動(dòng)物細(xì)胞工程分值分布條四、考試內(nèi)容及分值第一章緒論（共2分）第二章動(dòng)物細(xì)胞工程基礎(chǔ)（共5分）1.細(xì)胞核一一精子頭部的主要部分2.高爾基體——頭部的頂體3.中心粒一一精子的頸部4.線粒體——線粒體髓鞘，精子尾部中段5.細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)一一原生質(zhì)滴哺乳動(dòng)物精子主要由頭部、頸部和尾部3部分組成卵子發(fā)生場(chǎng)所：卵巢第三章動(dòng)物細(xì)胞工程研究方法（共4分）測(cè)定細(xì)胞大小，細(xì)胞計(jì)數(shù)，利用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，電子顯微鏡觀察亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞膜的滲透性，細(xì)胞內(nèi)氧化還原酶的原位顯示2.免疫組織化學(xué)技術(shù)（1分）用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門技術(shù)4.梯度離心分離技術(shù)（1分）利用顆粒大小的不同：差速離心法（用于分離大小、形狀顯著不同的組分，根據(jù)顆粒沉降速度不同得以分離),速度區(qū)帶離心法（用于分離密度相近而大小不一的組分）利用顆粒密度的不同：等密度離心法（按細(xì)胞組分浮力密度不同進(jìn)行分離）第四章動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（共25分）1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的相關(guān)概念（5分）理環(huán)境，在無菌、適溫和豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞或者組織生存、生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。主要有細(xì)胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)原代培養(yǎng)：從體內(nèi)取出組織或細(xì)胞接種培養(yǎng)到第一次傳代的操作過程傳代培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)增殖到一定密度時(shí)，將細(xì)胞重新懸浮，經(jīng)稀釋后接種到新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的過程稱為傳代培養(yǎng)細(xì)胞一代時(shí)間：指從細(xì)胞接種到下一次分離、懸浮再培養(yǎng)時(shí)的時(shí)間細(xì)胞株：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞稱為細(xì)胞株細(xì)胞轉(zhuǎn)化的檢測(cè)：軟瓊脂培養(yǎng)法，浸潤(rùn)性檢測(cè)法，異種動(dòng)物接種檢測(cè)法天然培養(yǎng)基（血清）優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限。成分復(fù)雜，影響實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，合成培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定。成本低。缺點(diǎn)：缺少某些成分，不能完全滿足細(xì)胞生長(zhǎng)需要。無血清培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加血清。胰蛋白酶溶液：主要作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解，使細(xì)胞相互離散抗生素液，消化細(xì)胞時(shí)，加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液，或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的繼續(xù)作用。液搭配使用可增強(qiáng)其消化效果3.動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)（7分）組織塊原代培養(yǎng)貼壁細(xì)胞原代培養(yǎng)單細(xì)胞分離細(xì)胞計(jì)數(shù)接種培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的傳代體外培養(yǎng)細(xì)胞的純化懸浮細(xì)胞的純化：密度梯度離心依據(jù)貼壁速度的純化：如巨噬細(xì)胞等。依據(jù)對(duì)消化酶的敏感性0.02%EDTA與胰酶4.動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)及培養(yǎng)結(jié)果檢測(cè)（8分）細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察光鏡：培養(yǎng)基顏色、澄清度、細(xì)胞形態(tài)電鏡：微絨毛、橋粒、細(xì)胞骨架、核等生長(zhǎng)與增殖特性檢測(cè)生長(zhǎng)曲線法細(xì)胞活力測(cè)定：MTT法細(xì)胞分裂指數(shù)法克隆形成率第五章動(dòng)物細(xì)胞融合與雜交（共15分）1.細(xì)胞融合的原理和方法（7分）細(xì)胞融合：白然或人為條件下，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞相互接觸，發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合形成融合細(xì)胞的現(xiàn)象病毒誘導(dǎo)法融合法①需培養(yǎng)大量病毒，若滅活不充分，可能感染操作者②融合率比較低，可重復(fù)性不夠高化學(xué)誘導(dǎo)融合法①容易制備和控制，活性穩(wěn)定，使用方便，融合能力強(qiáng)②有毒，易損傷細(xì)胞①融合頻率高，操作簡(jiǎn)便快捷，重復(fù)性強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞傷害?、谡医蛔冸妶?chǎng)對(duì)細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)間作用會(huì)損傷細(xì)胞③非特異性融合2.B淋巴雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單抗（8分）基本原理：正常的可產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞在融合劑的作用下產(chǎn)生融合，雜交的細(xì)胞在HAT選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到的為雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞既具有可分泌抗體的功能又可在體外大量增殖的能力單克隆抗體的大量生產(chǎn)體外法：使用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，從上清中獲取單體內(nèi)法：體內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞，制備腹水第六章動(dòng)物干細(xì)胞（共11分）1.干細(xì)胞相關(guān)概念及成體干細(xì)胞（3分）干細(xì)胞（Stemcell）是一類具有白我更新和分化潛能的細(xì)胞，能產(chǎn)生表型和基因型與白己完全相同的子細(xì)胞，并具有不同分化潛能。成體干細(xì)胞：骨髓造血干細(xì)胞HSC,間質(zhì)干細(xì)胞MSC,神經(jīng)干細(xì)胞NSC2.胚胎干細(xì)胞的分享、培養(yǎng)與定向分化（8分）1.培養(yǎng)體系的選擇和準(zhǔn)備2.胚胎采集常用飼養(yǎng)層細(xì)胞為成纖維細(xì)胞（如STO成纖維細(xì)胞系）、子宮內(nèi)皮細(xì)胚胎的來源：受精囊胚（包括單精注射胚）；孤雌激活胚；體細(xì)胞核高質(zhì)量囊胚的標(biāo)準(zhǔn)：囊胚腔充分?jǐn)U張；滋養(yǎng)層完整，呈連續(xù)單層狀態(tài)；胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的方法改變細(xì)胞的培養(yǎng)條件：改變細(xì)胞的培養(yǎng)條件是ES細(xì)胞定向分化導(dǎo)入外源性基因，使其分化為某一特定類型的細(xì)胞。體內(nèi)定向分化，使ES細(xì)胞多數(shù)分化為該組織特異性的細(xì)胞第七章動(dòng)物細(xì)胞冷凍與保存（5分）冷凍對(duì)細(xì)胞器的影響（p168）（2）線粒體：不能進(jìn)行正常的物質(zhì)代謝，得不到正常的能量供應(yīng)。（3）對(duì)酶的影響：酶失活2.不同細(xì)胞的冷凍保存方法（2分）生殖細(xì)胞的冷凍保存法,玻璃化冷凍法早期胚胎的保存與冷凍：常規(guī)慢速冷凍，玻璃化冷凍方法第^一章動(dòng)物生殖細(xì)胞工程（共15分）1.精子的獲取與分離及體外獲能處理（3分）采精方法一般假陰道法分離：離心分離法，電泳分離法，免疫學(xué)分離法，流式細(xì)胞儀分離法獲能：預(yù)先制備獲能液微滴（400ul）,取附睪尾精液注入獲能液微滴2.卵母細(xì)胞的獲取與成熟（3分）巢，顯微鏡下解剖針挑破卵泡，撿卵針撿卵。3.第一代試管動(dòng)物技術(shù)（3分）?4.第二代試管動(dòng)物技術(shù)（3分）顯微受精技術(shù)又稱為第二代試管嬰兒技術(shù)，它主要是為了解決由于雄性動(dòng)物精子活力不足或精子密度減少而無法穿越卵母細(xì)胞卵丘顆粒細(xì)胞層、透明帶及卵質(zhì)膜三重障礙而導(dǎo)致的不孕問題而產(chǎn)生的技術(shù)。5.受精卵的早期培養(yǎng)（3分）2.培養(yǎng)時(shí)間與胚胎發(fā)育：不同動(dòng)物不一。第十二章動(dòng)物胚胎細(xì)胞的早期操作（共18分）1.胚胎移植技術(shù)（8分）概念：借助一定的器械，從一頭優(yōu)良雌性動(dòng)物的輸卵管或子宮內(nèi)取出早期胚成為新個(gè)體。即借腹懷胎。2.胚胎分割技術(shù)（2分）運(yùn)用顯微操作系統(tǒng)將哺乳動(dòng)物附植前胚胎分成若干個(gè)具有繼續(xù)發(fā)育潛力部分的生物技術(shù)，運(yùn)用胚胎分割可獲得同卵率生后代。胚胎嵌合：把兩個(gè)或多個(gè)不同基因型的早期胚胎（細(xì)胞）聚集在一起形成復(fù)合胚胎，進(jìn)而發(fā)育為不同程度嵌合個(gè)體的過程。4.早期胚胎性別鑒定技術(shù)（2分）PCR擴(kuò)增法，囊胚抑制法,FISH熒光原位雜交，LAMP法通過顯微操作的方法