腫瘤疫苗和DC簡史腫瘤細(xì)胞免疫逃避機(jī)制和DC抗腫瘤機(jī)制以DC為基礎(chǔ)腫瘤疫苗策略DC腫瘤疫苗主要影響原因以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第1頁樹突狀細(xì)胞dendriticcell;DC1973

美國學(xué)者Steinman

小鼠脾細(xì)胞因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名當(dāng)前所知功效最強(qiáng)抗原提呈細(xì)胞以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第2頁CD34骨髓干細(xì)胞以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第3頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第4頁腫瘤疫苗dendriticcellvaccineDCvaccine1、增強(qiáng)腫瘤免疫原性2、增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答3、打破腫瘤免疫耐受關(guān)鍵問題誘導(dǎo)主動性免疫刺激宿主產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答安全、無不良反應(yīng)能為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)提供保護(hù)性長久免疫記憶功效理想腫瘤疫苗以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第5頁腫瘤疫苗研究進(jìn)展疫苗出現(xiàn)1796EdwardJenner

接種疫苗——天花腫瘤疫苗嘗試性研究提升腫瘤本身免疫原性方法增加機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)1、WiUiamColey丹毒患者活鏈球菌→注射腫瘤患者腫瘤結(jié)節(jié)內(nèi)→激發(fā)起腫瘤患者機(jī)體對腫瘤免疫應(yīng)答2、牛痘病毒感染腫瘤細(xì)胞→腫瘤溶解物→注射人體3、混合卡介苗或短小棒狀桿菌+經(jīng)過照射滅活腫瘤細(xì)胞→共孵育→注射人體沒有取得顯著必定治療效果以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第6頁理論基礎(chǔ)奠定1971BurnetThomas

免疫監(jiān)視學(xué)說免疫系統(tǒng)細(xì)胞免疫機(jī)制識別去除腫瘤細(xì)胞

臨床和試驗(yàn)證據(jù)1、免疫缺點(diǎn)（尤其是細(xì)胞免疫缺點(diǎn)）→腫瘤發(fā)生率↑2、幼兒期（免疫功效未發(fā)育成熟）和老年期（免疫功效衰退）→腫瘤發(fā)生率比其它年紀(jì)↑3、經(jīng)抗淋巴細(xì)胞血清處理或胸腺摘除小鼠腫瘤發(fā)生率高以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第7頁腫瘤疫苗研究飛躍20世紀(jì)末

90年代初以基因修飾腫瘤細(xì)胞為基礎(chǔ)疫苗發(fā)展腫瘤疫苗真正成為能夠應(yīng)用于臨床腫瘤治療方法1997年美國Jefferson大學(xué)約60％黑色素細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移患者注射腫瘤疫苗后存活5年以上1998年波士頓研究人員制成一個(gè)經(jīng)生物工程改造腫瘤疫苗，它包含一個(gè)能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，使Ｔ細(xì)胞保持較長時(shí)間攻擊力。

以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第8頁（一）全腫瘤細(xì)胞疫苗

1、經(jīng)物理、化學(xué)等方法處理疫苗

2、轉(zhuǎn)基因疫苗

3、感染病毒類疫苗

4、細(xì)胞融合疫苗（二）腫瘤抗原及抗原類分子疫苗

該類疫苗研究最為廣泛,該類疫苗特異性高,但免疫原性低

1、抗原疫苗

2、多肽類疫苗

3、抗獨(dú)特型抗體疫苗

4、熱休克蛋白—肽類復(fù)合物疫苗（三）核酸疫苗（四）重組病毒、病菌疫苗（五）樹突狀細(xì)胞疫苗以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第9頁腫瘤疫苗新熱點(diǎn)近10年來以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)腫瘤抗原特異性疫苗1991年Steinman首次發(fā)覺DC這一強(qiáng)大抗原遞呈功效以來，DC就被用于腫瘤免疫治療研究以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第10頁轉(zhuǎn)基因疫苗表示共刺激分子、細(xì)胞因子,經(jīng)過激活ＤＣ細(xì)胞使更多抗原被攝取呈遞臨床試驗(yàn)效果不如動物試驗(yàn)；瘤細(xì)胞獲取復(fù)雜；滅活要求高；基因?qū)氚踩珕栴}直接攜帶腫瘤抗原DC細(xì)胞作用則更為直接能夠活化靜息Ｔ細(xì)胞，激發(fā)更強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)DC疫苗VS易獲取，操作簡便，效果和轉(zhuǎn)基因疫苗相當(dāng)甚至更加好以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第11頁美國密執(zhí)安大學(xué)、瑞士蘇黎世大學(xué)等應(yīng)用樹突狀細(xì)胞分別攜帶乳腺癌、黑色素瘤抗原制備疫苗Dukes大學(xué)則應(yīng)用腫瘤細(xì)胞ＲＮＡ轉(zhuǎn)導(dǎo)ＤＣ細(xì)胞均已進(jìn)入Ⅰ期或Ⅱ期臨床試驗(yàn)。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第12頁年中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院研發(fā)出一個(gè)除了干細(xì)胞移植、化療等常規(guī)治療方法外白血病治療方法——白血病DC疫苗已在14位患者身上取得顯著療效，國內(nèi)尚屬首創(chuàng)。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第13頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第14頁1）腫瘤免疫原性較弱,并含有抗原調(diào)變能力以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第15頁2）MHC-I類分子表示下降或消失。B7，ICAM-1等共刺激分子在癌細(xì)胞上表示異常；以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第16頁腫瘤細(xì)胞高水平表示包含唾液酸在內(nèi)粘多糖或其它凝聚系統(tǒng)；血清中封閉因子（封閉抗體）封閉腫瘤表面抗原表位。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第17頁漏逸少許腫瘤細(xì)胞不能引發(fā)足夠免疫應(yīng)答，反而能夠刺激腫瘤不停生長，產(chǎn)生免疫刺激。存在于一些腫瘤組織內(nèi)淋巴細(xì)胞能夠?yàn)槟[瘤細(xì)胞提供一些腫瘤營養(yǎng)因子并刺激腫瘤細(xì)胞生長。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第18頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第19頁Sakaguchi’等在1995年發(fā)覺鼠源性CD4CD25雙陽性T細(xì)胞亞群，能經(jīng)過細(xì)胞與細(xì)胞間接觸以及分泌細(xì)胞因子顯著抑制各種免疫細(xì)胞功效。局部微環(huán)境腫瘤抗原可顯著誘導(dǎo)特異Treg細(xì)胞生成，稱為腫瘤特異Treg細(xì)胞。很多資料顯示Treg細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境及患者外周血中富集存在。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第20頁腫瘤免疫抑制因子能夠使腫瘤細(xì)胞躲避局部免疫效應(yīng)細(xì)胞攻擊，還能進(jìn)入外周血循環(huán)，抑制宿主全身抗腫瘤免疫功效。Lyon小組應(yīng)用“微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)(CytometricBeadArray，CBA)”對35例確診乳癌患者及24例疑似患者樣本進(jìn)行了檢測對比，得出在所測IL-1B、IL-2、IL4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12(p70)、IL-13、IL-17、G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、MCP-1、MIP-1B和TNF-α細(xì)胞因子中，除了GM—CSF，INF-γ外，其它因子都有顯著增高。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第21頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第22頁Ishigami等研究顯示,胃癌組織中DC數(shù)量與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和周圍浸潤呈負(fù)相關(guān)。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第23頁1)未成熟DC與腫瘤細(xì)胞直接接觸影響了DC成熟;2)腫瘤細(xì)胞釋放可溶性免疫抑制因子影響著全身DC成熟和功效,包含VEGF、TNF-α、TGF-β、M-CSF、GM-CSF、IL-6和IL-10等。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第24頁腫瘤局部DC浸潤數(shù)量可作為判斷腫瘤預(yù)后獨(dú)立指標(biāo)。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第25頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第26頁以DC為基礎(chǔ)腫瘤疫苗策略以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第27頁以DC為基礎(chǔ)腫瘤疫苗策略以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第28頁以DC為基礎(chǔ)腫瘤疫苗策略腫瘤細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC1蛋白質(zhì)沖擊DC2腫瘤抗原肽沖擊DC3腫瘤抗原DNA/RNA沖擊DC4腫瘤抗原在體內(nèi)沖擊DC5以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第29頁1.腫瘤細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第30頁1.腫瘤細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第31頁1.腫瘤細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DCYasuda以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第32頁1.腫瘤細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第33頁2.蛋白質(zhì)沖擊DC對于抗原表位尚不了解腫瘤，能夠可溶性蛋白作為抗原裝載DC在腫瘤動物模型和腫瘤患者中，以腫瘤抗原蛋白轉(zhuǎn)染DC在體外和體內(nèi)均可誘導(dǎo)出針對腫瘤抗原特異性CTL反應(yīng)優(yōu)點(diǎn)：可使那些因MHC限制而排除在肽疫苗治療之外患者受益。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第34頁3.腫瘤抗原肽沖擊DC

以腫瘤特異性抗原或腫瘤相關(guān)抗原肽裝載DC腫瘤疫苗以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第35頁4.腫瘤抗原DNA/RNA沖擊DC

載體以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第36頁4.腫瘤抗原DNA/RNA沖擊DC

DNA/RNA疫苗可在體外合成而大量取得，并可包含多個(gè)抗原表位，還可經(jīng)修飾使其功效加強(qiáng)。RNA疫苗只在宿主細(xì)胞胞質(zhì)中表示，DNA疫苗需進(jìn)入細(xì)胞核后轉(zhuǎn)錄——癌變潛在危險(xiǎn)DNA疫苗穩(wěn)定性好，功效長久以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第37頁5.腫瘤抗原在體內(nèi)沖擊DC腫瘤抗原GM-CSF,IL-4脂質(zhì)體以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第38頁DC裝載抗原策略免疫佐劑使用DC體外擴(kuò)增免疫路徑臨床病人選擇DC腫瘤疫苗主要影響原因以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第39頁DC起源DC分離純化DC培養(yǎng)基DC培養(yǎng)使用細(xì)胞因子DC細(xì)胞判定DC培養(yǎng)技術(shù)以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第40頁以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第41頁DC起源——骨髓取材有限，HSC含量極少,大約為1/105

單個(gè)核細(xì)胞。BM為侵入性操作,患者不輕易接收。

其增殖及多向分化能力隨供者年紀(jì)增加體質(zhì)衰弱而減弱。在體外培養(yǎng)過程中有自發(fā)分化和衰老現(xiàn)象,且BM有病毒污染可能以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第42頁DC起源——外周血標(biāo)本起源充分,取材方便,因子組合簡單,培養(yǎng)步驟簡單、經(jīng)濟(jì)。HSC含量極少,最終收獲DC數(shù)量少,活力和純度均不高。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第43頁其端粒及端粒酶活性均長于和高于BM及PBHSC/HPC,而且低表示或不表示細(xì)胞凋亡配基CD95/Fas,故體外生存期更長DC起源——臍帶血較豐富原始且能重建長久造血HSC/HPC,自我增殖及多向分化能力較強(qiáng)對刺激因子反應(yīng)和增殖能力、體外集落形成能力、刺激后進(jìn)入細(xì)胞周期速度以及自泌生長因子能力均強(qiáng)于BM及PBHSC/HPC,以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第44頁臍帶血優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)產(chǎn)量大、純度高等母嬰無不良影響,不包括社會、倫理及法律等方面爭論,受胎盤屏障保護(hù),被污染概率低CB量較少,通常只有50～150ml;CBHSC對理化改變較敏感,洗滌、分離或利用傳統(tǒng)方法去除紅細(xì)胞方法均會造成HSC嚴(yán)重丟失以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第45頁分離純化操作簡單,

細(xì)胞成份復(fù)雜,

屢次傳代后不能純化,

增殖活力相對較低連續(xù)貼壁法操作簡單,

成本低廉,

純化率較低密度梯度離心法細(xì)胞純度高(≥90%),

但操作復(fù)雜,價(jià)格昂貴,

單克隆抗體選擇不妥,輕易丟失目標(biāo)細(xì)胞免疫磁珠分選法聯(lián)合以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第46頁DC培養(yǎng)基10%胎牛血清——引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)自體單核細(xì)胞條件培養(yǎng)基以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第47頁細(xì)胞因子維持DC分化、發(fā)育、存活、功效最基本CK,主要使HSC向DC、單核及巨噬細(xì)胞分化,并以生成單核細(xì)胞為主GM-CSF以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第48頁IL-4IL-4經(jīng)過抑制單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞方向分化而誘導(dǎo)其向DC方向分化IL-4能夠增加并穩(wěn)固GM-CSF誘導(dǎo)CD1a表示IL-4與極低濃度GM-CSF協(xié)同刺激iDC后,促進(jìn)DC成熟,上調(diào)MHCⅡ和共刺激分子表示;

IL-4還能促進(jìn)IL-12分泌,以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第49頁TNF-αGM-CSF體外誘導(dǎo)DC體系中是必需,早期誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞增殖;后期阻止細(xì)胞向粒系分化,上調(diào)GM-CSF受體表示,并促進(jìn)DC成熟可抑制DC發(fā)生自發(fā)性凋亡以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第50頁DC判定形態(tài)學(xué)判定表面特異性標(biāo)識物判定（CD1a、CD83）功效學(xué)判定：混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)促T細(xì)胞增殖作用DC分泌IL-12檢測以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略專家講座第51頁DC判定形態(tài)學(xué)判定表面特異性標(biāo)識物判定（CD1a、CD83）功效學(xué)判定：混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)促T細(xì)胞增殖作用DC分泌IL-