第1頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二講課內容

醋酸纖維素

1

醋酸纖維薄膜的特點

2

影響電泳結果的因素

3

血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳

4第2頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二一、醋酸纖維素（Celluloseacetate）

是纖維素醋酸酯(acetateesterofcellulose)，由纖維素的羥基進行乙?；笾频?，將它溶于有機溶劑涂抹成均勻的薄膜，待有機溶劑揮發(fā)后，即為白色不透明的醋酸纖維薄膜厚度：0.15mm第3頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二MagnificationofCelluloseAcetatefilter

第4頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二講課內容

醋酸纖維素

1

醋酸纖維薄膜的特點

2

影響電泳結果的因素

3

血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳

4第5頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二二、醋酸纖維薄膜的特點

CharacteristicsofCelluloseAcetateMembrane

1.吸附作用小2.電滲(electroosmosis)作用小3.需加樣量少4.親水性較小

第6頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二血清蛋白質各組分的相對分子重量及等電點

MolecularweightandisoelectricpointofserumproteinsserumproteinMW

pIAlb12

6624813000020000013000001500000

4.865.025.025.126.8～7.3

第7頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二Amidoblack10B第8頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二氨基黑10B染色洗脫法結果蛋白組分

平均值（%）

參考范圍

（%）Alb1265.593.126.169.0917.4057.45～71.731.76～4.484.04～8.286.79～11.3911.85～22.97第9頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二PonceauS第10頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二麗春紅S染色掃描法結果

蛋白組分

g/L

占蛋白百分數（%）

Alb

35～5257～681

1.0～4.01.0～5.72

4.0～8.04.9～11.2

5.0～10.07.0～13

6.0～13.09.8～18.2第11頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二Schematicrepresentationofaproteinelectrophoresis

第12頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二幾種疾病的蛋白電泳變化

Abnormalserumproteinelectrophoresis病名

Alb

1

2

腎病肝硬化原發(fā)性肝癌多發(fā)性骨髓瘤慢性炎癥無丙種球蛋白癥雙白蛋白血癥↓↓↓↓↓↓↓

↑↓AFP

↑↑↑↓

↑

↑-橋

↑

↓↑↑↑↑↑↑↓↓

第13頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二第14頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二-橋第15頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二第16頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二雙白蛋白血癥第17頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二講課內容

醋酸纖維素

1

醋酸纖維薄膜的特點

2

影響電泳結果的因素

3

血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳

4第18頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二三、影響電泳結果的因素

Factorsaffectingresults1.

電泳圖譜不齊①點樣時血清點加不均勻②薄膜局部干燥③電泳時供給薄膜的液量不均勻或過少④緩沖液變質⑤電泳時薄膜位置不正,與電流方向不平行

第19頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二2.電泳圖譜分離不清①標本加量過多②電流過低③薄膜結構過分致密，透水性差④薄膜表面干燥第20頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二3.

電泳速度慢①電流過低②供給薄膜的液量不足③電泳時溫度過低④緩沖液離子強度過高⑤薄膜中雜質多第21頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二4.

白蛋白（Albumin)區(qū)帶中間部分不著色，染色不足可能為染料使用過久或加血清(Serum)過多5.γ球蛋白(γ-globin)向反方向移動主要因為電滲（electro-osmosis）現象可升高緩沖液液面或加大電流量加以改進，并注意兩側電泳槽內緩沖液液面是否在同一水平。第22頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二講課內容

醋酸纖維素

1

醋酸纖維薄膜的特點

2

影響電泳結果的因素

3

血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳

4第23頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二血清蛋白質醋酸纖維薄膜電泳

Separateserumproteinincelluloseacetatemembraneelectrophoresis

第24頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二[原理]CAME是以醋纖膜（CAM）作支持物的一種區(qū)帶電泳技術。將血清樣品點樣于醋纖膜上，在pH8.6的緩沖液中電泳時，血清蛋白質均帶負電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。Ionshavedifferentmigrationratesdependingontheirtotalcharge,size,andshape,andcanthereforebeseparated.

第25頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二EQV=————6r

第26頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二[器材和試劑]1.器材（1）醋酸纖維薄膜（8×2mm）（2）點樣器（3）染色皿，漂洗器，鑷子（4）722型分光光度計（5）電泳儀：直流電源整流器，水平電泳槽2.試劑（1）巴比妥緩沖液（pH8.6I=0.06）（2）氨基黑10B染色液（3）漂洗液：95%乙醇、冰醋酸、H2O（4）洗脫液：0.4mol/LNaOH第27頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二[操作]1.將電泳槽置于水平平臺上。將緩沖液注入電泳槽中兩邊的電極槽緩沖液的高度要在同一點平面上2.在醋纖膜一端欲點樣處作好標記，然后將薄膜放進緩沖液中，濕潤速度按膜吸收緩沖液的快慢而定，應讓其自然浸潤3.將充分浸透（指膜上沒有白色斑痕）的薄膜取出，用濾紙吸去膜上過多的緩沖液4.用加樣器蘸取血清（約5ul）,垂直印在CAM粗糙面上，待樣品全部滲入薄膜內后，移開點樣器第28頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點樣位置示意圖第29頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二5．電泳(Electrophoresis)（1）加樣后，將薄膜條架于支架兩端，無光澤面朝下（點樣面），點樣側置于陰極端，膜兩側分別塔上紗布，紗布一端垂入緩沖液中。薄膜應位正，平直無彎曲，加上槽蓋平衡5分鐘后通電電泳（2）正確連接電泳槽與整流器對應的正負極。開啟電源通電。電壓10~15V/cm膜總寬。電泳40~60分鐘，泳動距離約達3.5~4cm時即可斷電第30頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖第31頁，共33頁，2023年，2月20日，星期二6.染