備案號：45748-2015案卷號件號本標準起草單位：廣東省微生物研究所(廣東省微生物分析檢測中心)。飼料中乳酸菌活菌的檢驗方法本標準規(guī)定了含乳酸菌飼料中乳酸菌(腸球菌、乳桿菌、片球菌)活菌的微生物學檢驗方法。本標準適用于含乳酸菌飼料中乳酸菌((腸球菌、乳桿菌、片球菌)活菌的檢驗。下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本3.6無菌培養(yǎng)皿：直徑為90mm。3.9無菌吸管：1m(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。4.1實驗室用水應符合GB/T6682中三4.3MRS培養(yǎng)基：見附錄A.1。4.4腸球菌瓊脂(膽汁七葉苷疊氮鈉瓊脂)培養(yǎng)基：見附錄A.2145.3采樣工具，如鏟子、匙、采樣器、試管、廣口瓶、剪子等，應是無菌的。5.4樣品包裝為袋、瓶或罐裝者，取完整未開封的。樣品是固體，應邊取邊混合；樣品是流體，通過振搖即可混勻。6檢驗程序圖1飼料中乳酸菌活菌的檢驗方法流程圖2質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min,制成1:10樣品勻液；或置于225mL0.85%7.4用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于裝有9mL0.85%無菌次，即換用1次1mL滅菌吸管或吸頭。7.6乳酸菌計數(shù)7.6.4片球菌數(shù)7.7菌落計數(shù)367.8結果的表述7.8.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式(1)計算： ZC——平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和；n?——第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù)；n?——第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù)；d——稀釋因子(第一稀釋度)。7.8.3若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.8.4若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。7.9.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。根據(jù)菌落計數(shù)結果出具報告，報告單位以CFU/g(mL)表示。9乳酸菌的鑒定(可選做)挑取3個或以上單個菌落，腸球菌、乳桿菌、片球菌接種于MRS瓊脂平板，置36℃±1℃厭氧培養(yǎng)48h±2h。9.2鑒定乳桿菌屬菌體形態(tài)多樣，呈長桿狀、彎曲桿狀或短桿狀，4葡糖酸鹽甘露醇松三糖蜜一糖棉籽糖核糖山梨醇蔗糖甘露糖水楊苷海藻糖干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)+++一一++++++嗜酸乳桿菌(L.acidlophilus)一一一dd一一一十十d植物乳桿菌(L.plantarum)d土+++++++德氏乳桿菌乳亞種一一十+++菌種甘露醇松三糖蜜工糖-D棉籽糖-D山梨醇丙酮酸屎腸球菌(Enterocov++一+v一一++++一一++注：+,通常陽性；-,通常陰性，V,不同或可變。菌種糖山梨阿位糖糖Pediococcusacidialactioddd一一一++++8附錄Agggg吐溫80ggggggA.1.2制法將上述成分加入到1000mL蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至6.2,分裝后121℃高壓滅菌15min~A.2EA腸球菌瓊脂(膽汁七葉苷疊氨鈉瓊脂)培養(yǎng)基ggg將上述成分加