抗體工程制藥一.概述

抗體(工程)制藥—生物技術(shù)制藥領(lǐng)域的重要組成部分免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗體：能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白?？贵w的產(chǎn)生過程：機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原物質(zhì)刺激后，淋巴細(xì)胞被激活，增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。免疫球蛋白()分子量范圍從到道爾頓。分五類：在血清中含量最高，達(dá),是抗感染的主要抗體;是五類免疫球蛋白中分子量最大的，為五聚體,是對一個(gè)抗原作出反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的第一個(gè)抗體；在黏膜表面、乳腺、淚腺形成，主要參與局部的免疫反應(yīng);在血清中含量很低;在血清含量最少。免疫球蛋白動(dòng)物血清中產(chǎn)生抗體的時(shí)間示意圖抗原刺激的第一至三周，生成；抗原再刺激后，Ｇ將取代抗體研究的發(fā)展階段：①以年發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表,用抗原免疫動(dòng)物來獲得多克隆抗體。②以年創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體()為代表。③以年,創(chuàng)建了噬菌體抗體庫()技術(shù),以基因工程方法制備抗體為代表。在此基礎(chǔ)上發(fā)展成抗體工程。多克隆抗體:一種抗原具有多個(gè)抗原決定簇,每個(gè)抗原決定簇都能刺激一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生一種抗體。這樣所獲得的免疫血清是多種抗體的混和物。單克隆抗體():由一個(gè)抗原決定簇刺激的、單一的細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合增殖后所產(chǎn)生的、高度均一的抗體。1234多克隆抗體和單克隆抗體PuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234BcellPuresingleAbAfterimmunization,themousespleencontainsBcellsproducingspecificantibodies.EachBcellproducesonlyonekindofantibody,whichbindstoitsspecificantigen.ConventionalantiserumisthemixtureofallantibodiesproducedbyBcellsfromspleen.IfasingleBcellwaspickedupandcultured,thenitwillproduceonlyonekindofantibody.ButBcellcannotsurvivewellintheculture.Eachhybridomalinecanproducepuresingleantibody,calledmonoclonalantibody.IfBcellisfusedwithmyeloma,thefusedcellmightbeculturedandproduceantibody.AdaptedfromMilstein(1980)ScientificAmerican,Oct.p.581234mmmm12341234MonoclonalantibodiesCellfusionSpleencells+MyelomaxAntiseumAntigenImmunizationAmixtureofallAb1234BALB/c12341234Bcell（，單克隆抗體）：將在體外不能長期傳代的抗體產(chǎn)生細(xì)胞（如小鼠的免疫脾細(xì)胞）與在體外能迅速增殖并帶有抗藥標(biāo)記的骨髓瘤細(xì)胞（如小鼠的或）在聚乙二醇（）作用下融合，然后利用抗藥性標(biāo)記和經(jīng)稀釋法選出單個(gè)產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞，再用血清學(xué)方法證實(shí)其與抗原結(jié)合的特異性和親和力。這樣的雜交瘤細(xì)胞能長期傳代同時(shí)分泌針對單一抗原上單一抗原表位的抗體，稱為（第二代抗體）。二.單克隆抗體的制備二.單克隆抗體的制備單克隆抗體制備過程圖解單克隆抗體制備過程圖解一.抗原與動(dòng)物免疫.抗原選擇—完整細(xì)胞(腫瘤細(xì)胞)；可溶性蛋白質(zhì)或多肽;.免疫動(dòng)物—小鼠(,鼠齡周)或大鼠();

.常用的骨髓瘤細(xì)胞系—，細(xì)胞，都是次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶()的缺乏株。.免疫方法:體外免疫法；體內(nèi)免疫法體內(nèi)免疫法顆粒性抗原(如細(xì)菌、細(xì)胞)的免疫原性強(qiáng),可不加佐劑,可溶性抗原則按每只小鼠抗原與弗氏完全佐劑等量混合后注入腹腔內(nèi).弗氏完全佐劑（’）:由礦物油（如降脂烷或液體石蠟等）、乳化劑和滅活的分枝桿菌組成的乳化佐劑。弗氏不完全佐劑不含分枝桿菌免疫佐劑（)（）定義：先于抗原或同時(shí)與抗原混合注射機(jī)體可增強(qiáng)抗原的免疫原性的物質(zhì)。（）應(yīng)用①弱免疫原性物質(zhì)；②免疫原劑量不足。（）佐劑種類)油性乳劑—弗氏佐劑（）)無機(jī)化合物)微生物及其產(chǎn)物)脂質(zhì)體)細(xì)胞因子二.細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng).細(xì)胞融合的基本方法(促融)脾細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞(“永久”細(xì)胞)(×)(×)聚乙二醇()℃融合細(xì)胞（雜交瘤細(xì)胞）用作細(xì)胞融合劑的聚乙二醇()一般選用，常用濃度為％，～?？杉尤攵谆鶃嗧?)。年月神舟號飛船搭載淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞升空進(jìn)行細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞進(jìn)行融合時(shí)，培養(yǎng)液中只有部分細(xì)胞融合成雜種細(xì)胞，還有大量未融合的雙親細(xì)胞。這就需要選擇分離純化雜種細(xì)胞。為此要?jiǎng)?chuàng)造一種只讓雜種細(xì)胞生長繁殖而親本細(xì)胞死亡的環(huán)境。這就要利用雜種細(xì)胞和親本細(xì)胞對生長條件的要求和代謝的差異來進(jìn)行選擇。其中最常用的是選擇系統(tǒng)。、雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)常用的選擇培養(yǎng)基為培養(yǎng)基。次黃嘌呤()、氨基喋呤(能阻斷合成)、胸腺嘧啶()。脾細(xì)胞具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(),因此脾瘤融合的雜交瘤細(xì)胞可利用酶,用次黃嘌呤()和胸腺嘧啶()合成,使雜交瘤細(xì)胞得以生長。選擇培養(yǎng)機(jī)制主要途徑糖氨基酸氨甲喋呤（）次黃嘌呤()核苷酸

核苷酸前體(胸苷激酶)胸腺嘧啶核苷()培養(yǎng)基：為次黃嘌呤，是的底物，為合成提供原料（核苷酸旁路合成原料）可阻斷正常的合成（嘌呤及合成受抑制）在胸苷激酶（）的作用下生成胸腺嘧啶核苷酸，為合成提供原料含有飼養(yǎng)細(xì)胞的孔板內(nèi)懸浮培養(yǎng)，天換液一次(的培養(yǎng)液天內(nèi)),第天改用培養(yǎng)液（對照阻的骨髓瘤細(xì)胞已死亡）天以后用普通的完全培養(yǎng)液。常用的飼養(yǎng)細(xì)胞有小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞等。天可對所有克隆生長孔的培養(yǎng)上清進(jìn)行抗體檢測,篩選出產(chǎn)生抗體的陽性克隆.培養(yǎng)板細(xì)胞雜交瘤的技術(shù)流程三.篩選陽性克隆與克隆化.篩選方法：免疫酶技術(shù)放射免疫技術(shù)免疫熒光技術(shù)（）免疫酶技術(shù)原理：將抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)。酶與抗體或抗原結(jié)合后，既不改變抗體或抗原的免疫學(xué)反應(yīng)的特異性，也不影響酶本身的酶學(xué)活性，在相應(yīng)而合適的作用底物參與下，使基質(zhì)水解而呈色，或使供氫體由無色的還原型變?yōu)橛猩难趸?，從而表明某種抗原或抗體的存在。（）免疫熒光技術(shù)原理：將抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性與顯微示蹤的精確性相結(jié)合。以熒光素作為標(biāo)記物，與已知的抗體（或抗原）結(jié)合，然后將熒光素標(biāo)記的抗體或抗原作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用于檢測和鑒定抗原或抗體。

免疫熒光技術(shù)用于細(xì)胞抗原的抗體檢測,特別是檢測患者活檢組織標(biāo)本。（）放射免疫技術(shù)原理：將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，以放射性同位素作為示蹤物的標(biāo)記免疫測定方法。放射免疫測定原理示意圖.克隆化為提高篩選出來的陽性克隆的穩(wěn)定性，將單個(gè)細(xì)胞通過無性繁殖而獲得細(xì)胞集團(tuán)的整個(gè)培養(yǎng)過程。有限稀釋法：通過一系列稀釋，使每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔平均只含一個(gè)細(xì)胞，而分離細(xì)胞軟瓊脂法：將雜交瘤細(xì)胞懸液分散在半固體營養(yǎng)瓊脂糖上，使呈單個(gè)細(xì)胞定位生長繁殖，以達(dá)到克隆化的目的。四.雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定.雜交瘤細(xì)胞借助染色體分析鑒定多數(shù)為端著絲粒染色體,染色體數(shù)目接近兩種親本細(xì)胞染色體之和。.抗體鑒定類和亞類鑒定：免疫擴(kuò)散或法親和力鑒定抗體類別鑒定（類和亞類鑒定）抗體分子因有大小、帶電量、溶解度及其與抗原的作用不同，可分為不同的類和亞類。（、、、）（、）（無）（無）（無）

）免疫擴(kuò)散指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在液相中特異結(jié)合后，形成的免疫復(fù)合物受電解質(zhì)影響出現(xiàn)的沉淀線現(xiàn)象。

單向免疫擴(kuò)散

雙向免疫擴(kuò)散（）酶聯(lián)免疫吸附法()原理：先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，再將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離的未結(jié)合成分，最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度()值的大小進(jìn)行定性或定量分析的方法。五.單克隆抗體的工業(yè)化生產(chǎn)單克隆抗體的生產(chǎn)包括細(xì)胞培養(yǎng)、提純和制劑等工藝過程。.雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)生物反應(yīng)器：氣升式發(fā)酵罐，中空纖維培養(yǎng)罐，微囊發(fā)酵罐培養(yǎng)基：牛淋巴液，血清.單克隆抗體的大量制備的方法體外培養(yǎng)法(收獲抗體)酶標(biāo)板上培養(yǎng)微載體懸浮培養(yǎng)（固體顆粒用等材料）。動(dòng)物體內(nèi)誘生法—用降脂烷液體石蠟注入腹腔,然后注射×雜交瘤細(xì)胞，再……收獲抗體。支原體污染?。?！.單克隆抗體()的純化純化單克隆抗體流程(大鼠)單抗純化方法:超濾法鹽析法離子交換法凝膠過濾法法等三.單克隆抗體藥物的現(xiàn)狀多種抗體類藥物在臨床試驗(yàn)中－已進(jìn)入三期臨床－已通過臨床期試驗(yàn)美國市場上有種治療用的抗體藥物抗體藥物的銷售額－年由億美元增長到億美元－年抗體類藥物總銷售額達(dá)到億美元抗體藥物市場銷售額 全球有超過家上市或未上市公司正在研發(fā)用于臨床診斷和治療的單克隆抗體正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的抗體公司（家）：

()()

當(dāng)前美國治療性抗體市場(,) $,鼠抗抗體,防止血小板凝集凝血性心血管疾病,不穩(wěn)定型心絞痛() $,嵌合抗抗體非霍奇金氏淋巴瘤() $人源化抗抗體過量表達(dá)乳腺癌() $人源化抗糖蛋白抗體小兒感染當(dāng)前美國治療性抗體市場() $嵌合抗α抗體局限性腸炎，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(,) $,人源化,抗(α)抗體移植排斥()$鼠抗()抗體移植排斥() $嵌合抗()抗體移植排斥……抗體類型商品名應(yīng)用鼠源單克隆抗體Orthoclone器官移植排斥嵌合抗體Peopro冠狀動(dòng)脈成形術(shù)，心絞痛嵌合抗體RituxanB細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤嵌合抗體Simulect器官移植排斥嵌合抗體Remicade回腸炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎人源化抗體Zenapax器官移植排斥人源化抗體Synagis嬰兒呼吸道合胞病毒人源化抗體Herceptin乳腺癌人源化抗體Campath慢性淋巴細(xì)胞白血病人源化抗體偶聯(lián)物Mylotarg急性復(fù)發(fā)骨髓白血病鼠源抗體放射性偶聯(lián)物ZevalinB細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤中國抗體研究現(xiàn)狀單抗診斷劑：針對乙型肝炎表面抗原流行性出血熱抗人淋巴細(xì)胞及亞群風(fēng)疹病毒黑熱病抗人絨毛膜促性腺激素霍亂抗人白細(xì)胞相關(guān)抗原抗人免疫球蛋白的系列脊髓灰質(zhì)炎病毒呼吸道合胞病毒登革熱肺癌單抗片段診斷劑進(jìn)入期臨床。單抗治療劑：碘[]肝癌單抗片段注射液，年已完成Ⅰ期臨床成為低毒、安全、有效的肝癌靶向治療藥物。華神利卡汀支乙腦單抗治療劑進(jìn)入Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期臨床試驗(yàn)，腎綜合癥出血熱單抗進(jìn)入Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期臨床。中國人源基因工程抗體研究獲重大成果中國預(yù)防醫(yī)科院病毒所青年科學(xué)家梁米芳研究員率領(lǐng)的課題組，在“治療用人源基因工程抗體基礎(chǔ)與應(yīng)用研究”中取得多項(xiàng)重要成果。在世界上首先研制成功抗坦病毒、抗甲肝病毒、抗狂犬病毒人源基因工程抗體，并獲得擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的全抗體表達(dá)載體系統(tǒng)。與血源制品比較，此抗體具有抗體含量高、無免疫源性、無污染源、可連續(xù)規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)勢，是一類新興的特異性抗病毒感染的生物工程藥物。此成果為我國防治病毒性疾病探索出一條新的途經(jīng)，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。原液保存細(xì)菌疫苗工藝流程示意圖菌種篩選種子批的建立及檢定菌種接種原液合并半成品配置殺菌原液收獲擴(kuò)大培養(yǎng)分裝包裝檢定中國疫苗研究：病毒原液保存病毒疫苗工藝流程毒種篩選種子批的建立及檢定毒種接種培養(yǎng)細(xì)胞原液合并半成品配置病毒滅活病毒的收獲過濾擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)分裝包裝檢定原代細(xì)胞的制備或傳代細(xì)胞復(fù)蘇減毒活疫苗抗體的治療應(yīng)用抗腫瘤抗感染抗器官移植排斥反應(yīng)治療自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病抗體藥物迅速發(fā)展的主要障礙人體免疫系統(tǒng)對鼠源蛋白的排斥反應(yīng)抗體人源化是解決問題的唯一途徑四.單克隆抗體人源化的改進(jìn)鼠抗體人源化（人鼠嵌合、改型抗體）小分子抗體（、單鏈、單域、超變區(qū)多肽）基因工程抗體（雙特異、免疫黏連素、催化抗體）人源抗體（噬菌體抗體庫、轉(zhuǎn)基因小鼠）人人抗體

基因工程抗體研究內(nèi)容：①抗體人源化：鼠單克隆抗體的人源化(嵌合抗體、改型抗體)小分子抗體單價(jià)(、、單域抗體、超變區(qū)多肽)多價(jià)（,,）特殊類型抗體(雙特異性抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體、抗原化抗體、免疫脂質(zhì)體)抗體融合蛋白（免疫粘連素、免疫毒素、催化抗體）②構(gòu)建抗體庫從中篩選新的單抗，即噬菌體抗體。人一鼠嵌合抗體()人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。第一代人鼠嵌合抗體構(gòu)建過程：將鼠源單抗的可變區(qū)基因克隆出來，連到包含有人抗體恒定區(qū)基因及表達(dá)所需的其它元件(如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記等)的表達(dá)載體上，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞、細(xì)胞)中表達(dá)?？寺∈髥慰沟目勺儏^(qū)基因，可從基因組文庫中分離，也可用技術(shù)分離。人抗體恒定區(qū)可根據(jù)需要選擇，不同的恒定區(qū)會(huì)帶給嵌合抗體不同功能。為避免人抗體的恒定區(qū)產(chǎn)生不需要的副作用，可通過點(diǎn)突變來修飾調(diào)整其效應(yīng)。人一鼠嵌合抗體與鼠單抗相比，免疫原性大大降低，利于在人體內(nèi)應(yīng)用，所以目前已制備出上百種抗各種抗原(包括腫瘤相關(guān)抗原)的嵌合抗體。嵌合抗體獨(dú)特的抗體親和力保持得很好，但因鼠單抗可變區(qū)的存在，應(yīng)用時(shí)仍有較強(qiáng)的人抗鼠抗體反應(yīng)()反應(yīng)。在嵌合抗體的基礎(chǔ)上進(jìn)一步將鼠可變區(qū)中相對保守的()替換成人的，保留與抗原結(jié)合的(互補(bǔ)決定區(qū))部位(即移植)鼠單抗可變區(qū)的人源化－改型抗體第二代移植即把鼠抗體的序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱移植抗體或改型抗體。改型抗體的發(fā)展早期的改型抗體：簡單的移植，通過點(diǎn)突變進(jìn)行“微調(diào)”即更換某個(gè)位點(diǎn)上的氨基酸第二代改型抗體：①應(yīng)用了人抗體基因庫；②引進(jìn)計(jì)算機(jī)技術(shù)模擬抗體分子的立體結(jié)構(gòu)；③使用了鼠人嵌合。其目的是獲得具有高親和力的治療性抗體抗體類型商品名應(yīng)用鼠源單克隆抗體Orthoclone器官移植排斥嵌合抗體Peopro冠狀動(dòng)脈成形術(shù)，心絞痛嵌合抗體RituxanB細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤嵌合抗體Simulect器官移植排斥嵌合抗體Remicade回腸炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎人源化抗體Zenapax器官移植排斥人源化抗體Synagis嬰兒呼吸道合胞病毒人源化抗體Herceptin乳腺癌人源化抗體Campath慢性淋巴細(xì)胞白血病人源化抗體偶聯(lián)物Mylotarg急性復(fù)發(fā)骨髓白血病鼠源抗體放射性偶聯(lián)物ZevalinB細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤單域抗體最小識別單位小分子抗體由完整的輕鏈和組成，大小為完整分子的。把與細(xì)菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下進(jìn)入周質(zhì)腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。()、的大小約為全分子的。()或

連接肽（個(gè)氨基酸）單鏈抗體的構(gòu)建在已知親本序列時(shí)可用完全人工合成法;在具備親本單抗可變區(qū)的克隆時(shí)，可用定點(diǎn)突變法在其兩端造成適當(dāng)?shù)膬?nèi)切酶位點(diǎn)，與人工合成的連接肽編碼序列連接，組裝到表達(dá)載體中;如果從雜交瘤細(xì)胞系構(gòu)建單鏈抗體，可用方法擴(kuò)增可變區(qū)基因，再組裝到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體上。單鏈抗體最常用的表達(dá)體系是大腸桿菌，有種方式:一是表達(dá)為包涵或非包涵體的不溶蛋白。產(chǎn)量高，可達(dá)細(xì)菌蛋白總量的，但需進(jìn)行變性復(fù)性，使其形成正確的立體結(jié)構(gòu)，恢復(fù)抗體活性;二是分泌型表達(dá)，將細(xì)菌的信號肽序列與單鏈抗體的氨基端相連，單鏈抗體分子就可分泌到質(zhì)周腔和細(xì)菌體外，進(jìn)行折疊后成為有活性的分子。但產(chǎn)量不及前者，一般實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下每升細(xì)菌的產(chǎn)量僅在數(shù)毫克左右。即為，約為完整分子的。它只由一個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，故稱單域抗體。單域抗體盡管親和力有所降低，但仍保持著原單抗的特異性。()單域抗體約為完整分子的大小，一般由一個(gè)構(gòu)成，它也保持著抗體的特異性。()最小識別單位雙特異抗體和多價(jià)抗體

雙鏈抗體（）一詞最早由等于年提出。乃是一種小分子的雙價(jià)雙特異性抗體片段。

雙特異性抗體()是指能同時(shí)識別種抗原的抗體。種為對應(yīng)腫瘤相關(guān)抗原。另種為對應(yīng)效應(yīng)成分。即能結(jié)合靶腫瘤細(xì)胞又能結(jié)合高細(xì)胞毒性的效應(yīng)細(xì)胞,將效應(yīng)細(xì)胞富集在腫瘤周圍,而且可以模擬天然配體的作用,與細(xì)胞表面引發(fā)分子結(jié)合,激活效應(yīng)細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的殺傷和裂解?？贵w的一部分被非抗體序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性,稱之為抗體融合蛋白。根據(jù)構(gòu)建方式，抗體融合蛋白主要分兩種形式：融合蛋白（）抗原結(jié)合融合蛋白（）抗體融合蛋白融合蛋白由抗體的段與某些具有特定功能的蛋白結(jié)構(gòu)域融合而成。如免疫粘附素（）就是由抗體的段與個(gè)分子的同源區(qū)重組而成?？乖Y(jié)合融合蛋白由具有抗原結(jié)合功能的抗體結(jié)構(gòu)與其他功能性蛋白融合構(gòu)成。如免疫毒素，抗體部分主要包括嵌合抗體、單鏈抗體形式?？贵w融合蛋白一、免疫粘附素定義將人抗體恒定區(qū)(主要是段)端連接于人細(xì)胞表面的受體分子或細(xì)胞粘附分子上，在真核細(xì)胞中表達(dá)出正確折疊的融合抗體蛋白分子，這種分子可同時(shí)發(fā)揮抗體的效應(yīng)功能及其它相應(yīng)的效應(yīng)功能，這種分子被稱為免疫粘附素()或新效能抗體。二、免疫毒素免疫毒素又稱生物導(dǎo)彈，是由導(dǎo)向性的載體分子與具有毒性的彈頭蛋白交聯(lián)而制成，屬于導(dǎo)向藥物的一種。三、催化抗體天然抗體體現(xiàn)的是結(jié)合活性，而酶發(fā)揮的是催化活性。如何把這兩者的特點(diǎn)集為一體，從而使抗體也能成為具有催化活性的物質(zhì)，同時(shí)也能使酶與有關(guān)的抗原結(jié)合。即催化抗體()催化抗體的構(gòu)建主要是把具有催化作用的基團(tuán)與抗體分子進(jìn)行重組。噬菌體抗體噬菌體抗體庫()技術(shù)定義：通過將全套人抗體重鏈和輕鏈區(qū)基因克隆出來，并在噬菌體表面表達(dá)、分泌，經(jīng)篩選后獲得特異性抗體。噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點(diǎn):外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白端將基因組合文庫插入噬菌體編碼膜蛋白的基因或的先導(dǎo)系列的緊靠下游隨機(jī)克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫從免疫或未被免疫的細(xì)胞中擴(kuò)增抗體全套基因片段用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個(gè)循環(huán)直接、方便、簡捷、高效地篩選出表達(dá)特異性好、親和力強(qiáng)的抗體噬菌體庫。使翻譯出的抗體分泌到細(xì)菌的周質(zhì)腔內(nèi)，形成游離的抗體片段，經(jīng)過純化即可獲得目的抗體。篩選到的噬菌體再將基因或切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來;可繞過雜交瘤技術(shù)，不需要復(fù)雜的基因工程技術(shù);抗體基因篩選的范圍廣;技術(shù)穩(wěn)定、可靠、生產(chǎn)周期短;可規(guī)?；a(chǎn);適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。不經(jīng)過細(xì)胞融合及動(dòng)物免疫等步驟噬菌體抗體庫的分類（一）按抗體基因的性質(zhì)分.文庫.文庫（二）按抗體基因的來源分．天然抗體庫()．免疫抗體庫．半合成抗體庫．全合成抗體庫用小鼠制備人單抗小鼠移植入人淋巴細(xì)胞（人鼠嵌合模型）抗原免疫雜交瘤技術(shù)基因工程人單抗人抗體鼠—將小鼠基因滅活，然后轉(zhuǎn)入人基因，生產(chǎn)出人單抗遺傳工程鼠基因工程抗體真核細(xì)胞高效表達(dá)流程圖單抗研發(fā)的演變歷程鼠單抗鼠源鼠人崁合單抗(人源),人源化單抗(人源),,,人源…抗體在體外人源化存在的問題操作過程復(fù)雜需付出昂貴的代價(jià)抗體的親和力降低抗體不是人體免疫系統(tǒng)天然產(chǎn)生異源抗體與免疫系統(tǒng)的配合最理想的單克隆抗體人源人類免疫系統(tǒng)自然產(chǎn)生全人抗體的理論基礎(chǔ)癌癥細(xì)胞、病毒、細(xì)菌對人機(jī)體而言均為異己物人體不斷受異己物攻擊，但免疫系統(tǒng)通常有清除能力免疫系統(tǒng)通過體液免疫和細(xì)胞免疫對異己物做出反應(yīng)體液免疫就是針對異己物天然地產(chǎn)生抗體全人抗體面臨的關(guān)鍵問題持續(xù)分泌抗體的人細(xì)胞抗體分泌細(xì)胞的保持年來的全人抗體的嘗試鼠骨髓瘤不適合與人細(xì)胞融合穩(wěn)定性差抗體產(chǎn)量低非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒()保存抗體分泌細(xì)胞細(xì)胞株不穩(wěn)定抗體的產(chǎn)量低不能特異性地保存抗體分泌細(xì)胞很難獲得人類骨髓瘤細(xì)胞株全人抗體技術(shù)的最新突破成功建立人骨髓瘤細(xì)胞系，人源抗體的研究進(jìn)入新的里程用途：能穩(wěn)定的保持人細(xì)胞分泌抗體的能力發(fā)明人：英國劍橋大