臨床實(shí)驗(yàn)室LC-MS/MS檢驗(yàn)的質(zhì)量管理廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部黃憲章報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制質(zhì)譜技術(shù)原理質(zhì)譜儀（MS）

由離子源、真空接口、質(zhì)量分析器和檢測(cè)器組成。

根據(jù)檢測(cè)器類型可分為磁質(zhì)譜、四級(jí)桿質(zhì)譜、離子阱質(zhì)譜、傅里葉回旋共振質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜。TurboVLINAC?三級(jí)四極桿線性離子阱離子傳輸一級(jí)四極桿檢測(cè)器離子源線性加速碰撞室質(zhì)譜技術(shù)的缺陷及修正

質(zhì)譜技術(shù)的缺陷——樣品必須單一、純凈。

缺陷的修正——色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。色譜技術(shù)原理

色譜技術(shù)：是一種分離技術(shù)，利用組分在兩相間分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的技術(shù)，色譜的主要目的是對(duì)混合物中的目標(biāo)物分離和定量。

色譜技術(shù)包括：氣相色譜、液相色譜等。

液相色譜（高效液相色譜-

High

Performance

Liquid

Chromatography

）：

以液體作為流動(dòng)相的色譜分離方法，適用于高沸點(diǎn)、

大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析；

流動(dòng)相具有運(yùn)載樣品分子和選擇性分離的雙重作用。色譜技術(shù)原理

流動(dòng)相：攜帶樣品流過(guò)整個(gè)系統(tǒng)的流體；

固定相：靜止不動(dòng)的一相；

色譜柱：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管；

檢測(cè)器：常見的有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器；

色譜圖：色譜柱流出物通過(guò)檢測(cè)器系統(tǒng)產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)對(duì)時(shí)間或載體流出體積的曲線圖。色譜技術(shù)原理氣相色譜儀（GC）?

進(jìn)樣系統(tǒng)?

載氣系統(tǒng)

常用氮?dú)?、氦氣?

分離系統(tǒng)

色譜柱?

檢測(cè)系統(tǒng)

熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）

氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）

火焰光度檢測(cè)器（FPD）

質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）……?

數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)色譜技術(shù)原理高效液相色譜儀（HPLC）?

進(jìn)樣系統(tǒng)?

輸液系統(tǒng)

高壓輸液泵?

脫氣機(jī)?

分離系統(tǒng)

色譜柱?

檢測(cè)系統(tǒng)

紫外檢測(cè)器（UV）

二極管陣列檢測(cè)器（DAD)

熒光檢測(cè)器

（FLD）

質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）……?

數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）

串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)：

可以獲得更多有關(guān)待測(cè)離子的結(jié)構(gòu)信息，適合未知化合物的結(jié)構(gòu)分析；

對(duì)相同分子量的化合物共流出物可進(jìn)行區(qū)分，提高了檢測(cè)特異性；

對(duì)于復(fù)雜樣本的分析可提高子離子的選擇性、提高信噪比、降低檢測(cè)限，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

基于串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)越性能，為了深入的認(rèn)識(shí)待測(cè)離子的性質(zhì)及提高檢測(cè)能力，目前用于生命科學(xué)的質(zhì)譜儀器幾乎都是兩級(jí)或多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜。液相色譜質(zhì)譜技術(shù)原理色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)?

液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（LC-MS）LCMS高分離能力高靈敏度、高特異性液相色譜質(zhì)譜技術(shù)原理電離源質(zhì)譜儀分析時(shí)，樣本必須先進(jìn)行離子化電離模式

主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)主要應(yīng)用電子轟擊（EI）硬電離，給樣本較大的能量而電離1.得到豐富的碎片離子，有助于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定2.

常用于揮發(fā)性樣本的電離GC-MS化學(xué)電離（CI）軟電離1.碎片離子稍，圖譜簡(jiǎn)易，易于解析2.一些穩(wěn)定性差的化合物適合GC-MS電噴霧電離（ESI）軟電離，生成帶電液滴1.適合范圍廣:分析離子型/極性化合物、難揮發(fā)或

LC-MS熱不穩(wěn)定性化合物2.

多電荷離子的形成，可以分析高分子量化合物、靈敏度高大氣壓化學(xué)軟電離，電離（APCI）

液體分子轉(zhuǎn)變1.有一定揮發(fā)性的中等極性或低極性的小分子化合物L(fēng)C-MS為氣體分子2.對(duì)溶劑選擇、流速和添加物的依賴性較小20世紀(jì)80年代，軟電離技術(shù)的發(fā)明，推動(dòng)了LC-MS聯(lián)用技術(shù)的迅速發(fā)展！高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀特點(diǎn)

以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng);

液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)的互補(bǔ)，將色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)。LC-MS的優(yōu)勢(shì)

分析范圍廣：MS幾乎可以檢測(cè)所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題；

分離能力強(qiáng)：即使被分析混合物在色譜上沒(méi)有完全分離開，但通過(guò)MS的特征離子質(zhì)量色譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來(lái)進(jìn)行定性定量；

檢測(cè)限低，MS具備高靈敏度：通過(guò)選擇離子檢測(cè)（

selectiveionmonitoring,SIM）方式，其檢測(cè)能力還可以提高一個(gè)數(shù)量級(jí)以上；

定性分析結(jié)果可靠：可以同時(shí)給出每一個(gè)組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息；與其他方法的比較?

免疫法?

GC-MS法放射免疫分析法：放射性核素污染標(biāo)記物容易衰變要求分析物易揮發(fā)，樣品需要進(jìn)行衍生化；增加樣品預(yù)處理時(shí)間，樣品遇熱易降解；酶免疫法：自動(dòng)化程度不高特異性不夠?

LC-MS/MS法?

化學(xué)發(fā)光法靈敏度可能不足。特異性強(qiáng)，可從眾多化合物中選擇想要檢測(cè)的對(duì)象；非特異性反應(yīng)靈敏度較好，具有多通道檢測(cè)能力。LC-MS/MS綜合優(yōu)勢(shì)?

高準(zhǔn)確性和特異性，直接測(cè)定質(zhì)量,

專一、靈敏、通用（免疫分析對(duì)小分子化合物存在檢測(cè)缺陷）；?

LC-MS/MS技術(shù)已成為目前生物樣品中小分子化合物定性定量測(cè)定的金標(biāo)準(zhǔn)方法?

比HPLC和GC-MS容易使用，通量更大，是免疫分析法的主要互補(bǔ)方法；?

與其他技術(shù)相比，長(zhǎng)期運(yùn)行成本低：使用通用試劑、消耗品成本低廉，大批量測(cè)定有優(yōu)勢(shì)；?

一針進(jìn)樣可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)化合物。LC-MS的劣勢(shì)?

儀器成本高?

商品試劑盒少?

需要專職人員操作和維修保養(yǎng)儀器?

需要高技術(shù)人員進(jìn)行方法學(xué)研究?

標(biāo)本前處理自動(dòng)化設(shè)備比手工處理差?

成批檢測(cè)，不利于急診檢驗(yàn)?

單位時(shí)間檢測(cè)的標(biāo)本量比常規(guī)化學(xué)低?

質(zhì)量管理法規(guī)等不健全?

很多項(xiàng)目沒(méi)有收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)?

有的項(xiàng)目沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)?

使用有機(jī)溶劑不利于環(huán)境保護(hù)、不利于工作人員的健康報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制質(zhì)譜技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用?

可以在質(zhì)譜平臺(tái)開展的項(xiàng)目

臨床上有需求的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法無(wú)法準(zhǔn)確定性定量的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)的項(xiàng)目

現(xiàn)在物理、化學(xué)、免疫等方法成本高的項(xiàng)目

沒(méi)有商品化試劑盒的項(xiàng)目質(zhì)譜技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用1.

新生兒疾病篩查（ID-MS）2.微量元素檢測(cè)（ICP-MS）3.微生物鑒定（MALDI-TOF-MS

）4.

違禁藥品的檢測(cè)（運(yùn)動(dòng)員賽后檢測(cè)，GC-MS，LC-MS）5.

治療藥物監(jiān)測(cè)（抗免疫排斥反應(yīng)藥物、治療神經(jīng)精神病類藥物、抗心律失常藥、腫瘤靶向治療藥物等，

LC-MS

）6.

毒品檢測(cè)（吸毒者的診斷與監(jiān)測(cè)，LC-MS）7.小分子激素水平測(cè)定（

GC-MS，LC-MS）8.

維生素測(cè)定：A、D、E、K及B族維生素等（LC-MS）9.

遺傳代謝病檢測(cè)：膽汁酸檢測(cè)等（LC-MS）10.蛋白鑒定和定量：糖化血紅蛋白、胰島素、C肽、PTH、血管緊張素等（LC-MS）11.

……串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（MS/MS）在新生兒遺傳代謝病篩查上應(yīng)用氨基酸代謝?。?5種）

有機(jī)酸血癥（13種）

脂肪酸氧化障礙疾?。?2種）高苯丙氨酸血癥；楓糖尿?。∕SUD）；氨甲酰磷酸合成酶缺乏癥；高胱氨酸尿癥；高蛋氨酸血癥；酪氨酸血癥；3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A裂解酶缺

肉堿轉(zhuǎn)運(yùn)障礙；乏癥；肉堿／?；鈮A轉(zhuǎn)移酶缺乏癥；戊二酸血癥；肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏I型；丙酸血癥；肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏II型；極長(zhǎng)鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；3-羥基長(zhǎng)鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；線粒體三官能蛋白缺乏癥；2-甲基丁酰輔酶A脫氧酶缺乏癥；甲基丙二酸血癥；異戊酸血癥；精氨酸血癥；精氨琥珀酸尿癥；瓜氨酸血癥；精氨酸血癥；3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥；

中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥；多種輔酶A羧化酶缺乏癥；線粒體乙酰輔酶A硫解酶缺乏癥；丙二酸尿癥；羥基短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；多種酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥；短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥；2,4-二烯酰輔酶A還原酶缺乏癥；高脯氨酸血癥；高血氨癥、同型瓜氨酸尿癥、高鳥

異丁?；o酶A脫氫酶缺乏癥；氨酸血癥綜合癥；高鳥氨酸血癥；3-甲基戊烯二酰輔酶A水解酶缺乏癥；生物素酶缺乏癥；苯丙酮尿癥（PKU）；5-羥脯氨酸尿癥；電感耦合等離子體質(zhì)譜技術(shù)（ICP-MS）

無(wú)機(jī)元素測(cè)定，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)人體內(nèi)必需元素和有毒有害元素；

穩(wěn)定同位素示蹤研究；

元素形態(tài)分析。血清鈣、鎘、鎂、錳、鉛、鐵、銅、硒；全血鉛、錳、鋅、鐵、銅、鎂、鈣、硒；尿鎘、鉻、汞、鎂、錳、鎳、鉛、砷、鐵、銅、硒、鋅；基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

（MALDI-TOF

MS）

微生物鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)

基于蛋白質(zhì)組學(xué)的

MALDI-TOF

MS技術(shù)首先用大量的菌株建立數(shù)據(jù)庫(kù)，常規(guī)檢測(cè)時(shí)通過(guò)軟件分析比較，篩選并確定待檢病原體的指紋圖，與數(shù)據(jù)庫(kù)中各種已知的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，完成對(duì)微生物的鑒定。報(bào)告提綱1.

色譜質(zhì)譜技術(shù)原理2.

LC-MS臨床應(yīng)用3.

LC-MS質(zhì)量控制LC-MS質(zhì)量管理的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)?CLSI：Standard:

C50;Mass

Spectrometry

inthe

ClinicalLaboratory:

General

Principles

and

Guidance,

1st

EditionStandard:

C62;Liquid

Chromatography-Mass

Spectrometry

Methods,

1st

EditionStandard:

C57;Mass

Spectrometry

for

Androgen

and

Estrogen

Measurements

inSerum,

1st

EditionStandard:

C43;Gas

Chromatography/Mass

Spectrometry

Confirmation

of

Drugs,

2nd

EditionStandard:

NBS04;

Newborn

Screeningby

Tandem

Mass

Spectrometry,

2nd

EditionStandard:

M58;

Methods

for

the

Identification

of

CulturedMicroorganisms

Using

Matrix-Assisted

LaserDesorption/Ionization

Time-of-Flight

Mass

Spectrometry,

1st

EditionStandard:

CLSI/CAP2018

AST

Webinar;

CLSI/CAPWebinar:

Resources

for

Implementation

of

Matrix-Assisted

LaserDesorption/Ionization

Time-Of-Flight

Mass

Spectrometry

(MALDI-TOF

MS)

inthe

ClinicalMicrobiology

Laboratory?Standard:

C40;Measurement

Proceduresfor

the

Determination

of

Lead

Concentrations

inBlood

andUrine,

2nd

EditionCLSI：EP等文件?CAP：?Chemistry

and

Toxicology

Checklist（TLC，GC，HPLC，MS，ICP/MS）Microbiology

Checklist（MALDI-TOF，GC，HPLC）FDA：Guidance

for

industry

bioanalytical

method

validationEMA(European

Medicines

Agency):

Guideline

on

bioanalytical

Method

ValidationSWGTOX(Scientific

working

group

forensic

toxicology

):

Standardpractices

for

method

validation???中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)，衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心，《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》編輯部：液相色譜-質(zhì)譜臨床應(yīng)用建議.

中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，40（10）：770-779.?SFDA：人

員?實(shí)驗(yàn)室主任：LC/MS作為實(shí)驗(yàn)室自建項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室主任需要確保LC/MS在開展前完成：

檢測(cè)性能確立與臨床應(yīng)用評(píng)估

建立完善的質(zhì)量控制體系

編寫從標(biāo)本采集到結(jié)果解釋全過(guò)程的規(guī)范化操作規(guī)程，并且簽字許可新的LC/MS方法認(rèn)證報(bào)告以及執(zhí)行。?操作人員要求

研發(fā)人員應(yīng)具備分析化學(xué)、藥學(xué)、生物化學(xué)、生命科學(xué)或醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)等相關(guān)的教育背景和工作經(jīng)歷。藥學(xué)、分析化學(xué)專業(yè)有優(yōu)勢(shì)。

操作人員應(yīng)經(jīng)培訓(xùn)、考核后才能上崗操作。

實(shí)驗(yàn)室須制定人員培訓(xùn)計(jì)劃，包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部及外部培訓(xùn)。所有培訓(xùn)應(yīng)有記錄證明相應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作人員通過(guò)培訓(xùn)考核。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立每一位內(nèi)部人員的檔案記錄，包括員工的簡(jiǎn)歷、教育背景、工作經(jīng)驗(yàn)、培訓(xùn)考評(píng)記錄等。

選擇有經(jīng)驗(yàn)的人員、注重工作細(xì)節(jié)的人員、有創(chuàng)新能力的人員。設(shè)施和環(huán)境條件

確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件不會(huì)使結(jié)果無(wú)效，或?qū)λ蟮臏y(cè)量質(zhì)量產(chǎn)生不良影響！

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立設(shè)施和環(huán)境管理程序????實(shí)驗(yàn)室應(yīng)監(jiān)測(cè)、控制和記錄環(huán)境條件；灰塵、電磁干擾、溫度、濕度等對(duì)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀有影響。一般要求溫度控制在15℃

-30

℃或

20℃-30℃，濕度范圍為20-80%

或20％-70％。儀器要求配備穩(wěn)壓電源、所需輔助氣體純度符合要求、供氣充足、氣路通暢。

應(yīng)有效避免：–

儀器真空泵噪音干擾；–

氣體瓶對(duì)儀器干擾；–

揮發(fā)性氣體污染儀器

儀器放置：儀器室、操作電腦室、標(biāo)本處理室、氣體室分開?標(biāo)本處理室應(yīng)安裝通風(fēng)櫥、儀器室應(yīng)安裝排氣裝置設(shè)施和環(huán)境條件?

最小房間面積滿足操作要求?

環(huán)境溫度為15-30度（注意儀器產(chǎn)生的熱量）；隨著時(shí)間的推移，溫度必須保持在4度的范圍內(nèi)，溫度變化率不超過(guò)2度/小時(shí)，超過(guò)極限波動(dòng)的溫度可導(dǎo)致質(zhì)譜中的質(zhì)量漂移。?

相對(duì)濕度20-80%，不凝結(jié)。?

質(zhì)譜儀和粗抽泵的冷卻和排氣：8700BTU/HR?

無(wú)振動(dòng)環(huán)境?

無(wú)化學(xué)干擾?

無(wú)電磁干擾?

有機(jī)溶劑和分析物對(duì)環(huán)境無(wú)影響設(shè)施和環(huán)境條件?

防止靜電

在一個(gè)相對(duì)濕度為20%的房間里走動(dòng)可以產(chǎn)生高達(dá)35000V的靜電電位在你的身體表面，在相對(duì)濕度為80%的房間里走動(dòng)可以產(chǎn)生高達(dá)1500V的靜電電位。

在一個(gè)相對(duì)濕度為20%的房間里坐在聚氨酯泡沫填充的椅子上工作，在你的皮膚表面可產(chǎn)生高達(dá)18000V的靜電電位，在相對(duì)濕度為80%的房間里可以產(chǎn)生高達(dá)1500V的靜電電位。

在實(shí)驗(yàn)室穿合成纖維制成的工作服會(huì)導(dǎo)致靜電堆積在皮膚上累積。

使用聚苯乙烯泡沫塑料杯和包裝材料會(huì)產(chǎn)生相當(dāng)大的靜電實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、試劑和耗材?

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)?

購(gòu)買儀器需考慮的因素：目的明確（檢測(cè)什么物質(zhì)）、設(shè)備性能滿足要求（可測(cè)的質(zhì)量范圍，儀器靈敏度、分辨率、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性，好的軟件），提供好的服務(wù)。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制備完善的儀器設(shè)備管理使用程序文件、儀器操作使用程序文件等用于規(guī)范儀器的使用，維護(hù)和應(yīng)急處理。?

設(shè)備校準(zhǔn)和計(jì)量學(xué)溯源

a)

液相色譜儀和色譜柱符合：JJG705

液相色譜儀檢定要求；色譜柱的穩(wěn)定性，色譜柱更換的指標(biāo)。

b)

三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）大氣壓化學(xué)電離離子源（APCI），儀器校準(zhǔn)合格，各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)符合JJF1317

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范的要求。定期儀器調(diào)諧—質(zhì)譜以ABSCIEX5500三重四極桿校準(zhǔn)為例：1基本信息儀器編號(hào)校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)地點(diǎn)儀器型號(hào)生產(chǎn)廠家環(huán)境溫度相對(duì)濕度2校準(zhǔn)周期：3個(gè)月3校準(zhǔn)品來(lái)源：ABSCIEX公司4校準(zhǔn)品批號(hào)：44061275校準(zhǔn)結(jié)果：5.1外觀：正常5.2用PPGPOS標(biāo)準(zhǔn)試劑（2.0×10-7mol/L）對(duì)儀器的Q1、Q3正離子模式進(jìn)行測(cè)試，驗(yàn)證儀器的質(zhì)量數(shù)偏移、半峰高寬符合要求。5.3用PPGNEG標(biāo)準(zhǔn)試劑（3.0×10-5

mol/L）對(duì)儀器的Q1、Q3負(fù)離子模式進(jìn)行測(cè)試，驗(yàn)證儀器的質(zhì)量數(shù)偏移、半峰高寬符合要求。5.4

實(shí)驗(yàn)條件：針泵流速為：5μL/mim；掃描速度：10

Da/s循環(huán)數(shù)：10MCA：On5.5要求：質(zhì)量偏差（mass

shift）：-0.1—0.1

Da；半峰高寬（Peak

Width）：0.6—0.8

amu(0.7±0.1

amu)。靈敏度要求：正離子模式下Q1和Q3均應(yīng)滿足：質(zhì)量（Da）175.133響應(yīng)（cps）≥1.2×106≥1.4×107906.673負(fù)離子模式下Q1負(fù)離子模式下Q3質(zhì)量（Da）響應(yīng)（cps）≥1.0×107933.636質(zhì)量（Da）響應(yīng)（cps）≥8.0×106933.6365.5校準(zhǔn)結(jié)果：（示例）Q1、Q3正離子模式，針泵流速為：5

μL/mim；掃描速度：10

Da/s。離子模式：Q1正離子校

準(zhǔn)

質(zhì)

量

檢

測(cè)

質(zhì)

量

質(zhì)

量

偏

差

半

峰

高

寬

半

峰

高

寬

偏

是否符合響應(yīng)(Expected

Mass)

(Found

Mass)

(massshift)(Peak

Width)差（

PW（Intensity,

cps）Shift）59.05059.0270.0230.0250.0280.0430.0290.6550.7600.7090.7380.7450.045符合符合符合符合符合/175.133500.380616.464906.673175.108500.352616.421906.644-0.060-0.009-0.038-0.0451.6×106//1.9×107離子模式：Q3正離子校準(zhǔn)質(zhì)量

檢

測(cè)

質(zhì)

量

質(zhì)

量

偏

差

半

峰

高

寬

半

峰

高

寬

是否符合

響應(yīng)(Expected

Mass)(Found

Mass

(massshift)

(PeakWidth)

偏差（PW（

Intensit)Shift）y,

cps）59.05059.0350.0150.0130.0470.0280.0240.6700.7230.7330.7400.7320.030符合符合符合符合符合/175.133500.380616.464906.673175.120500.333616.436906.649-0.023-0.033-0.040-0.0321.8×106//2.1×107液相系統(tǒng)的校準(zhǔn)輸液系統(tǒng)性能要求：

輸液管路接口緊密牢固，在規(guī)定的壓力范圍內(nèi)無(wú)泄漏。

流量設(shè)定值誤差S

、和流量穩(wěn)定性誤差S

、應(yīng)符合下表的要求。SR

梯度誤差Ge：不超過(guò)士3%。流量流量設(shè)定值誤差S

、和流量穩(wěn)定性誤差S

的要求SR流量設(shè)定值

（mL/min）測(cè)量次數(shù)0.531.032.03流動(dòng)相收集時(shí)間/min105%3%55允許誤差SSSR3%2%2%2%注：

1.

最大流量的設(shè)定值可根據(jù)用戶使用情況而定。2.對(duì)特殊的、流量小的儀器，流量的設(shè)定可根據(jù)用戶使用情況選大、中、小三個(gè)流量，流動(dòng)相的收集時(shí)間則根據(jù)情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)。柱溫箱：

柱溫箱溫度設(shè)定值最大允許誤差：±2℃。

柱溫箱溫度溫度性：不大于1℃/h。色譜柱：色譜柱參數(shù)要求名稱類型性能要求柱效理論塔板數(shù)在3×104~4×104色譜柱，C18對(duì)稱性被測(cè)峰（蒽）的不對(duì)稱因子在0.8~1.6試劑和耗材準(zhǔn)備（1）關(guān)注檢測(cè)過(guò)程中試劑和耗材對(duì)檢測(cè)的影響LC-MS技術(shù)靈敏度高，可達(dá)到匹克級(jí)，故容易受到試劑純度或耗材雜質(zhì)的干擾。（2）試劑建議挑選MS級(jí)別的試劑，使用前需做好驗(yàn)證工作，使用期間按照說(shuō)明書恰當(dāng)保存，操作過(guò)程必須避免污染，防止高溫和揮發(fā)對(duì)其穩(wěn)定性、濃度和純度的影響。評(píng)估試劑的質(zhì)量。（3）容量瓶和移液器在標(biāo)準(zhǔn)品和IS制備時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需配備A級(jí)的容量瓶和移液器。使用前需評(píng)估和記錄容量瓶、移液器的準(zhǔn)確性和精密度。建議：關(guān)注檢測(cè)過(guò)程中試劑和耗材對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，記錄每個(gè)試劑、色譜柱、耗材的批號(hào)以便追溯干擾源。檢驗(yàn)前過(guò)程?

分析前的質(zhì)量控制

樣本類型：全血、血清、血漿、尿液、唾液、腦脊液等；

體位：需考慮某些血液成分的檢測(cè)結(jié)果易受到體位的影響，例如檢測(cè)某些血壓相關(guān)激素及其代謝產(chǎn)物（醛固酮、兒茶酚胺等）；

采集：采集時(shí)間、生理周期、采集的設(shè)備和容器對(duì)檢測(cè)的影響；

運(yùn)輸：樣本在運(yùn)輸過(guò)程中的全程監(jiān)控也很重要，避免運(yùn)輸不當(dāng)造成對(duì)檢測(cè)的影響；

處理：物理因素包括光照和溫度，化學(xué)因素與分析物的化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。正確的樣本處理方式有利于保證生物樣本穩(wěn)定性；

儲(chǔ)存：儲(chǔ)存條件。檢驗(yàn)過(guò)程?

SOP的制定及執(zhí)行一旦方法建立并確認(rèn)后，應(yīng)制定詳細(xì)的SOP，對(duì)所有試劑原料的來(lái)源、試劑配制、標(biāo)本類型、標(biāo)本采集、運(yùn)送、保存、處理、檢測(cè)、質(zhì)控、結(jié)果判斷、臨床意義等內(nèi)容均需要詳細(xì)規(guī)定，如涉及影響檢測(cè)結(jié)果的分析軟件均需在SOP中注明SOP一旦制定，應(yīng)嚴(yán)格按照SOP執(zhí)行，否則，實(shí)驗(yàn)室將缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)SOP存在缺陷時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可經(jīng)過(guò)討論、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后及時(shí)修改相關(guān)內(nèi)容并簽字確認(rèn)。?

樣品的處理

稀釋進(jìn)樣、蛋白質(zhì)破粹、固相萃取、液液萃取

手工處理

自動(dòng)化處理

衍生化處理?

試劑質(zhì)量

在分析批次前檢測(cè)純?nèi)軇┦欠窈写郎y(cè)物（分析物與內(nèi)標(biāo)）?

標(biāo)準(zhǔn)品

每家生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品純度不同，鹽分含量不一樣

最好買不同來(lái)源的標(biāo)準(zhǔn)品，定期與權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)品（如NIST、NIM等）比對(duì)并保留記錄

每次更換標(biāo)準(zhǔn)品批次必須與前一批次比對(duì)并保留記錄?

內(nèi)標(biāo)的選擇

穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)（2H，13C，15N等）：由于可能的交叉干擾或者源內(nèi)裂解，通常對(duì)分子量小于400的分析物與內(nèi)標(biāo)差異至少為3，對(duì)分子量大于500的分析物與內(nèi)標(biāo)差異至少為4-5或更多。

結(jié)構(gòu)類似物：通常用作分析多肽和蛋白質(zhì)的內(nèi)標(biāo)。缺點(diǎn)：保留時(shí)間和離子化都可能與待測(cè)物不同，限制了對(duì)待測(cè)物因基質(zhì)效應(yīng)而產(chǎn)生的信號(hào)增強(qiáng)或抑制的校正能力。?

IS純度?

最好3個(gè)以上同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)建立新方法1.

移植別人已經(jīng)建立的方法2.

開發(fā)新方法3.

培訓(xùn)其他人員影響質(zhì)譜方法學(xué)的因素

離子化模式的選擇

離子源的參數(shù)設(shè)置

離子對(duì)的選擇

離子對(duì)參數(shù)的設(shè)置

其他新方法的選擇?

確認(rèn)儀器基本性能正常?

正確的峰?

信噪比（S/N,背景強(qiáng)度與分析信號(hào)）?

峰的分辨率?

峰的對(duì)稱性?

保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立1.

具有臨床意義的系列濃度，涵蓋參考范圍2.

最好與醫(yī)學(xué)決定水平相關(guān)3.

征求臨床醫(yī)生的建議

配制能夠覆蓋參考范圍的多個(gè)濃度（5-7個(gè)）校準(zhǔn)品；

配制適當(dāng)濃度的內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)品；

建立峰面積積分的方法；

建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；

多個(gè)項(xiàng)目同時(shí)檢測(cè)時(shí)應(yīng)權(quán)衡好各個(gè)項(xiàng)目的校準(zhǔn)品的濃度水平。方法學(xué)性能評(píng)價(jià)

精密度

靈敏度

（LOD,

LOQ）

特異性實(shí)驗(yàn)

干擾試驗(yàn)

準(zhǔn)確度

定量范圍以外的濃度稀釋評(píng)價(jià)

小體積樣本的稀釋評(píng)價(jià)

不確定度評(píng)價(jià)

萃取回收率

線性范圍

基質(zhì)效應(yīng)

攜帶污染

方法比對(duì)

離子抑制或增強(qiáng)：在方法學(xué)建立早期，對(duì)離子抑制進(jìn)行評(píng)價(jià)確立方法開發(fā)與驗(yàn)證計(jì)劃，在方法開發(fā)與驗(yàn)證間反復(fù)確認(rèn)，持續(xù)監(jiān)控方法學(xué)性能。

基質(zhì)效應(yīng)的研究

QC樣本與患者樣本：LC-MS性能參數(shù)相似

提取率

回收率

LC特征：保留時(shí)間，峰型

離子抑制檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的保證?

LC-MS檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制

LC-MS的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系包括質(zhì)量保證和質(zhì)量控制，確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)性能良好、設(shè)備環(huán)境完善、生物安全合規(guī)以及人員培訓(xùn)、操作規(guī)范。必須涉及整個(gè)檢測(cè)流程，即從樣本預(yù)處理、分析過(guò)程到結(jié)果解釋。?

樣本預(yù)處理：標(biāo)本的分離及保留，通過(guò)適當(dāng)?shù)那疤幚磉^(guò)程，使得標(biāo)本滿足質(zhì)譜儀的檢測(cè)要求。?

分析過(guò)程：人、機(jī)、料、法、環(huán)。?

質(zhì)控品、校準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑和耗材準(zhǔn)備?

質(zhì)譜技術(shù)在臨床上的應(yīng)用目前屬于實(shí)驗(yàn)室自建項(xiàng)目（LDT）無(wú)商品化的試劑，需要使用自配試劑！?

校準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)品和質(zhì)控品?

校準(zhǔn)品：盡量一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)品的配置，校準(zhǔn)品配制過(guò)程中的各稱量、定容等數(shù)據(jù)要嚴(yán)格記錄。?內(nèi)標(biāo)品：?種類：IS一般有兩種，即結(jié)構(gòu)類似物和穩(wěn)定同位素標(biāo)記物。用途：主要用于LC-MS定量分析中校正基質(zhì)效應(yīng)或樣本萃取、色譜分離、離子化過(guò)程中產(chǎn)生的偏差。建議：（1）推薦使用非放射性穩(wěn)定同位素標(biāo)記物，因其具有不易轉(zhuǎn)化為非標(biāo)記物質(zhì)的特點(diǎn)，并能滿足作為IS的穩(wěn)定性及安全性的要求，使分析結(jié)果具有更好的精密度和準(zhǔn)確性；??（2）檢測(cè)中建議IS的質(zhì)量比目標(biāo)分析物至少大3Da，標(biāo)記純度超過(guò)98%；（3）同位素標(biāo)記的IS包括2H、13C、15N、18C或混合標(biāo)記，不推薦使用放射性較強(qiáng)的標(biāo)記，如125I、3H和14C；推薦使用13C、15N標(biāo)記。?實(shí)驗(yàn)室須評(píng)估自配或商品化內(nèi)標(biāo)的穩(wěn)定性和純度，保證檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定可靠。?

質(zhì)控品：自配質(zhì)控品，需注意質(zhì)控品基質(zhì)與檢測(cè)樣本相同、穩(wěn)定且均一。質(zhì)控品的具體要求見后面室內(nèi)質(zhì)控部分！室內(nèi)質(zhì)控?建議運(yùn)行至少3個(gè)濃度質(zhì)控品，濃度盡可能覆蓋定量范圍，包括三倍定量檢測(cè)下限（LLMI）、定量范圍的中間以及定量檢測(cè)上限（ULMI）的附近，也可設(shè)定在LLMI

或者醫(yī)質(zhì)控品濃度范圍質(zhì)控頻率學(xué)決定水平附近?；蛘！⒌陀谡?、高于正常三個(gè)濃度。?建議在每批次樣本檢測(cè)前、后均運(yùn)行質(zhì)控樣本。?嚴(yán)格的要求，同一批次質(zhì)控在開始、中間和最后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)。?質(zhì)控頻率取決于方法學(xué)性能、某一時(shí)間段內(nèi)檢測(cè)的樣本數(shù)量以及錯(cuò)誤結(jié)果對(duì)于臨床影響的嚴(yán)重程度。?無(wú)論商品化或自配質(zhì)控樣本，實(shí)驗(yàn)室必須建立質(zhì)控的可接受標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于商品化質(zhì)控樣本，不建議直接使用生產(chǎn)商提供的可接受范圍。建議使用質(zhì)控圖和質(zhì)控規(guī)則。每次更換質(zhì)控品，必須和前一批次比對(duì)。質(zhì)控規(guī)則?無(wú)論商品化或自配質(zhì)控樣本，

質(zhì)控的介質(zhì)必須和病人樣品基質(zhì)一致。對(duì)于無(wú)成品或商品化質(zhì)控品（自制質(zhì)控品）應(yīng)由該專業(yè)具有豐富工作經(jīng)驗(yàn)專業(yè)人員配制，并采用盲法按照性能要求進(jìn)行評(píng)價(jià)。質(zhì)控品配置實(shí)驗(yàn)室的自配質(zhì)控品樣本的儲(chǔ)存條件、均勻性和穩(wěn)定性需要進(jìn)行評(píng)估并記錄。質(zhì)控品基質(zhì)應(yīng)與臨床標(biāo)本相同，質(zhì)控品存儲(chǔ)不當(dāng)或降解會(huì)對(duì)臨床應(yīng)用產(chǎn)生影響。質(zhì)

控

品?

質(zhì)控品的基質(zhì)

應(yīng)盡可能接近患者樣品

可用商品化質(zhì)控品

必要時(shí)，可使用患者混和樣品（含內(nèi)源性分析物；添加外源性分析物）?

質(zhì)控品的穩(wěn)定性

商品質(zhì)控物參考說(shuō)明書要求

自制質(zhì)控物：儲(chǔ)存條件、濃度、隨時(shí)間變化的幅度、凍融次數(shù)、可接受標(biāo)準(zhǔn)?

空白樣本（blank

sample）：幫助判斷內(nèi)標(biāo)降解對(duì)分析物的影響

樣品含內(nèi)標(biāo)但不含分析物

分析物信號(hào)峰面積小于定量下限（LLOQ）的20%

在批次檢測(cè)開始及結(jié)束時(shí)檢測(cè)空白樣品?

雙空白樣本（double

blank

sample）：監(jiān)控液相分離信號(hào)與質(zhì)譜儀的背景信號(hào)，評(píng)估之前檢測(cè)或高濃度樣本檢測(cè)后的攜帶污染

樣品既不含內(nèi)標(biāo)也不含分析物

在批次檢測(cè)開始及結(jié)束時(shí)，檢測(cè)高值標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品后檢測(cè)雙空白樣品

分析物信號(hào)峰面積小于定量下限（LLOQ）的20%

內(nèi)標(biāo)峰面積小于含內(nèi)標(biāo)峰面積的5%室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）

通過(guò)參加EQA評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，對(duì)能力比對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)，關(guān)注比對(duì)結(jié)果是否產(chǎn)生趨勢(shì)或偏移。其它評(píng)價(jià)方式

對(duì)于無(wú)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃的檢測(cè)項(xiàng)目，建議與外部實(shí)驗(yàn)室相同或相近的方法比對(duì)，需考慮兩種方法的檢測(cè)性能，包括樣本、可接受范圍和定量檢測(cè)限等。

檢驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化與可比性：取決于所用的參考物質(zhì)與方法。其他質(zhì)量保證和質(zhì)量控制系統(tǒng)適用性測(cè)試

檢測(cè)系統(tǒng)適用性樣本用于測(cè)試系統(tǒng)適用性的參數(shù)有噪音、分析物信號(hào)、保留時(shí)間、色譜峰分離度和色譜峰對(duì)稱性。

推薦至少在每個(gè)分析批次之前、預(yù)防性維護(hù)之后、儀器卸真空后、或者是當(dāng)系統(tǒng)平衡出現(xiàn)問(wèn)題的時(shí)候進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試，以確保檢測(cè)系統(tǒng)處于正常狀態(tài)。周期性質(zhì)量監(jiān)控

儀器設(shè)備重大維修、維護(hù)保養(yǎng)后，例如質(zhì)譜儀四極桿、質(zhì)譜儀機(jī)械泵、檢測(cè)器更換等，需評(píng)估儀器維修、維護(hù)保養(yǎng)后的性能指標(biāo)與維修、維護(hù)前保持一致