第第28頁(yè)藥材及成方制劑顯微鑒別法目的：適用范圍：責(zé)任人：內(nèi)容：簡(jiǎn)述藥材及成方制劑顯微鑒別法就是應(yīng)用動(dòng)植物細(xì)胞、組織學(xué)和礦物晶體光學(xué)等“顯微鑒別法”。此法適用于：藥材性狀鑒別特征不明顯或外形相像而組織構(gòu)造不同；藥材裂開(kāi)不易辯認(rèn)或區(qū)分；藥材呈粉末狀或?yàn)槌煞街苿?；用顯微化學(xué)方法確定藥材中有效成分在組織中的分布狀況及其特征。在進(jìn)展顯微鑒別時(shí)，首先要將“檢樣”制成適于鏡檢的標(biāo)本。對(duì)于完整的藥當(dāng)處理后制片。切片〔永久切片，因制成的石蠟切片外形較完整，厚薄均勻，且可連續(xù)切片，觀看時(shí)便利，又能長(zhǎng)期保存。但由于制片技術(shù)簡(jiǎn)單，費(fèi)時(shí)太多，不適于日常藥檢類、花類及全草類藥材的葉片、花冠、萼片、苞片等的表皮組織，還需要將其制往往還要進(jìn)展“解離組織”后制片；觀看花粉粒、孢子等的形態(tài)特征或構(gòu)造，需故統(tǒng)稱其為“臨時(shí)制片技術(shù)”。儀器和用具儀器：光學(xué)顯微鏡、鏡臺(tái)測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺〔10/1000、離心機(jī)。用具〔包括粗鑷及眼科彎鑷與直鑷、剪〔眼科剪與手術(shù)剪、解剖針。載玻片、蓋玻片。、培育皿或小燒杯〔放切片用，切片后的處理均可在其中進(jìn)展、酒精燈、鐵三角架、石棉網(wǎng)、滴瓶、試管、試管架、滴管、玻璃棒(粗與細(xì))、乳缽、量筒。毛筆〔從刀上刷取切片用、鉛筆〔HB、4H、6H繪圖用、帶蓋搪瓷盤〔裝切片標(biāo)本用、紗布、吸水紙、火柴等。試液及用途此液為透化劑，可使干縮的細(xì)胞壁膨脹而透亮，并能溶解淀粉粒、樹(shù)脂、蛋白質(zhì)及揮發(fā)油等。甘油醋酸試液〔斯氏液此液專用于觀看淀粉形態(tài)，可使淀粉不膨脹變形，便于測(cè)量其大小。甘油一乙醇溶液：取甘油1份，50％乙醇1份，混合即得。此液為封藏液，用于保存植物材料及臨時(shí)切片，有軟化組織的作用。905ml5ml，搖2個(gè)月內(nèi)應(yīng)用。色。1-2ml，加釕紅適量使呈酒紅色即得，本液應(yīng)臨用制。此液可使粘液質(zhì)染成紅色。90100ml使溶解，濾過(guò)即得，應(yīng)置棕色玻璃瓶?jī)?nèi)，在暗處保存。此液與濃鹽酸合用，可使木化細(xì)胞壁染成紅色或紫紅色。即得。應(yīng)用時(shí)通常再加水稀釋成淡棕色或淡黃色。本液應(yīng)置棕色瓶?jī)?nèi)保存。此液用于檢查淀粉，染成藍(lán)色或紫色；蛋白質(zhì)或糊粉粒呈黃色。10ml100ml水中，混勻。另取鉻酸10g，加100ml使溶解。用時(shí)將二液等量混合，即得。此液為常用的“植物組織解離液”檢品的解離浸泡時(shí)間，按材料的質(zhì)地不同而異。α一萘酚試液：取15α一萘酚乙醇溶液10.5ml，緩緩參加硫酸6.5ml40.5ml4ml，混勻即得。此液用于檢查菊糖，染成紫紅色，并很快溶解。硝酸汞試液〔米隆氏試液4.5g3ml，俟作用完畢，此液用于檢查糊粉粒，染成磚紅色。化與纖維素細(xì)胞壁，前者顯黃棕色，后者顯藍(lán)色或紫色。顯微標(biāo)本片的制作切片制作標(biāo)本片〔橫切或縱切〕藥材的預(yù)處理先將藥材外表泥沙刷洗干凈，將應(yīng)觀看的部位，切成1cm3cm為宜，切面削平坦。質(zhì)地軟硬適中〔吸濕〕中悶潤(rùn)，或在水中浸軟或煮軟。有些根、根莖、莖及木類藥材，質(zhì)地雖堅(jiān)70％-9520分鐘后可變硬些，種子類可放在軟木塞或橡皮片中〔一側(cè)切一窄縫，將種子嵌入其中，葉類藥材可有質(zhì)地松軟的通草或向日葵的莖髓作夾持物進(jìn)展切片。油、樹(shù)脂等則不行與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。徒手切片的固有形態(tài)，便于進(jìn)展各種顯微化學(xué)反響觀看。切片前方向右前方切削，即可切得薄片。操作時(shí)，材料的切面和刀刃須常常加水或5050％乙醇的培育皿中。徒手圓筒生物切片器切片(如木本植物的莖干等)可直接固定于持物筒中；左手持切片器，拇指與小指持底盤切下的切片用毛筆沾水取下置盛水的培育皿中。裝片1-2滴，蓋好蓋玻片，即可在顯微鏡下觀看。如加水合氯醛試液透化，將薄片1-2滴水合氯醛試液，在酒精燈上微微加熱，至邊緣起小泡即停頓不宜對(duì)準(zhǔn)一處燒，以免受熱不勻而炸裂；透化后放冷加甘油乙醇試液1-2滴后加封蓋片，貼上標(biāo)簽，冬日室溫較低時(shí)，透化后不待放冷即滴加甘油乙醇液，以防細(xì)胞膨脹，能清楚觀看組織構(gòu)造，可溶解淀粉粒、蛋白質(zhì)、葉綠體、樹(shù)脂、揮發(fā)些多糖物質(zhì)則加水合氯醛試液不加熱。粉末制片主要用于粉末狀藥材及藥材粉末制成的成方制劑觀看。粉末制備藥材要先枯燥，磨或銼成細(xì)粉，裝瓶，貼上標(biāo)簽。粉末制備時(shí)，留意取樣必需全部磨成粉，不得丟棄渣頭，并需通過(guò)4號(hào)篩，混合均勻?？菰飼r(shí)，一般溫60℃，避開(kāi)經(jīng)受高溫，使淀粉粒糊化，難以觀看其完整性。制片法用解剖針挑取粉末少許，置載玻片的中心偏右的位置，加適宜1滴，用針攪勻〔如為酸或堿時(shí)應(yīng)用細(xì)玻棒代替針，待液體滲入粉末標(biāo)記。法裝片觀看。散劑：可直接取出粉末裝片或透扮裝片。含揮發(fā)性成分的制劑：取其粉末進(jìn)展微量升華裝片。粉末制片的留意事項(xiàng)抬，亦可使多數(shù)氣泡逸出，攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡可隨時(shí)用針將其移出?？蓍?，通常滴加少許甘油可延長(zhǎng)保存時(shí)間。需用水合氯醛試液透化時(shí)，應(yīng)留意把握操作方法。裝片后用手執(zhí)其此反復(fù)操作，直至粉末呈現(xiàn)透亮狀為止，放冷后滴加甘油鏡檢。粉末藥材制片時(shí)，每片取用量宜少不宜多，為使觀看全面，可多做些制片。如取量多，顯微特征單一輪廓不清，反而費(fèi)時(shí)，不易得出準(zhǔn)確結(jié)論。中透化好后再用吸管吸出，滴在載玻片上，加蓋玻片，即可觀看。外表標(biāo)本片主要用于葉類、花類〔萼片、花瓣、果實(shí)、草質(zhì)莖及鱗莖等藥材的外表特材則須撕下表皮然后裝片。整體裝片4mm2的兩小片，一反一正放在載玻片上，加水合氯醛試液加熱透化至透亮為止，蓋好蓋玻片即得。8mm2，置試管中加水合氯醛試液加熱透化，然后移至載玻片上，切成相等兩局部，將其中一片翻過(guò)來(lái)與另一片并列，再加1-2滴封藏液，蓋好玻片即得。外表撕離裝片輕輕割〔刮〕去不需要的各層組織，只保存表皮層〔上層或下層，將欲觀看的表皮外表觀朝上，置載玻片上，加透化劑透化后，放冷，加稀甘油1滴，蓋上玻片，貼上標(biāo)簽，即得。解離組織片〔長(zhǎng)約5mm2mm〕或片〔1mm，對(duì)于木類或莖類木質(zhì)部，最好切成縱長(zhǎng)的小段。然后依據(jù)細(xì)胞壁的性質(zhì)，依據(jù)以下方法之一進(jìn)展處理：如樣品堅(jiān)硬，木木化組織少或分散存在的樣品，可用氫氧化鉀法。氫氧化鉀法52-5ml。加熱，至用玻璃棒擠壓能離油裝置觀看。硝鉻酸法將樣品置于小燒杯中，加20％硝酸與20％鉻酸的等量混合液適量，使之浸撕開(kāi)，以稀甘油裝置觀看。氯酸鉀法將樣品置于試管中，加硝酸溶液1-2ml〕及氯酸鉀少量，緩緩加熱壓能離散為止。傾去酸液用水洗滌后撕開(kāi)，封藏。留意事項(xiàng)5-15分鐘，操作過(guò)程中產(chǎn)生的氯氣有毒，要留意通風(fēng)?；ǚ哿Ｅc孢子制片取花粉、花藥〔或小的花〕或孢子囊群〔枯燥樣品浸于冰醋酸中軟化，用〔9：1〕1-3ml2-3分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌5013-4滴，用品紅甘油膠封藏觀看，也可直接用水合氯醛試液裝片，具體操作同粉末標(biāo)本片。磨片石決明、動(dòng)物骨骼、礦物藥等可承受磨片法制片。片的厚度一般為20-50μm，磨片方法有手工磨制與機(jī)器磨制。手工磨制選取適宜的材料，一般以1－2mm為度，先置粗磨石〔或磨砂玻璃板上〕加適量水，用食指，中指夾住材料，在磨石上來(lái)回研磨，待兩面磨均勻，厚度約數(shù)百μm〔20－50μm〕95%乙醇處理，封藏。顯微測(cè)量是長(zhǎng)度測(cè)定，常用的量具是目鏡測(cè)微尺與載物臺(tái)測(cè)微尺。一個(gè)直徑18-20mm50或100條。目鏡測(cè)微尺是用以直接測(cè)量物體用的，但其刻度所代表的長(zhǎng)度是依據(jù)顯微鏡放大倍數(shù)不同而轉(zhuǎn)變，故使用前必需用載物臺(tái)測(cè)微尺來(lái)標(biāo)化。1mm〔2mm〕100〔200〕小10μm，它是用以標(biāo)化目鏡測(cè)微尺的。鏡筒長(zhǎng)度時(shí)，目鏡測(cè)微尺上每一格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度。標(biāo)化方法：將載物臺(tái)測(cè)微尺置于顯微鏡鏡臺(tái)上，按常規(guī)對(duì)光調(diào)焦，并移動(dòng)尺放入目鏡筒中部的光欄上〔應(yīng)正面對(duì)上，旋上目鏡蓋后返置鏡筒上。此時(shí)在“0”刻度重合，查找其次條件下所相當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度〔m。例如：接目鏡頭為10，接物鏡頭為40微尺每17小格相當(dāng)于載物臺(tái)量尺4小格，則目鏡測(cè)微尺每1小格的長(zhǎng)度為4×10μm÷17=2.35μm。測(cè)定細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物的方法：將載物臺(tái)測(cè)微尺取下，換以裝有待測(cè)的1小格的長(zhǎng)度值即得。計(jì)算公式：鏡臺(tái)測(cè)微尺與目鏡測(cè)微尺重合時(shí)所具的長(zhǎng)度〔μm〕待測(cè)物體長(zhǎng)度〔μm〕= ×所測(cè)物體占有目鏡測(cè)微尺的格數(shù)目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺重合時(shí)所占的格式2.35μm，20×2.35mm=47μm。留意事項(xiàng)測(cè)量較為便利。每次測(cè)量登記數(shù)據(jù)，并分析數(shù)據(jù)最小量值、最大量值和多見(jiàn)量值〔μm6-5μmμm，中間的數(shù)值表示多見(jiàn)量值，測(cè)量直徑時(shí)，應(yīng)以物體中部為準(zhǔn)。測(cè)量時(shí)，如大小與規(guī)定有差異時(shí)，允許有少量略高于或低于規(guī)定的數(shù)值。顯微鑒別法留意事項(xiàng)粉碎用具用畢后，必需處理干凈，枯燥后才能使用于另一種藥材。70％-90％乙醇中，取出，烘干。進(jìn)展顯微鑒別試驗(yàn)時(shí)有肯定的步驟，一般先進(jìn)展甘油醋酸片的觀看，所以在試驗(yàn)中首先觀看淀粉粒，不管其多少和大小，首先描述，其次才