厭氧性細(xì)菌及檢驗(yàn)

臨床微生物教研室

袁小澎病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第1頁(yè)一定義有氧條件下不能生長(zhǎng)，無氧條件(不是絕對(duì)）下才能夠生長(zhǎng)一類細(xì)菌1836年P(guān)asteur提出臨床上日益受到重視，60%臨床標(biāo)本存在厭氧菌感染---------------------需要重視病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第2頁(yè)病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第3頁(yè)二分類

1有芽孢厭氧性細(xì)菌一個(gè)梭菌屬包含83個(gè)種2無芽孢厭氧性細(xì)菌40多個(gè)菌屬，300多個(gè)菌種和亞種病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第4頁(yè)三感染分布原因臨床癥狀病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第5頁(yè)厭氧菌在正常人體內(nèi)分布厭氧菌皮膚上呼吸道口腔腸道尿道陰道一芽孢菌G+桿菌梭狀芽孢桿菌屬二無芽孢菌（一）G+桿菌雙歧桿菌（二）G-桿菌類桿菌屬（三）G+球菌消化球菌屬（四）G-球菌韋榮氏菌屬000+000+++±++++++++++++++++±0+±±±±++++病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第6頁(yè)致病原因1組織缺氧或氧化還原電勢(shì)降低穿刺傷等封閉性傷口，血管壓迫，腫瘤壓迫等等2機(jī)體免疫力低下病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第7頁(yè)臨床癥狀1感染部位產(chǎn)生大量氣體，組織膿腫和壞死，皮下有捻發(fā)音，是產(chǎn)氣夾膜梭菌感染特征2分泌物有惡臭，或?yàn)榘导t色，分泌物涂片經(jīng)革蘭氏染色，發(fā)覺細(xì)菌，而培養(yǎng)陰性3其它等等病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第8頁(yè)厭氧菌標(biāo)本采集和送檢標(biāo)本采集和送檢------------1標(biāo)本決不能被正常菌群污染；2應(yīng)盡可能防止空氣病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第9頁(yè)標(biāo)本采集標(biāo)本起源搜集方法封閉性膿腫婦女生殖道下呼吸道分泌物胸腔竇道，子宮腔，深部創(chuàng)傷組織尿道針管抽取后穹隆穿刺抽取肺穿刺術(shù)胸腔穿刺術(shù)靜脈注射塑料導(dǎo)管穿入無菌外科切開上陰部膀胱穿刺病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第10頁(yè)標(biāo)本送運(yùn)與處理針筒送運(yùn)法無菌小瓶送運(yùn)法棉拭送運(yùn)法大量標(biāo)本送運(yùn)法組織塊送運(yùn)法厭氧袋送運(yùn)法病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第11頁(yè)分離和判定

病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第12頁(yè)病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第13頁(yè)檢驗(yàn)方法1直接鏡檢一些特殊特點(diǎn)，臨床工作中總結(jié)可對(duì)初步判斷及臨床應(yīng)用做早一步指導(dǎo)作用病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第14頁(yè)2分離培養(yǎng)

1初步培養(yǎng)1）培養(yǎng)基選擇強(qiáng)化血瓊脂平板卡那萬古霉素凍溶血瓊脂平板七葉苷膽汁平板等等病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第15頁(yè)2）標(biāo)本接種每份標(biāo)本應(yīng)接種3個(gè)培養(yǎng)平板，分別放置于有氧，無氧和含5%~10%CO2容器中，有時(shí)需要專用培養(yǎng)基病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第16頁(yè)

3）厭氧培養(yǎng)法a厭氧罐培養(yǎng)法b氣袋法c氣體噴射法d厭氧手套箱法e其它等等病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第17頁(yè)2次代培養(yǎng)和厭氧菌確實(shí)定病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第18頁(yè)3分離培養(yǎng)中可能失敗原因1）培養(yǎng)前為做標(biāo)本直接涂片和染色鏡檢2）標(biāo)本在空氣中放置太久或接種時(shí)時(shí)間過長(zhǎng)3）未用新鮮配制培養(yǎng)基病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第19頁(yè)4）未用選擇性培養(yǎng)基5）無適當(dāng)厭氧罐或裝備出現(xiàn)問題6）培養(yǎng)時(shí)間不足7）…..病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第20頁(yè)判定試驗(yàn)1形態(tài)和染色主要是為下一步判定提供參考，時(shí)間

破傷風(fēng)梭菌革蘭氏染色改變拉絲試驗(yàn)加KOH30g/l一滴，能拉絲為陰性不能為陽(yáng)性病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第21頁(yè)P(yáng)H

痤瘡丙酸桿菌7.0時(shí)陰性及多型性6.0及以下革蘭氏陽(yáng)性桿菌

病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第22頁(yè)2菌落性狀1）色素產(chǎn)黑色素類桿菌2~10天可產(chǎn)生黑色素；溶齒放線菌培養(yǎng)3~4天產(chǎn)生粉紅色色素2）溶血產(chǎn)氣夾膜梭菌在新鮮血瓊脂平板上可產(chǎn)生雙溶血環(huán)3）熒光病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第23頁(yè)3抗生素敏感試驗(yàn)4一些特殊敏感試驗(yàn)——聚茴香腦磺酸鈉敏感試驗(yàn)5生化特征6氣液相色撲7PCR等等病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第24頁(yè)有芽孢厭氧菌介紹梭菌屬G+陳舊性培養(yǎng)基G-病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第25頁(yè)四破傷風(fēng)梭菌大量存在于人和動(dòng)物腸道糞便污染傷口被污染造成----------注意消毒清潔芽孢為于頂部，呈鼓槌壯，直徑比菌體粗，呈梭狀能夠被用來生物技術(shù)，外毒素致毒病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第26頁(yè)一）生物學(xué)性狀染色，培養(yǎng)生化對(duì)我們?cè)囼?yàn)診療來說最主要病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第27頁(yè)破傷風(fēng)梭菌菌體細(xì)長(zhǎng)，長(zhǎng)4～8um，寬0.3～0.5um，周身鞭毛，芽胞呈圓形，位于菌體頂端，直徑比菌體寬大，似鼓槌狀，是本菌形態(tài)上特征。繁殖體為革蘭氏陽(yáng)性，帶上芽胞菌體易轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。破傷風(fēng)梭菌為專性厭氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為37℃pH7.0～7.5，病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第28頁(yè)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂平板上培養(yǎng)24～48小時(shí)后，可形成直徑1mm以上不規(guī)則菌落，中心緊密，周圍疏松，似羽毛狀菌落，易在培養(yǎng)基表面遷徒擴(kuò)散。在血液瓊脂平板上有顯著溶血環(huán)，在皰肉培養(yǎng)基中培養(yǎng)，肉湯渾濁，肉渣部分被消化，微變黑，產(chǎn)生氣體，生成甲基硫醇（有腐敗臭味）及硫化氫。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第29頁(yè)病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第30頁(yè)普通不發(fā)酵糖類，能液化明膠，產(chǎn)生硫化氫，形成吲哚，不能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。對(duì)蛋白質(zhì)有微弱消化作用。本菌繁殖體抵抗力與其它細(xì)菌相同，但芽胞抵抗力強(qiáng)大。在土壤中可存活數(shù)十年，能耐煮沸40～50分鐘。對(duì)青霉素敏感，磺胺類有抑菌作用。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第31頁(yè)二）致病性與免疫性破傷風(fēng)梭菌芽胞廣泛分布于自然界中可由傷口侵入人體，發(fā)芽繁殖而致病，但破傷風(fēng)梭菌是厭氧菌，在普通傷口中不能生長(zhǎng)，傷口厭氧環(huán)境是破傷風(fēng)梭菌感染主要條件。窄而深傷口（如剌傷），有泥土或異物污染，或大面積創(chuàng)傷、燒傷、壞死組織多，局部組織缺血或同時(shí)有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染，均易造成厭氧環(huán)境，局部氧化還原電勢(shì)降低。有利于破傷風(fēng)桿菌生長(zhǎng)病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第32頁(yè)破傷風(fēng)梭菌能產(chǎn)生強(qiáng)烈外毒素，即破傷風(fēng)痙攣毒素（Tetanospasmin）或稱神經(jīng)毒素(Neurotoxin)。破傷風(fēng)毒痙攣毒素是一個(gè)神經(jīng)毒素，為蛋白質(zhì)，由十余種氨基酸組成不耐熱，可被腸道蛋白酶破壞，故口服毒素不起作用。在菌體內(nèi)痙攣毒素是單一和一條多肽鏈，分子量15萬。破傷風(fēng)毒素毒性非常強(qiáng)烈，僅次于肉毒毒素。破傷風(fēng)梭菌沒有侵襲力病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第33頁(yè)三）微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)方法和判定病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第34頁(yè)五氣性壞疽病原菌以組織壞死，水腫，產(chǎn)氣及全身中毒嚴(yán)重急性外傷感染包含很多-----重點(diǎn)產(chǎn)氣夾膜梭菌病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第35頁(yè)產(chǎn)氣夾膜梭菌生物學(xué)性狀形態(tài)和染色培養(yǎng)特征生化反應(yīng)致病性病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第36頁(yè)為革蘭氏陽(yáng)性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。單獨(dú)或成雙排列，有時(shí)也可成短鏈排列。芽胞呈卵圓形，芽胞寬度不比菌體大，位于中央或末次端。培養(yǎng)時(shí)芽胞少見，須在無糖培養(yǎng)基中才能生成芽胞。在膿汁、壞死組織或感染動(dòng)物臟器涂片上，可見有顯著莢膜，無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第37頁(yè)厭氧程度不如破傷風(fēng)梭菌要求高。在血液瓊脂平板上菌落較大、灰白色、不透明，邊緣呈鋸齒狀，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)是θ毒素作用，而外環(huán)不完全溶血是a毒素所致。不能消化已凝固蛋白質(zhì)和血清。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第38頁(yè)在皰肉培養(yǎng)基中肉渣不被消化，有時(shí)呈肉紅色。在牛乳培養(yǎng)基中能分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時(shí)生成大量氣體，將凝固酪蛋白沖成海棉狀碎塊。管內(nèi)氣體常將覆蓋在液體上凡士林層向上推擠，這種現(xiàn)象稱為“洶涌發(fā)酵”，是本菌特點(diǎn)之一。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第39頁(yè)病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第40頁(yè)能分解各種糖類，如葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不發(fā)酵甘露糖或水楊苷，能液化明膠，產(chǎn)生硫化氫，病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第41頁(yè)致病條件與破傷風(fēng)梭菌相同。產(chǎn)氣莢膜梭菌既能產(chǎn)生強(qiáng)烈外毒素，又有各種侵襲性酶，并有莢膜，組成其強(qiáng)大侵襲力，引發(fā)感染致病。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第42頁(yè)1．氣性壞疽2．食物中毒3．急性壞死性腸炎病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第43頁(yè)1．直接涂片鏡檢從傷口深部取材涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，并有莢膜，常伴有其它雜菌，白細(xì)胞甚少，形態(tài)不規(guī)則，這是氣性壞疽標(biāo)本涂片特點(diǎn)。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第44頁(yè)2．分離培養(yǎng)與判定取壞死組織制成懸液，接種于血球脂平板上或皰肉培養(yǎng)基中，厭氧培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況。取細(xì)菌培養(yǎng)物涂片鏡檢，并深入用生化反應(yīng)判定。病原性真菌檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)第45頁(yè)3．動(dòng)物試驗(yàn)取培養(yǎng)液0.5～1ml給小鼠或家兔靜脈內(nèi)注射，10分鐘后殺死動(dòng)物，置