實驗五過氧化物酶酶活性的測定_第1頁
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實驗五過氧化物酶酶活性的測定第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六一、實驗目的熟悉測定過氧化物酶活性的常用方法及其測定原理。第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六

過氧化物酶（POD)過氧化物酶廣泛存在于植物體中，是活性較高的一種酶。它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有關系。在植物生長發(fā)育過程中它的活性不斷發(fā)生變化。一般老化組織中活性較高，幼嫩組織中活性較弱。這是因為過氧化物酶能使組織中所含的某些碳水化合物轉化成木質素，增加木質化程度。此外，過氧化物同工酶在遺傳育種中的重要作用也正在受到重視。第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六二、實驗原理RH2+H2O2→2H2O+R在有過氧化氫存在的條件下，過氧化物酶能使鄰甲氧基苯酚（愈創(chuàng)木酚）氧化，生成茶褐色物質，該物質在470nm處有最大吸收，可用分光光度計測量470nm處的吸光度變化速率來測定過氧化物酶活性。第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六三、實驗材料菠菜、油菜、樹葉、草、

第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六四、儀器用品與試劑分光光度計，研缽，移液管，吸管愈創(chuàng)木酚，30％過氧化氫，磷酸緩沖液第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六五、實驗步驟1、稱取植物材料0.5g，剪碎，放入研缽中，加入1ml磷酸緩沖液（0.05mol/L）研磨成勻漿，以12000rpm離心15min，上清液即為粗酶液。試劑01230.01mol/L磷酸緩沖液，ml0.02mol/L愈創(chuàng)木酚，ml酶液，ml2.920.0502.90.050.022.90.050.022.90.050.02加好反應物，搖勻，立即加新配制的H2O2(0.01ml)，即刻搖勻并計時，每隔30s讀數1次，共計6個數值。對照管測定管第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六六、實驗結果

式中：ΔA470——反應時間內OD變化值W

——植物鮮重（g）

t

——反應時間（min）過氧化物酶活力=ΔA470W×0.01×

t用每minOD值變化0.01作為1個過氧化物酶活性單位（U）表示第9頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六七、思考題說明植物過氧化物

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