樣品處理方法包括原因很多，操作復(fù)雜，方法靈活，直接影響各項(xiàng)分析指標(biāo)、成本和效率，普通占70%分析工作量。水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第10頁(yè)慣用提取溶劑有乙腈，甲醇，丙酮，這些溶劑與水，稀酸，稀堿混合溶劑如乙腈-甲醇，氯仿-甲醇，乙腈-水，或酸化，堿化等。乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙醚和叔丁基甲醚。叔丁基甲醚可代替鹵代溶劑。

1、提取溶劑選擇

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第11頁(yè)乙腈，甲醇，丙酮與樣品輕易結(jié)合，溶劑化作用和滲透能力強(qiáng)，粘度小，提取速度快，能使結(jié)合態(tài)藥品釋放，提取同時(shí)脫蛋白脫脂，PH值可調(diào)，待測(cè)物分布均勻。但提取雜質(zhì)較多，深入萃取乳化嚴(yán)重，效果相同，甲醇提取液雜質(zhì)最高?！叭f(wàn)能溶劑”DMSO沸點(diǎn)高極少用。在酯溶性殘留物中，采取非水溶性極性溶劑，乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙醚。加無(wú)水硫酸鈉，鹽析提升回收率。干樣（含水小10%）加水增強(qiáng)提取。

1、提取溶劑選擇

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第12頁(yè)均漿提取法；震蕩法；索氏提取法（考慮熱穩(wěn)定性，適合水分少如飼料樣品，水產(chǎn)品組織要和海砂或無(wú)水硫酸鈉一起研磨成干粉）；超聲波提取（SAE，空化作用，增加溶解，時(shí)間不能長(zhǎng)，發(fā)燒）；超臨界流體萃?。⊿FE），強(qiáng)化溶劑萃?。ˋSE）和微波輔助萃?。∕AE）2、提取方法

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第13頁(yè)超臨界流體密度與液體相同，不過(guò)溶質(zhì)在其中擴(kuò)散系數(shù)比液體中大得多。極性低碳?xì)浠衔?，醚，酯，環(huán)氧化合物，能夠在低壓力下提取（7-10MPa）進(jìn)行萃取，羥基，羧基難萃取，一個(gè)羧基和兩個(gè)羥基化合物和三個(gè)酚羥基苯環(huán)衍生物能夠被萃?。?0MPa以下，糖和氨基酸都不能被萃取；分級(jí)極性差異和揮發(fā)性差異。2、提取方法

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第14頁(yè)

超臨界流體萃取儀—流體源，加壓裝置，控溫裝置，萃取容器，節(jié)流裝置，搜集裝置。CO2作為流體操作溫度低，利于熱不穩(wěn)定化合物，組分中不含氧，預(yù)防氧化。2、提取方法

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第15頁(yè)液-液萃取LLELLE利用待測(cè)組分與樣品雜質(zhì)在互不相溶兩相中溶解性差異進(jìn)行凈化。設(shè)計(jì)基礎(chǔ)為：極性組分與非極性組分；極性物質(zhì)再分成酸性，中性，堿性物質(zhì)。正己烷（石油醚）-乙腈；正己烷-甲醇；正己烷-丙酮；異辛烷-80%丙酮；氯仿-水；乙酸乙酯-水。影響原因：溶劑，PH值（磺胺，喹諾酮，苯并米唑類(lèi)，苯乙胺類(lèi)等）3、凈化方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第16頁(yè)液-液萃取操作方法分液漏斗震蕩，漩渦萃取，逆流萃取，特殊容器萃取。從水相中提取藥品時(shí)溶劑中常帶如少許水分，可干擾固相萃取，延長(zhǎng)濃縮時(shí)間和增加雜質(zhì)，加無(wú)水硫酸鈉脫水。高極性藥品在凈化中發(fā)生吸附，硅烷化玻璃器皿（1%三甲基氯硅烷甲苯溶液淌一次，100℃下干燥30min）；加異丙醇或二乙胺也能降低吸附。3、凈化方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第17頁(yè)固相萃取（SPE）采取固相萃取小柱作為分離媒介，小柱中添加了不一樣填料固定相，以鍵合硅膠為基質(zhì)C18、NH2、COOH、PSA、SAX等，是硅膠表面活性大為降低，最大程度降低了極性化合物不可吸附和拖尾，使樣品回收率和重現(xiàn)性得到保障；以高分子聚合物為基質(zhì)如PEP、HXN、PAX、PCX等，含有高純度、高比表面特點(diǎn)；以吸附型填料為固定相如硅酸鎂、氧化鋁等，主要經(jīng)過(guò)表面極性吸附到達(dá)分離目標(biāo)。所以，固相萃取法適合用于各種極性化合物

3、凈化方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第18頁(yè)固相萃?。⊿PE）

3、凈化方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第19頁(yè)固相萃?。⊿PE）操作步驟：活化，上樣，洗滌，洗脫。其它方法固相微萃取：固液吸附平衡制備色譜法：制備HPLC分析激素殘留凝膠滲透色譜法：分子篩作用膜分離技術(shù)：硝酸纖維，醋酸纖維等半透膜基質(zhì)固相分散技術(shù)：樣品和填料百分比是1：4免疫親和色譜：連接有抗體惰性基質(zhì)做固定相，選擇性吸附。分子印跡技術(shù)：印跡聚合物，塑料抗體

3、凈化方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第20頁(yè)

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)：溶劑可回收氣流吹蒸：少許溶劑K-D濃縮器：濃縮，回流，洗滌，定容真空離心：熱敏性組分，粘稠液體再溶解使用流動(dòng)相初始百分比作溶劑4、濃縮富集及再溶解水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)樣品前處理技術(shù)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第21頁(yè)步驟1.確立質(zhì)譜條件2.建立LC方法3.內(nèi)標(biāo)選擇4.前處理方法選擇建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第22頁(yè)文件檢索：了解化合物性質(zhì)包含化合物結(jié)構(gòu)、化合物極性及化合物pKa值。首先了解化合物結(jié)構(gòu)，可大約推斷其碎片離子斷裂方式，選擇較為穩(wěn)定碎片離子作為定量子離子，也能夠依據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷選取哪種離子源更為適當(dāng)；依據(jù)化合物極性大小，能夠選擇一個(gè)或幾個(gè)恰當(dāng)溶劑作為溶媒，既能確保完全將樣品溶解，又能提升化合物質(zhì)譜響應(yīng)；化合物pKa值，有利于選擇流動(dòng)相添加劑及其pH值，從而提升質(zhì)譜響應(yīng)。

建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第23頁(yè)建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第24頁(yè)1.連接管路2.選擇Q1MS掃描模式和FullScan掃描類(lèi)型3.設(shè)置離子源參數(shù)4.將流動(dòng)相導(dǎo)入質(zhì)譜儀，觀察到待測(cè)化合物準(zhǔn)分子離子峰峰強(qiáng)度在106次方左右。1、確立質(zhì)譜條件（化合物優(yōu)化）建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第25頁(yè)5.選擇MSOnly優(yōu)化模式和SyringePumpInfusion入口類(lèi)型選項(xiàng)6.優(yōu)化TubeLensOffset、SprayVoltage、SheathGasPressure、AuxGasPressure取得待測(cè)化合物穩(wěn)定準(zhǔn)分子離子峰。7.選擇MS+MS/MS優(yōu)化模式設(shè)置ParentMass、ChargeState和NumProduct對(duì)子離子進(jìn)行優(yōu)化。8.MRM優(yōu)化模式優(yōu)化TubeLensOffset和CollisionPressure9.統(tǒng)計(jì)并保留子離子全掃描質(zhì)譜圖。保留TuneMethod文件。

1、確立質(zhì)譜條件（化合物優(yōu)化）建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第26頁(yè)1、確立質(zhì)譜條件（化合物優(yōu)化）建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第27頁(yè)1、確立質(zhì)譜條件（化合物優(yōu)化）建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第28頁(yè)2、確立LC條件在液相-紫外檢測(cè)中，使用添加劑種類(lèi)繁多，能夠是揮發(fā)性酸或者堿（如甲酸、乙酸和氨水等），也能夠是不易揮發(fā)緩沖鹽（如磷酸二氫鈉-磷酸緩沖液、磷酸二氫鉀-磷酸緩沖鹽）。不過(guò)在液質(zhì)分析中，基于質(zhì)譜檢測(cè)原理，我們只能使用可揮發(fā)酸堿或緩沖鹽，那么種類(lèi)就會(huì)受到極大限制。在日常分析中使用到添加劑主要有甲酸、乙酸、三氟乙酸、氨水和甲酸銨、乙酸銨等緩沖鹽。三乙胺在紫外檢測(cè)中，常作為掃尾劑，不過(guò)在液質(zhì)檢測(cè)中是絕對(duì)禁止。因?yàn)槿野愤M(jìn)入質(zhì)譜后不易去除，殘留及其嚴(yán)重，能夠抑制離子響應(yīng)。在液相色譜紫外檢測(cè)中，要求化合物之間R≥1.5，進(jìn)行定量，那R最好≥2.0，要求準(zhǔn)確配制流動(dòng)相，準(zhǔn)確調(diào)好流動(dòng)相pH及添加劑濃度。但在液質(zhì)分析中，我們經(jīng)常使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM/SRM）對(duì)化合物進(jìn)行定量，因?yàn)镸RM要求選擇兩次離子，所以它含有很高專(zhuān)屬性，基于這點(diǎn)我們對(duì)多個(gè)化合物同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，不需要彼此間到達(dá)完全分離就能夠?qū)λ麄冞M(jìn)行定量分析。建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第29頁(yè)2、確立LC條件因?yàn)樯飿悠分泻写罅炕|(zhì)，這些基質(zhì)存在會(huì)嚴(yán)重干擾和影響化合物測(cè)定，因而我們需要利用色譜將化合物與基質(zhì)分開(kāi)，從而降低基質(zhì)效應(yīng)影響，即降低離子抑制。待測(cè)化合物要在色譜柱上有保留，而且適當(dāng)延長(zhǎng)保留時(shí)間。三聚氰胺最好用離子柱。建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第30頁(yè)3、內(nèi)標(biāo)選擇內(nèi)標(biāo)工作方式：在每個(gè)樣品、標(biāo)準(zhǔn)和空白中加入測(cè)定到每個(gè)樣品中內(nèi)標(biāo)響應(yīng)依據(jù)實(shí)際測(cè)定內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值與預(yù)期內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值比值來(lái)校正其它化合物信號(hào)用分析信號(hào)和內(nèi)標(biāo)比作標(biāo)準(zhǔn)曲線或乘校正因子或除內(nèi)標(biāo)回收率計(jì)算未知樣品分析信號(hào)和內(nèi)標(biāo)比值并從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出信號(hào)建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第31頁(yè)3、內(nèi)標(biāo)選擇1.樣品中不存在或者能夠忽略2.沒(méi)有受到質(zhì)譜干擾3.沒(méi)有對(duì)分析對(duì)象產(chǎn)生質(zhì)譜干擾4.不輕易受到環(huán)境污染5.和分析對(duì)象質(zhì)量數(shù)接近（氘代物）6.離解方式和分析對(duì)象靠近建立液質(zhì)定量分析方法水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第32頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)為何要采取LC-MS考評(píng)化合物含量越來(lái)越低基體越來(lái)越復(fù)雜藥殘能力驗(yàn)證提議第一方法比如：干魚(yú)粉中恩諾沙星和環(huán)丙沙星魚(yú)肉中氟苯尼考水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第33頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)

考評(píng)中質(zhì)量控制方法控制樣品空白平行雙樣測(cè)定或三樣加標(biāo)回收標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)同時(shí)分析重復(fù)測(cè)定和儀器比對(duì)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第34頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)加標(biāo)回收：可分為前處理加標(biāo)回收和上機(jī)加標(biāo)（單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)加入）水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第35頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)加標(biāo)回收：可分為前處理加標(biāo)回收和上機(jī)加標(biāo)（單點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)加入）加標(biāo)回收靠近100％不能代表考評(píng)結(jié)果完全準(zhǔn)確無(wú)誤。不能檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身所帶來(lái)誤差；不能檢驗(yàn)加和性干擾，如污染和質(zhì)譜干擾；水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第36頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)同時(shí)分析：選擇基體和濃度相同標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行分析作用：標(biāo)準(zhǔn)是否合格樣品前處理是否適當(dāng)測(cè)定中是否存在干擾當(dāng)前藥殘標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)極難購(gòu)置，對(duì)于固體國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，即使不能購(gòu)得，也要盡可能搜集到證書(shū)。水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第37頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)其它質(zhì)控方法不一樣儀器比對(duì)試驗(yàn)不一樣儀器在一定程度可考查基體和質(zhì)譜干擾情況重復(fù)分析和人員比對(duì)試驗(yàn)盡可能消除過(guò)失誤差和隨機(jī)誤差以上質(zhì)量控制方法在考評(píng)中應(yīng)盡可能多采取水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第38頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)考評(píng)前準(zhǔn)備確認(rèn)色譜柱柱效各流動(dòng)相充分清洗錐口重新調(diào)諧校正儀器總之就是使儀器處于良好狀態(tài)水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第39頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)預(yù)試驗(yàn)稀釋到一定(或要求)倍數(shù)后測(cè)定稀釋成各種稀釋倍數(shù)有利于多項(xiàng)目標(biāo)測(cè)定使?jié)舛仍跇?biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)有利于發(fā)覺(jué)干擾有利于預(yù)防污染水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第40頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)定容要考慮溶劑匹配。測(cè)定每個(gè)樣品測(cè)定23次，同時(shí)分析標(biāo)準(zhǔn)參加物質(zhì)并分析加標(biāo)樣品。數(shù)據(jù)處理查看校準(zhǔn)曲線是否符合要求確定是不一樣質(zhì)量數(shù)測(cè)定結(jié)果是否相同盡可能不一樣超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，如超出應(yīng)稀釋后測(cè)定。水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第41頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)成因待測(cè)組分與基質(zhì)中內(nèi)源性物質(zhì)共洗脫而引發(fā)色譜柱超載所致，這些成份常因在色譜分析中與目標(biāo)化合物分離不完全或未被檢測(cè)到而進(jìn)入質(zhì)譜后產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。待測(cè)組分與生物樣品中基質(zhì)成份在霧滴表面離子化過(guò)程中競(jìng)爭(zhēng)。因?yàn)榛|(zhì)中一些干擾組分存在會(huì)使待測(cè)組分離子生成速度同標(biāo)準(zhǔn)樣品相比有顯著不一樣，使得信號(hào)響應(yīng)值產(chǎn)生較大變異。離子有效淌度受到周?chē)x子影響，由其周?chē)x子所形成包圍圈，稱(chēng)為離子基體。假如樣品組分從進(jìn)樣點(diǎn)到探測(cè)點(diǎn)遷移過(guò)程中，在某一時(shí)間間隔遇上一個(gè)不一樣組成基體區(qū)帶，這個(gè)離子基體區(qū)帶就將對(duì)樣品組分產(chǎn)生影響，使它們淌度發(fā)生瞬時(shí)改變，從而選擇性地影響溶質(zhì)遷移和分離，這就是瞬時(shí)離子基體效應(yīng)。分為離子抑制和離子增強(qiáng)

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第42頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)：1.用流動(dòng)相配制高中低三個(gè)濃度待測(cè)物，并加入內(nèi)標(biāo)，測(cè)得響應(yīng)值。2.空白基質(zhì)提取后加入相同濃度待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)，測(cè)響應(yīng)值。

基質(zhì)效應(yīng)=空白基質(zhì)響應(yīng)值/流動(dòng)相響應(yīng)值×100％

這么不一樣濃度待測(cè)物基質(zhì)效應(yīng)和內(nèi)標(biāo)基質(zhì)效應(yīng)均可得到。

水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概述第43頁(yè)能力驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)基質(zhì)效應(yīng)消除方法1.選擇適當(dāng)樣品制備方法，對(duì)于不一樣樣品制備方法，不能簡(jiǎn)單地說(shuō)某種方法優(yōu)于另一個(gè)方法，每種組分對(duì)基質(zhì)效應(yīng)