色譜分析法引論第1頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六色譜的來源和發(fā)展1色譜法的分類2色譜法的基本原理3第2頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六色譜法的來源和發(fā)展色譜法也叫層析法，它是一種高效能的物理分離技術，將它用于分析化學并配合適當?shù)臋z測手段，就成為色譜分析法。1903年，俄國植物學家MikhailTswett最先發(fā)明。他采用填充有固體CaCO3細粒子的玻璃柱，將植物色素的混合物加于柱頂端，然后以溶劑淋洗，被分離的組份在柱中顯示了不同的色帶，他稱之為色譜。第3頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六(1）粗葉綠素+石油醚（2）石油醚流動相相對運動固定相（吸附劑）CaCO3胡蘿卜素利用不同物質葉黃素在流動相與固定相葉綠素作用時的行為差異得到分離(吸附)

（3）小刀割開，用醇溶出

第4頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六1944年紙色譜20世紀50年代薄層色譜1952年氣相色譜20世紀60年代末高效液相色譜1975年離子色譜20世紀70年代末~80年代初毛細管電泳

第5頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六Agilent6280第6頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六

Tiselius,A.W.K.Martin,A.J.P.Synge,R.L.M.

1948年Nobel化學獎1952年Nobel化學獎吸附色譜與電泳分配色譜第7頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六色譜法的分類色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。

從兩相的狀態(tài)分類：色譜法中，流動相可以是氣體，也可以是液體，由此可分為氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）和超臨界體色譜（SFC）。固定相既可以是固體，也可以是涂在固體上的液體，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。按固定相的形式分類：

柱色譜：固定相裝在色譜柱中；

紙色譜：利用濾紙作載體，吸附在紙上的水作固定相；

薄層色譜：將固體吸附劑在玻璃板或塑料板上制成薄層作固定相。第8頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六第9頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六3.按分離原理分類：

吸附色譜法：利用吸附劑（固定相一般是固體）表面對不同組分吸附能力的差別進行分離的方法。

分配色譜法：利用不同組分在兩相間的分配系數(shù)的差別進行分離的方法。

離子交換色譜：利用溶液中不同離子與離子交換劑間的交換能力的不同而進行分離的方法。

空間排阻色譜法：利用多孔性物質對不同大小的分子的排阻作用進行分離的方法。第10頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六第11頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六色譜法的基本原理利用物質在流動相與固定相兩相中的分配（吸附）系數(shù)差異而被分離，樣品中的組分在兩相中多次分配（吸附），分配（吸附）系數(shù)小的遷移速度快，先流出柱，分配（吸附）系數(shù)大的遷移速度慢，后流出柱，從而達到分離。用來描述分離過程樣品分子在兩相間的分配（吸附）的參數(shù)稱為分配系數(shù)（吸附平衡常數(shù)）。它是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達平衡時的濃度之比值。

第12頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六

1.薄層色譜

0.25mm厚纖維素，硅膠

玻板

2.紙色譜

濾紙液-液萃取為原理組份在兩相中反復分配因毛細作用而上升溶劑

溶質在水相中各種存在形式總濃度分配比k=

c水/c有

溶質在有機相中各種存在形式總濃度平面色譜第13頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、纖維素等。常用展開劑：極性弱強石油醚、環(huán)己烷、二硫化碳、四氯化碳、苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水、醋酸等。第14頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六流動相上升前沿

比移值

Rf1=Zx1/ZZx2

Rf2=Zx2/ZZx2

圖中kx2小→快→Rf2大

x1

kx1大→慢→Rf1小分開

Zx1

斑點位置Rf值定性斑點用熒光、光度積分值定量展開劑（有機溶劑）流動相第15頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六

比移值與組分，溫度，薄層板和展開劑等因素都有關系。Rf=0表示斑點在原點不動，組分被吸附的太強。Rf=1表示斑點隨著展開劑遷移到前沿，組分不被吸附。Rf=0.2-0.8為可用，Rf=0.3-0.5為最佳，相鄰兩組份應差0.05以上。第16頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六柱色譜A組分被吸附弱，移動快，先被洗脫出B組分被吸附強，移動慢，后被洗脫出第17頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六

樣品固定相檢測器流動相柱tRAtRB濃度時間第18頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六色譜圖隨時間t記錄色譜流出曲線，即色譜圖?；€：沒有被測組分通過檢測器時所得到的信號-時間曲線稱為基線。

死時間t0

：不與固定相作用的物質從進樣到出現(xiàn)峰極大值時的時間，保留時間tR

：試樣從進樣到出現(xiàn)峰極大值時的時間。它包括組份隨流動相通過柱子的時間t0和組份在固定相中滯留時間。調整保留時間tR′：某組份的保留時間扣除死時間后的保留時間，它是組份在固定相中的滯留時間。第19頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六基線：無試樣通過檢測器時，檢測的信號即為基線。死時間

t0

柱出口處流動相的體積流速死體積V0=t0·F0

保留時間

tR

（即柱溫和大氣壓的載氣流速）保留體積

VR=tR·F0

校正保留體積

VR0=tR·FC調整保留時間tR′=

tR

–

t0柱內平均體積流速調整保留體積VR′=

VR

–V0

=tR′·F0凈保留體積VR0′

=tR′

·FC

第20頁，共23頁，2023年，2月20日，星期六峰高h：組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時的檢測信號，即色譜峰頂至基線的距離。區(qū)域寬度：用于衡量柱效及反映色譜操作條件下的動力學因素。通常有三種表示方法。

標準偏差：0.607倍峰寬處的一半。

半峰寬W1/2：峰高一半處的峰寬。

峰底寬W：色譜峰兩側拐點上切線與基線的交點間的距離。W=4第21頁，共23頁，