血糖定量的學(xué)習(xí)課件第1頁(yè)/共10頁(yè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握Folin-Wu法測(cè)定血糖含量的原理和方法二、實(shí)驗(yàn)原理

無蛋白血濾液中的葡萄糖與堿性硫酸銅溶液共熱，Cu2+即被血濾液中的葡萄糖還原成Cu+(Cu2O)，Cu2O又使鉬酸試劑還原成低價(jià)的蘭色鉬化合物。血濾液的糖含量和產(chǎn)生的Cu2O量成正比，Cu2O的量與形成鉬化合物的量成正比，可用比色法測(cè)定。第2頁(yè)/共10頁(yè)三、材料、儀器與試劑

1.材料：動(dòng)物血液。全血為雞血。1只雞，稱1g草酸鈉，邊滴邊拌勻。2.儀器：分光光度計(jì)、血糖管、奧氏吸管、水浴鍋、表面皿、三角瓶、漏斗等。3.試劑：（1）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：①1%葡萄糖母液：稱取1.000g純葡萄糖，溶于蒸餾水，稀釋至100ml；②葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：取1.0ml母液置于100ml容量瓶，加蒸餾水至刻度（2）堿性硫酸銅溶液A液：無水碳酸鈉35g，酒石酸鈉13g，碳酸氫鈉11g溶于蒸餾水后，稀釋至約700ml，待溶液清晰后再稀釋至1000ml。B液：晶體硫酸銅5g，溶于蒸餾水并稀釋至100ml，加濃硫酸數(shù)滴作保護(hù)劑。臨用時(shí)，取A液25ml，B液5ml，混合后，再加A液至50ml，搖勻。并冰箱內(nèi)可保存。第3頁(yè)/共10頁(yè)（3）酸性鉬酸鹽溶液：稱取鉬酸鈉600g，加少量蒸餾水溶解后倒入2000ml容量瓶，定容，搖勻，倒入一較大的試劑瓶中，加溴水0.5ml，搖勻，靜置數(shù)小時(shí)。取上清液500ml到1000ml容量瓶，徐徐加入225ml85%磷酸，邊加邊搖勻。再加25%硫酸150ml，放在暗處至次日，用空氣將剩余的溴趕去，然后加99%醋酸75ml，加蒸餾水稀釋至1000ml，貯存于棕色瓶中。（4）10%鎢酸鈉溶液：鎢酸鈉10g溶于蒸餾水并稀釋至100ml。（5）0.33mol/L硫酸溶液：

于53ml蒸餾水中加入1ml濃硫酸。（6）抗凝劑：（草酸鈉或草酸鉀）

第4頁(yè)/共10頁(yè)四、實(shí)驗(yàn)操作流程Ⅰ.無蛋白血濾液的制備：注：用奧氏吸管吸全血較困難，可用普通的1ml移液管代替。全血（已加抗凝劑）1ml50ml三角瓶

H2O7ml血液變?yōu)榧t色透明

10%鎢酸鈉1ml0.33mol/LH2SO41ml---->充分沉淀---->過濾---->濾（隨加隨搖，加完后充分搖勻）（鮮紅→暗棕紅色）液（清的無色濾液，不含蛋白質(zhì)）搖勻搖勻第5頁(yè)/共10頁(yè)Ⅱ.血糖測(cè)定取3支血糖管編號(hào)，然后在血糖管中按下表操作。血糖管號(hào)試劑1號(hào)（空白）2號(hào)（標(biāo)準(zhǔn)液）3號(hào)（樣品）無蛋白濾液（ml）001.0蒸餾水（ml）2.01.01.0葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）01.00堿性酮試劑（ml）2.02.02.0三支血糖管分別混勻，沸浴8min，自來水冷卻3min（勿搖），接著往下加試劑。磷鉬酸試劑（ml）3.03.03.0加磷鉬酸試劑后，混勻，靜置2min（使CO2自然逸出），然后各管用蒸餾水稀釋至刻度，即25ml，混勻后于430nm處比色。第6頁(yè)/共10頁(yè)Ⅲ.用分光光度計(jì)測(cè)定選好波長(zhǎng)空白管調(diào)100%T，0%T

標(biāo)尺置于吸光度處樣品入光路讀數(shù)記錄測(cè)得的樣品的光密度值OD1

；標(biāo)準(zhǔn)液的光密度值OD2

第7頁(yè)/共10頁(yè)五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析計(jì)算血糖含量：

100ml全血含血糖毫克數(shù)=C標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖（0.1）×OD待測(cè)/OD標(biāo)準(zhǔn)×100/0.10.1——1ml血濾液相當(dāng)于0.1ml全血作業(yè)：簡(jiǎn)要介紹本實(shí)驗(yàn)以外的兩種糖測(cè)定方法。第8頁(yè)/共10頁(yè)六、注意事項(xiàng)

1.取血液時(shí)量要準(zhǔn)確。由移液管放出血液的速度要慢，以盡量減少黏附在管壁上的血液，一般放出1ml血液所用的時(shí)間應(yīng)不少于1min。

2.如果血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入10%硫酸1-2滴，等變?yōu)榘底丶t色后再濾。(