第七章分生組織培養(yǎng)與脫毒1植物病毒的危害及主要類型2植物病毒的傳播及在植物體中的分布3植物病毒的防治方法及原理4分生組織培養(yǎng)脫毒的一般方法5無病毒植株的鑒定6影響分生組織培養(yǎng)脫毒的因子7無病毒植物的利用1目前一頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.1植物病毒的危害和種類:受病毒危害嚴(yán)重的作物有：大田作物：馬鈴薯、甘薯和煙草蔬菜：白菜、大蒜、蔥、番茄和蘿卜果樹：柑橘、蘋果、草莓和香蕉花卉：香石竹、各種菊花、天竺葵和紫羅蘭植物病毒已超過600種；感染草莓的病毒有62種，柑橘有15種，馬鈴薯有26種植物病毒有RNA、DNA病毒2目前二頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)草莓病毒病環(huán)斑型變色型壞死型畸形生長型一般減產(chǎn)30%左右3目前三頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.2植物病毒的傳播及分布:介體傳播1.昆蟲介體：400多種（如蚜蟲200多種、葉蟬130多種、飛虱等），以蚜蟲為主；2.動物介體（如螨、線蟲）；3.真菌和菟絲子。飛虱傳播病毒

蚜蟲傳播病毒

螨蟲傳播病毒

7.2.1傳播4目前四頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)嫁接傳播非介體傳播

是指植物病毒從感病寄主體內(nèi)由于傷殘或分泌而達(dá)到體外，與另一寄主體通過機(jī)械摩擦所造成的微傷接觸而傳染；無性繁殖5目前五頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)植物病毒的分布

7.2.2.1侵入活體寄生，不能從氣孔侵入。微小傷口——胞間連絲——原生質(zhì)，產(chǎn)生侵染（1）通過寄主柔膜組織昆蟲傳播的病毒，可通過3種類型的組織侵入：（2）通過寄主韌皮組織

（3）通過木質(zhì)部6目前六頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.2.2.2增殖與運(yùn)轉(zhuǎn)病毒粒子（核酸）細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，到達(dá)細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)病毒蛋白質(zhì)形成，最后組裝在一起。病毒復(fù)制到一定量，形成侵染點(diǎn)，通過胞間連絲（移動較慢）與韌皮部（速度極快），擴(kuò)散到其他部分。7目前七頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.2.2.3分布頂端分生組織一般是無毒的，或者是只攜有濃度很低的病毒。病毒數(shù)量隨著與莖尖距離的加大而增加，在較老的組織中病毒濃度很高。8目前八頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)孔雀綠、硫尿嘧啶等病毒抑制劑、核酸合成抑制劑。生產(chǎn)上很難應(yīng)用。1.高溫處理

①溫湯浸漬處理法②熱風(fēng)處理法2.低溫處理1.種子繁殖2.分生組織培養(yǎng)中脫毒3.愈傷組織誘導(dǎo)4.微型嫁接脫毒5.珠心胚培養(yǎng)物理學(xué)方法化學(xué)方法生物學(xué)方法7.3植物病毒的防治方法及原理：9目前九頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)高溫空氣熱處理脫毒示意圖切取嫩梢1.5~2.0cm帶病毒植株熱處理38℃嫩梢嫁接10目前十頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)熱處理與莖尖分生組織培養(yǎng)結(jié)合脫毒

35℃熱處理7~28d感染X、Y病毒暗處發(fā)芽

莖尖剝離莖尖分生

組織培養(yǎng)柑橘微芽嫁接脫毒11目前十一頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)重點(diǎn)介紹：7.4莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒12四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院馬鈴薯研究開發(fā)中心目前十二頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)莖尖培養(yǎng)：概念：是指從十到幾十微米的莖尖分生組織至幾十毫米莖尖或更大芽的離體培養(yǎng)。根據(jù)外植體大小可劃分：莖尖分生組織培養(yǎng)（≦0.1mm）普通莖尖培養(yǎng)（較大的莖尖如幾毫米乃至幾十毫米）13目前十三頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)無菌苗莖尖培養(yǎng)途徑易難14目前十四頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)來源:丁春邦課件15四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院馬鈴薯研究開發(fā)中心目前十五頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)無菌苗無毒苗區(qū)別?16目前十六頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒原理:White發(fā)現(xiàn)TMV在煙草根尖分布不均，1934年。Limasset等發(fā)現(xiàn)莖尖也不帶病毒。1949年，Morel等首先利用莖尖分生組織培養(yǎng)獲得了大麗花和馬鈴薯無病毒苗，同時(shí)建立了莖尖脫毒的組織培養(yǎng)技術(shù)體系。1952年，Mathews（1970）等認(rèn)為分生組織能避免病毒侵染的可能機(jī)理是：17目前十七頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)（1）在植物體內(nèi)，病毒通過維管系統(tǒng)移動，而分生組織不存在維管系統(tǒng)。此外，病毒通過胞間連絲在細(xì)胞間移動，但其速度很慢，難以侵入活躍生長的莖尖；（2）在旺盛生長的分生細(xì)胞中，代謝活性很高，使病毒無法進(jìn)行復(fù)制；（3）倘若在植物體內(nèi)確實(shí)存在著“病毒鈍化系統(tǒng)”的話，它在分生組織中應(yīng)比在任何其他區(qū)域都有更高的活性，因而分生組織不受侵染；（4）在莖尖中存在高水平的內(nèi)源激素，可以抑制病毒的增殖。18目前十八頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)

帶病毒植株材料處理莖尖剝離

(0.2mm)

莖尖培養(yǎng)

分化芽分化根

病毒檢測

脫毒植株7.4.2莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒過程19目前十九頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)病毒的種類離體莖尖的大小化學(xué)物質(zhì)熱處理病毒間的干擾7.4.3影響分生組織培養(yǎng)脫毒的因子：20目前二十頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)一些植物莖尖培養(yǎng)脫除病毒時(shí)適宜莖尖大?。ㄖ熘燎澹?002）植物種類病毒種類莖尖大小/mm植物種類病毒種類莖尖大小/mm甘薯馬鈴薯大麗花斑葉花葉病毒縮葉花葉病毒羽狀花葉病毒Y病毒X病毒卷葉病毒G病毒S病毒花葉病毒1.0～2.01.0～2.00.3～1.01.0～3.00.2～0.51.0～3.00.2～0.30.30.6～1.0康乃馨百合鳶尾大蒜矮牽牛菊花草莓甘蔗春山芋花葉病毒各種花葉病毒花葉病毒花葉病毒煙草花葉病毒花葉病毒各種病毒花葉病毒蕪菁花葉病毒0.2～0.80.1～0.20.2～0.50.3～1.00.1～0.30.2～1.00.2～1.00.7～0.80.521目前二十一頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.5無病毒植株的鑒定7.5.1指示植物法病毒指示植物鑒定法就是利用病毒在其它植物上產(chǎn)生的枯斑和某些病理癥狀，作為鑒別病毒及病毒種類的標(biāo)準(zhǔn)，有時(shí)該法也稱枯斑測定法。病毒癥狀特征指示植物表7-5植物一些病毒病害癥狀和指示植物馬鈴薯X病毒（PVX)輕重不同的花葉和環(huán)斑，因株系而異千日紅，地霉松，指尖椒22目前二十二頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.5.2抗血清鑒定法凡能刺激動物機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原。抗體則是由抗原刺激動物機(jī)體的免疫活性細(xì)胞而生成的，它存在于血清或體液中，為一種具有免疫特性的球蛋白，能與該抗原發(fā)生?；悦庖叻磻?yīng)。常用的有試管沉淀試驗(yàn)、凝膠擴(kuò)散反應(yīng)、免疫電泳技術(shù)、炭凝集試驗(yàn)、熒光抗體技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫電子顯微鏡法等。23目前二十三頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)7.5.3酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫吸附法是目前最新的血清學(xué)方法之一。酶聯(lián)免疫吸附法是把抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的高效催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)，其基本原理是以酶標(biāo)記的抗體來指示抗原抗體的結(jié)合。該酶可催化無色的底物，發(fā)生水解，生成可溶性的或不可溶性的有色產(chǎn)物。24目前二十四頁\總數(shù)二十六頁\編于十四點(diǎn)病毒檢測技術(shù)使用各種各樣的ELISA試劑盒快速試劑盒生物芯片國際馬鈴薯中心在中國生產(chǎn)的試劑盒25四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)