌落，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底或被污染。2.未接種的培養(yǎng)基表面有菌落生長，說明了什么？第81頁/共89頁三、結(jié)果分析與評價3．在培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能的原因是？不同的菌落代表不同的微生物；產(chǎn)生原因可能是培養(yǎng)基或接種過程中有其它微生物污染。4.培養(yǎng)12h和24h后觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？菌落大?。鹤兇?；菌落分布位置：不變。第82頁/共89頁四、課題延伸：1．菌種的臨時保存：將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基，放入4℃冰箱中保存。以后每3~6個月，要將菌種轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基。第83頁/共89頁四、課題延伸：2．菌種的長期保存：

3ml甘油瓶中裝入1ml甘油后滅菌，再加入1ml菌液，混勻后放入-20℃冷凍箱保存