發(fā)酵法制γ-癸內(nèi)酯內(nèi)容：1.γ-癸內(nèi)酯1.1什么是γ-癸內(nèi)酯1.2γ-癸內(nèi)酯的制備方法1.3γ-癸內(nèi)酯的研究現(xiàn)狀2.發(fā)酵法制γ-癸內(nèi)酯2.1實(shí)驗(yàn)原理2.2實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器2.3實(shí)驗(yàn)過(guò)程及方法2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.5數(shù)據(jù)分析與討論3.結(jié)論及感想1.γ-癸內(nèi)酯1.2γ-癸內(nèi)酯的制備方法：微生物發(fā)酵法：解脂假絲酵母菌化學(xué)合成方法：由烯烴作原料1.3γ-癸內(nèi)酯的現(xiàn)狀：內(nèi)酯類(lèi)香料是香料家族中成員最少的一類(lèi)，而且在自然界中存在很少，內(nèi)酯類(lèi)香料的香氣一般較為高雅，適宜調(diào)配各種香精。內(nèi)酯類(lèi)與酯類(lèi)在香氣特征上有相似之處，即均具有突出的果香香氣，廣泛用于配制食用香精和日用香精，并用作合成香料、藥物和農(nóng)藥的中間體以及聚合物和共聚物用溶劑等。2.發(fā)酵法制γ-癸內(nèi)酯2.2實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器：實(shí)驗(yàn)用菌株：解脂假絲酵母（yarrowialipolytica）主要實(shí)驗(yàn)試劑：γ-癸內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品、酵母膏、蛋白胨、磷酸二氫鉀、七水合硫酸鎂、磷酸氫二鈉、吐溫80、葡萄糖、蓖麻油主要實(shí)驗(yàn)儀器：無(wú)菌操作臺(tái)、高壓鍋、氣象色譜儀、阿貝折射儀、HYG加回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速藥瓶柜、離心機(jī)實(shí)驗(yàn)中所需培養(yǎng)基的配制：種子培養(yǎng)基：葡萄糖15.00g/l蛋白胨2.50g/l磷酸二氫鉀0.50g/lMgSO4.7H2O2.40g/l磷酸氫二鈉1.20g/l吐溫804.00g/l酵母膏2.50g/l發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖15.00g/l蛋白胨2.50g/l磷酸二氫鉀0.50g/lMgSO4.7H2O2.40g/l磷酸氫二鈉1.20g/l吐溫804.00g/l蓖麻油50.00g/l酵母膏2.50g/l2.3實(shí)驗(yàn)過(guò)程及方法：Ⅰ.菌種培養(yǎng)：(1).配制培養(yǎng)基：配置菌種培養(yǎng)基500ml，pH調(diào)至6.5。將菌種培養(yǎng)基500ml分裝于三個(gè)150ml錐形瓶?jī)?nèi)，用棉花報(bào)紙封裝好，標(biāo)記①②③，放置在高壓鍋內(nèi)滅菌（121℃，0.1mp,20min）。將滅菌后的種子培養(yǎng)基置于30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，以便查看是否滅菌完全。(2).培養(yǎng)過(guò)程：24h后，觀察培養(yǎng)基仍澄清、無(wú)渾濁現(xiàn)象，則未染菌，實(shí)驗(yàn)可繼續(xù)進(jìn)行。在無(wú)菌操作臺(tái)上接種（準(zhǔn)備工作：先開(kāi)紫外線燈進(jìn)行殺菌，一段時(shí)間后，關(guān)上紫外燈進(jìn)行操作），用酒精進(jìn)行消毒，在酒精燈外焰無(wú)菌區(qū)以一接種環(huán)的菌量接種至每150ml種子培養(yǎng)基中,然后密封完全。將接種后的種子培養(yǎng)基培養(yǎng)在HYG-Ⅲ回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖瓶柜（25℃、175r/min）中，培養(yǎng)24h。。Ⅱ.發(fā)酵培養(yǎng)：（1）.配制培養(yǎng)基：配置發(fā)酵培養(yǎng)基500ml，pH調(diào)制6.5。將發(fā)酵培養(yǎng)基500ml分裝于三個(gè)150ml錐形瓶?jī)?nèi)，用棉花報(bào)紙封裝好，標(biāo)記①②③，放置在高壓鍋內(nèi)滅菌（121℃，0.1mp,20min）。將滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基置于30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，以便查看是否滅菌完全。（2）.培養(yǎng)過(guò)程：24h后檢查結(jié)果，培養(yǎng)基表面出現(xiàn)白色斑狀物，說(shuō)明染菌（原因是瓶口沒(méi)封好，報(bào)紙有破損）照相同配方從新做一次，條件相同。發(fā)酵培養(yǎng)基澄清，無(wú)渾濁現(xiàn)象，說(shuō)明未染菌可以繼續(xù)使用。同時(shí)觀察培養(yǎng)了24h后的種子培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)溶液較渾濁，說(shuō)明菌種生長(zhǎng)較好，有一定數(shù)量的菌種產(chǎn)生。分別將①②③號(hào)瓶?jī)?nèi)的菌種培養(yǎng)基各10ml加入到對(duì)應(yīng)①②③號(hào)瓶的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后放置HYG-Ⅲ回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖瓶柜中培養(yǎng)48h（25℃，175r/min）。（3）.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：48小時(shí)后觀察，發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵完全，表面無(wú)油狀物，蓖麻油發(fā)酵完全，培養(yǎng)基呈乳白色，渾濁，打開(kāi)后塞子后可以聞到明顯的桃香味。Ⅲ.γ-癸內(nèi)酯的提取:(兩種提取方法)(1).低速離心、萃取(4500r/min,10min)(2).高速離心、萃取(10000r/min,10min)Ⅳ.測(cè)定方法：(1).氣象色譜檢測(cè)法:色譜柱(Agilent19091J-413HP-5),毛細(xì)管色譜柱,柱長(zhǎng)15m,內(nèi)徑0.25mm；載氣:氦氣,壓力0.5MPa；柱箱溫度采用程序升溫:40℃保持1min,以6℃/min的速度升溫至160℃,保持2min,再以8℃/min的速度升溫至230℃并保持20min;進(jìn)樣口溫度為250℃;分流比10：1;進(jìn)樣體積1.0μL

檢測(cè)器:氫火焰離子檢測(cè)器(FID),檢測(cè)器溫度250℃。(2).阿貝折射儀檢測(cè)：準(zhǔn)備工作：阿貝折射儀、擦鏡紙、擦鏡液（無(wú)水乙醇∶乙醚=1∶1各20ml）、標(biāo)品、樣品相同條件下分別檢測(cè)第一次離心所得液的上層油層和下層液體及第二次離心所得液的油層和下層液體的折光率，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.通過(guò)觀察最后的發(fā)酵液，聞其氣味，有很明顯的桃香味，與標(biāo)品γ-癸內(nèi)酯及相關(guān)文獻(xiàn)的描述的氣味相符，可初步判定發(fā)酵液中含有γ-癸內(nèi)酯。2.氣相色譜檢測(cè)結(jié)果：檢測(cè)幾次均無(wú)結(jié)果，由于儀器陳舊，不易點(diǎn)火等客觀條件機(jī)器出現(xiàn)機(jī)械漂移，無(wú)法檢測(cè)；之后負(fù)責(zé)老師陳老師分析主要原因?yàn)閷W(xué)校的氣相色譜儀內(nèi)的毛細(xì)管柱（5%苯基的甲基聚硅氧烷）為非極性，而我們實(shí)驗(yàn)條件毛細(xì)管柱應(yīng)為極性，條件不一致，因