DNA一、C.可將雙鏈DNAD.可將兩個(gè)DNAA.DNAD.其受宿主控制C.DNA4、內(nèi)常用的連接外源性DNA載體DNA的酶是TaqT4DNA連接酶C.DNAID.DNA聚合酶ⅡE.DNA聚合酶Ⅲ也稱克需供體E.常帶抗藥B.4～6個(gè)核苷酸組D.DNA連接子技術(shù)DNA二、Western<1>、含單鏈環(huán)狀DNA，細(xì)菌后，可形成過(guò)渡階段的雙鏈環(huán)狀型DNA：動(dòng)：<3>、.環(huán)狀雙鏈DNA，由4363bp組成，具有一個(gè)起始點(diǎn)，一個(gè)抗氨芐青霉素和一個(gè)抗四環(huán)素的基C.大腸桿菌DNAID.大腸桿菌DNAE.YT-1DNA<1>、TaqDNA<2>、KlenowDNA一、1【答疑編 2【答案解析】：質(zhì)粒：是天然存在于細(xì)菌外的DNA分子，通常為環(huán)狀、雙鏈的超螺旋結(jié)構(gòu)。載體：就是把外源引入受體細(xì)胞并在其中能自我的小型DNA分子。①能自 ②具有一種或多種限制酶的單一切割位點(diǎn)并在此位點(diǎn)插入外源DNA15kb時(shí)，其將外源DNA④應(yīng)包含一個(gè)可供選擇的標(biāo)記，這個(gè)中間可插入一段外源DNA而失活導(dǎo)致表型改變【答疑編 3用一側(cè)引物對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙脫氧末端終止法反應(yīng)，用一個(gè)ddNTP參入反應(yīng)，產(chǎn)生長(zhǎng)短不一的DNASSCPPCRDNA單鏈。DDF方法克服了SSCP分析時(shí)因DNA長(zhǎng)度影響SSCP顯示的，通過(guò)一種雙脫氧核苷酸產(chǎn)生異質(zhì)性的單鏈DNA，使其中長(zhǎng)度合適的DNASSCP改變。二、PCR 4種dNTP混合物 各10～100pmol模板DNA TaqDNA聚合酶 PCRPCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP

【答疑編 4【該題針對(duì)“”

【答疑編 5

【答疑編 6【答案解析】：質(zhì)粒是細(xì)菌擬核露DNA外的遺傳物質(zhì)，為環(huán)形閉合的雙股DNA,存在于細(xì)胞質(zhì)中，質(zhì)粒【答疑編 7【答案解析】：DNA限制性內(nèi)切酶：生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。限制酶識(shí)別序列的長(zhǎng)度一般為4-8個(gè)堿基，最常見(jiàn)的為6個(gè)堿基。限制酶識(shí)別的序列大多數(shù)為回文對(duì)稱結(jié)構(gòu)，切割位點(diǎn)在DNA兩條鏈相對(duì)稱的位置。

【答疑編 8【該題針對(duì)“”

【答疑編 9【該題針對(duì)“”

【答疑編 二、1【答疑編 【答案解析】：Southern印跡雜交是進(jìn)行組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNADNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。【答疑編 【答疑編 【答疑編 2【答疑編 【答疑編 【答疑編 【答案解析】：pBR322質(zhì)粒DNA分子的長(zhǎng)度為4363bp，此載體中有兩個(gè)標(biāo)記，一個(gè)是氨芐青霉素抗性（Apr），另一個(gè)是四環(huán)素抗性（Tetr）?，F(xiàn)在已知pBR322DNA分子共有24種核酸內(nèi)切7種限制酶（12：00位置按順時(shí)針?lè)较颍〦coRV，NheI，BamHI，SphI，SalI，XmaIII和NruI的識(shí)別位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性內(nèi)部，另外有2種限制酶即ClaI和HindIII的識(shí)別位點(diǎn)是存在于這個(gè)的啟動(dòng)區(qū)內(nèi)，在這9個(gè)限制位點(diǎn)上插入外源DNA都會(huì)導(dǎo)致tetr的失活?！敬鹨删?3【答疑編 【答案解析】：TaqDNAyT1株分離提取的。yT是一種嗜熱真菌，能在70～75℃生長(zhǎng)。該菌是1969年從黃石國(guó)家森林公園火山溫泉中分離的。該酶全長(zhǎng)2496個(gè)堿83294KDa.200000單位/mg.75～80℃時(shí)每個(gè)酶分子每秒150個(gè)核苷酸，7060個(gè)核苷酸/秒，5524個(gè)核苷酸/秒。溫度過(guò)高（90℃以上）或過(guò)低（22℃）TaqDNA90DNA合成，PCR92.5℃、9597.5℃時(shí)，PCRTaqDNA130min，40min5～6min50%的活性，實(shí)驗(yàn)表明。PCR95℃～20sec，50個(gè)循環(huán)后，TaqDNA65%的活性。TaqDNAPCRPCR反應(yīng)能迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用的原因。TaqDNA65～68Mn2存在時(shí)，其逆轉(zhuǎn)錄活性更高。TaqDNAMg2Mg2濃度非常敏感。以活性程度很低的鮭魚(yú)DNA為模板，dNTP0.7～0.8mmol/LMg2進(jìn)行PCR10min，測(cè)定Mgcl22.0mmol/LTaqDNA聚合酶的活性，Mg2過(guò)高就抑制酶活性，當(dāng)Mgcl2濃度在10mmol/L40～50%Mg2能與dNTPPCR反應(yīng)液中游離的Mg2Mgcl2的濃度在不同的反應(yīng)體系中應(yīng)適當(dāng)調(diào)整，優(yōu)化濃度。一般反應(yīng)中Mg2濃度至少應(yīng)比dNTP0.5～1.0mmol/L.KCLTaqDNA50～60%50mmol/L75mmol/L時(shí)明顯抑制該酶【答疑編 5→3DNA聚合酶活性，對(duì)于單鏈DNA3→5的外切核酸酶活性，但3DNAI5→3的外切核酸酶活1、5→3DNAPolymerase(DNA或RNA)存在的條件下，以dNTP5→3DNAKlenow3→5Exonuclease(T4Polymerase100～1000分之一)