第三章細(xì)胞工程的技術(shù)根底1.第一頁，共四十八頁。第一節(jié)根本設(shè)備第二節(jié)根本技術(shù)2.第二頁，共四十八頁。第一節(jié)根本設(shè)備一設(shè)備與器材二器材處理3.第三頁，共四十八頁。一、設(shè)備與器材●大型設(shè)備類：無菌室、超凈工作臺(tái)、無菌箱、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、實(shí)體鏡、高速離心機(jī)、超速低溫離心機(jī)、冰箱、超低溫冰箱、液氮裝置。4.第四頁，共四十八頁。5.第五頁，共四十八頁。6.第六頁，共四十八頁。培養(yǎng)箱7.第七頁，共四十八頁。8.第八頁，共四十八頁。9.第九頁，共四十八頁。光照培養(yǎng)室10.第十頁，共四十八頁。11.第十一頁，共四十八頁。顯微鏡室12.第十二頁，共四十八頁。13.第十三頁，共四十八頁。14.第十四頁，共四十八頁。15.第十五頁，共四十八頁。16.第十六頁，共四十八頁。17.第十七頁，共四十八頁。18.第十八頁，共四十八頁。19.第十九頁，共四十八頁?！裣緶缇O(shè)備：蒸汽壓力消毒器、電熱枯燥箱、過濾除菌裝置、離子發(fā)生器、耐酸耐堿容器、吸管自動(dòng)沖洗器、超聲波清洗器；20.第二十頁，共四十八頁。滅菌室21.第二十一頁，共四十八頁。22.第二十二頁，共四十八頁。23.第二十三頁，共四十八頁。24.第二十四頁，共四十八頁。25.第二十五頁，共四十八頁?！衽湟河镁撸核兓b置、離子交換樹脂裝置、電子天平、磁力攪拌器、蒸發(fā)器等；●制備、培養(yǎng)、保存細(xì)胞用品：解剖器具、80～200目尼龍網(wǎng)或不銹鋼網(wǎng)、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、培養(yǎng)器皿、細(xì)胞培養(yǎng)板〔不同孔數(shù)〕、渦流混懸器、恒溫水浴振蕩器、細(xì)胞凍存管、玻璃安瓿、真空低溫枯燥器、厚質(zhì)玻璃容器等。26.第二十六頁，共四十八頁。27.第二十七頁，共四十八頁。28.第二十八頁，共四十八頁。29.第二十九頁，共四十八頁。30.第三十頁，共四十八頁。31.第三十一頁，共四十八頁。32.第三十二頁，共四十八頁。33.第三十三頁，共四十八頁。34.第三十四頁，共四十八頁。35.第三十五頁，共四十八頁。二、器材處理玻璃器皿的清洗：浸泡→刷洗→浸酸→沖洗橡膠用品的處理：沖洗→堿煮→沖洗→浸酸→沖洗→蒸煮●清洗除菌濾器的處理：高壓滅菌塑料器皿的清洗：沖洗→堿浸→沖洗→酸浸→沖洗→漂洗金屬器械的清洗：汽油→去脂→洗凈→酒精擦→蒸煮或高壓滅菌●包裝：包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃等，防止消毒后再污染；●消毒滅菌：干烤、高壓蒸汽滅菌、濾過除菌、紫外線、γ射線、〔甲醛〕熏蒸消毒、化學(xué)消毒劑、抗生素消毒滅菌。36.第三十六頁，共四十八頁。一、無菌技術(shù)1.各種滅菌方法及其適用范圍A濕熱滅菌法〔高壓蒸汽滅菌法、常壓蒸汽滅菌法、間歇滅菌法〕B干熱滅菌法〔火焰滅菌、干熱滅菌〕C電離輻射滅菌D紫外線殺菌E過濾除菌F化學(xué)殺菌G熏蒸滅菌法第二節(jié)根本技術(shù)37.第三十七頁，共四十八頁。2.無菌操作過程A清洗玻璃器皿的清洗實(shí)驗(yàn)材料的清洗B滅菌※培養(yǎng)材料的滅菌以藥劑滅菌法為主主要考慮：藥劑的滅菌效果、材料對(duì)藥劑的耐受力38.第三十八頁，共四十八頁。39.第三十九頁，共四十八頁。40.第四十頁，共四十八頁。※培養(yǎng)基滅菌高壓蒸汽滅菌過濾滅菌C接種經(jīng)過外表滅菌的材料，按不同的要求，經(jīng)過剪切、整理后，移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)的過程?！臃N室〔無菌操作室〕的滅菌※接種臺(tái)的滅菌※工作人員本卷須知41.第四十一頁，共四十八頁。3.實(shí)驗(yàn)室生物平安概念：指那些用以防止發(fā)生病原體或毒素?zé)o意中暴露及意外釋放的保護(hù)原那么、技術(shù)及實(shí)踐。傳染性微生物的危險(xiǎn)程度分4級(jí)——1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)、4級(jí)生物平安水平〔BSL〕相應(yīng)的也分為4級(jí)——BSL1〔根底實(shí)驗(yàn)室〕BSL2〔根底實(shí)驗(yàn)室〕BSL3〔防護(hù)實(shí)驗(yàn)室〕BSL4〔最高防護(hù)實(shí)驗(yàn)室〕42.第四十二頁，共四十八頁。二、細(xì)胞制備：機(jī)械分散法淋巴細(xì)胞別離：肝素抗凝血?jiǎng)?Hanks稀釋→分級(jí)別離→吸取→加其它培養(yǎng)液?jiǎn)渭?xì)胞懸胰蛋白酶細(xì)胞T、B細(xì)胞別離：尼龍棉柱過濾B細(xì)胞粘附液的制備酶消化法別離法T細(xì)胞過濾膠原酶CD4/CD8細(xì)胞別離：SephadaG-10柱或流式細(xì)胞分選儀螯合劑分散法單核/巨噬細(xì)胞別離淋巴細(xì)胞不粘，〔與玻面粘附〕單核/巨噬細(xì)胞粘附43.第四十三頁，共四十八頁。三、細(xì)胞計(jì)數(shù)法：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或器細(xì)胞分裝；四、細(xì)胞培養(yǎng)與傳代五、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查法：一般形態(tài)觀察●利用倒置顯普通染色觀察〔Giemsa染核〕微鏡觀察法特殊染色法：DNA〔Feulgen反響〕、DNA-RNA〔甲基-派洛寧〕、糖〔PAS〕、脂〔蘇丹紅II〕、線粒體〔詹納斯綠B液〕、葉綠體〔吖啶橙〕

44.第四十四頁，共四十八頁。吖啶橙：DNA、RNA●利用熒光顯微鏡觀察法掃描免疫熒光染色透射●利用電子顯微鏡觀察法：掃描或透射。六、無血清培養(yǎng)液的設(shè)計(jì)和合成七、細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇與運(yùn)輸八、細(xì)胞培養(yǎng)的放大試驗(yàn)〔生產(chǎn)〕九、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)污染的檢測(cè)、排除45.第四十五頁，共四十八頁。本章內(nèi)容到此結(jié)束謝謝大家歡送研討46.第四十六頁，共四十八頁?！緩?fù)習(xí)思考題】常用的滅菌方法有哪幾類？概述它們的原理。判斷題：已經(jīng)洗凈的儀器可以用布或紙擦干。無菌操作一般要求在酒精燈火焰前10-20cm范圍內(nèi)進(jìn)行。過濾除菌的適用對(duì)象是易被高溫破壞的材料如抗生素、糖、激素等試劑。47.第四十七頁，共四十八頁。內(nèi)容總結(jié)第三章。玻璃器皿的清洗：浸泡→刷洗→浸酸→沖洗。橡膠用品的處理