新型疫苗非特異性免疫：生物體在長(zhǎng)期種系發(fā)育和進(jìn)化中逐漸形成的一系列防衛(wèi)機(jī)制。特異性免疫：個(gè)體在生命過程中接受抗原刺激后主動(dòng)產(chǎn)生或被動(dòng)獲得的。免疫

隱性感染/患傳染病接種疫苗/類毒素通過胎盤/母乳接受抗體注射抗毒素/胎盤球蛋白→自然主動(dòng)免疫→人工主動(dòng)免疫→自然被動(dòng)免疫→人工被動(dòng)免疫1739年《醫(yī)宗年鑒》人痘接種法1796年英國(guó)年輕醫(yī)生EdwardJenner牛痘接種法1876年德國(guó)人RobertKock首次發(fā)明細(xì)菌分離培養(yǎng)法1877年法國(guó)LouisPasteur減毒疫苗：雞霍亂、炭疽1886年SalmonSmith滅活疫苗：加熱滅活豬霍亂桿菌1923年法國(guó)Ramon類毒素：甲醛解毒白喉、破傷風(fēng)類毒素1948年Enders病毒培養(yǎng)法

疫苗發(fā)展簡(jiǎn)史EdwardJennerLouisPasteur

采用加熱、甲醛等物理化學(xué)方法將病原微生物殺死制成。如乙型肝炎滅活苗、狂犬疫苗。特點(diǎn)：安全性好。需多次注射。但有時(shí)由于毒性的喪失，免疫原性也隨之喪失。死苗大多需要佐劑才能加強(qiáng)免疫效果。弱毒苗（活苗，live-attenuatedVaccine

）

滅活苗（死苗，deathvaccine

）

是由被弱化了毒性、或者變異的微生物組成，在機(jī)體內(nèi)只能限量生存而不致病。如卡介苗、天花疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗。

優(yōu)點(diǎn)：保護(hù)性效果好、不需佐劑、特別是可誘導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。一次免疫即可獲得長(zhǎng)久免疫力。

缺點(diǎn)：安全性有時(shí)難以確保，即“返祖現(xiàn)象”；不易保存；此外免疫功能底下者接種可導(dǎo)致發(fā)病。傳統(tǒng)疫苗死疫苗活疫苗制劑性狀弱毒或無毒的病原微生物殺死的病原微生物接種量及次數(shù)量大，2～3次量小，1次保存及有效期易保存，較穩(wěn)定有效期可達(dá)1年不易保存，4度數(shù)周失效免疫效果較差，維持?jǐn)?shù)月至1年較好，維持1～5年或更長(zhǎng)評(píng)價(jià)疫苗的三個(gè)重要指標(biāo)第一：安全第二：有效第三：價(jià)廉、實(shí)用、方便

概念：在分子水平上對(duì)微生物的致病本質(zhì)及免疫保護(hù)機(jī)理的分析研究為基礎(chǔ)，用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)。優(yōu)點(diǎn)：

?研究、生產(chǎn)及使用安全。

?生產(chǎn)、存儲(chǔ)及運(yùn)輸成本低。

?疫苗制備無失活過程。研究的重點(diǎn)領(lǐng)域：

?創(chuàng)造新疫苗：主要指用常規(guī)技術(shù)不能或難以解決的疫苗，如與感染有關(guān)的疫苗（肝炎）、腫瘤疫苗、避孕疫苗等。

?改造舊疫苗：主要針對(duì)一些效果或安全性較差、或成本較高的常規(guī)疫苗。

?發(fā)展多價(jià)疫苗：多價(jià)疫苗成本低、免疫程序簡(jiǎn)單，是疫苗研究的發(fā)展方向。

?研究治療性疫苗：如乙肝慢病毒感染治療疫苗、治療性腫瘤疫苗。新型疫苗

*基因（遺傳）工程疫苗

*亞單位疫苗*活載體疫苗*核酸疫苗基因缺失活疫苗蛋白工程疫苗遺傳重組疫苗合成肽疫苗微膠囊疫苗抗獨(dú)特型抗體疫苗新型疫苗的分類

用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物或

重組體制成的疫苗。

*天然病原體保護(hù)性抗原的獲得（傳統(tǒng)方法）：保護(hù)性單抗抗原定位親和層析純化蛋白氨基酸基因抗原雙相電泳質(zhì)譜分析氨基酸基因

*從DNA或cDNA文庫(kù)中篩選保護(hù)性抗原基因：免疫血清或保護(hù)性單抗陽性克隆株基因序列分析GeneBank中同源性比較表達(dá)產(chǎn)物免疫效果鑒定

*人工化學(xué)合成保護(hù)性基因

*PCR釣取

*索取一、基因工程疫苗（GeneEngineeringVaccine,GeneticallyEngineeringVacine）概念保護(hù)性抗原基因獲得常用方法

目的基因

重組載體

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)染

陽性重組菌

陽性重組細(xì)胞或病毒

鑒定

表達(dá)、純化載體

概念：將用基因工程方法表達(dá)的蛋白抗原純化后造成的疫苗。（疫苗中已除去了病原體中不能激發(fā)機(jī)體保護(hù)性免疫和對(duì)機(jī)體有害的部分，只保留了有效的免疫原成分）。

優(yōu)點(diǎn)：主要為安全性好、特異性強(qiáng)及可大量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：抗原性弱、需用佐劑、純化工藝復(fù)雜。

1.亞單位疫苗（GeneengineeringSubunitVaccine）乙肝亞單位疫苗

?細(xì)菌（大腸桿菌）系統(tǒng)：

典型的原核表達(dá)系統(tǒng)，具有遺傳背景清楚、操作相對(duì)簡(jiǎn)單、方法成熟、周期短、表達(dá)量高等特點(diǎn)。一般認(rèn)為具有翻譯后修飾功能較差及表達(dá)產(chǎn)物純化復(fù)雜的不足（主指致熱原的去除）。

?酵母表達(dá)系統(tǒng)：分類不是很明確，一般認(rèn)為介于原核和真核之間。具有一定的糖基化功能，表達(dá)量也比較高。

?昆蟲細(xì)胞（桿狀病毒）系統(tǒng)：屬低等真核表達(dá)系統(tǒng)，與高等真核系統(tǒng)相比缺乏兩種糖基化酶。?哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)：高級(jí)真核表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)蛋白的翻譯后修飾功能強(qiáng)，能保持蛋白的立體構(gòu)象。表達(dá)產(chǎn)量一般較低、成本也較高。?整體動(dòng)物：有人形象地比喻為“生物反應(yīng)器”、“動(dòng)物工廠”。?植物表達(dá)系統(tǒng)：安全性好，由于有細(xì)胞壁，方法學(xué)上有一定難度，技術(shù)上一旦有突破，估計(jì)很有前途。

系統(tǒng)遺傳背景清楚。操作相對(duì)簡(jiǎn)單、方法成熟、周期短。表達(dá)量高、成本較低。產(chǎn)物純化困難、蛋白翻譯后修飾功能相對(duì)差。

原核表達(dá)的特點(diǎn)真核表達(dá)的特點(diǎn)蛋白翻譯后修飾功能較強(qiáng)，能保持天然的立體構(gòu)型。表達(dá)量低，成本較高。操作相對(duì)復(fù)雜。Becloned酵母大發(fā)酵罐HBsAg蛋白vaccine第一個(gè)重組抗原疫苗HepatitisBvaccineHBsAg純化刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體Protectiveantibodies利用微生物做載體，將保護(hù)性抗原基因重組到微生物體中，使用能表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組微生物制成的疫苗。

特點(diǎn)：載體疫苗多為活疫苗。純化及生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、成本低?？稍隗w內(nèi)繁殖并產(chǎn)生保護(hù)性抗原等。接種方便（口服、劃痕、注射）。不需佐劑。真核載體允許插入的外源基因量大，有利于多價(jià)疫苗的研制。

2.載體疫苗VectoredVaccine不需佐劑就可刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。表達(dá)蛋白的翻譯后修飾功能強(qiáng)。允許插入的外源基因量大。病毒具有廣泛的宿主細(xì)胞。純化過程簡(jiǎn)便。對(duì)外界抵抗力強(qiáng)、易于保存和運(yùn)輸。痘苗病毒載體（Vacciniavirus）病毒DNA一般在染色體外存在，目前無病毒基因整合的證據(jù)。宿主細(xì)胞廣泛，病毒穩(wěn)定，生產(chǎn)、使用方便。可在呼吸道增殖，也可在消耗道增殖，具有制備口服疫苗的前景。腺病毒載體（Adenovirus）基因組的結(jié)構(gòu)與功能研究的比較清楚。是一種強(qiáng)免疫劑，免疫期長(zhǎng)，可制成口服和注射兩種疫苗。

目前存在問題：生長(zhǎng)緩慢?？ń槊缇_的減毒位點(diǎn)不清楚。細(xì)菌壁上有蠟質(zhì)存在而不利于基因操作。使用結(jié)核疫苗的國(guó)家對(duì)該疫苗的使用有影響。

卡介苗（Bacillus-Calmette-Guerin,BCG）可侵入淋巴系統(tǒng)，能更有效地激發(fā)免疫反應(yīng)（很多人類病原體是通過粘膜進(jìn)入體內(nèi)的，口服減毒沙門氏菌可刺激粘膜淋巴細(xì)胞分泌IgA形成一道免疫屏障）。減毒鼠傷寒桿菌(Poliovirus）可口服，使用方便易大規(guī)模接種。使用活載體疫苗注意事項(xiàng)抗菌素對(duì)細(xì)菌性活載體有影響免疫反彈免疫低下或免疫缺陷病DNA編碼致病性抗原質(zhì)粒RecombinantplasmidVaccinia啟動(dòng)子感染痘苗病毒組織培養(yǎng)細(xì)胞同源性重組篩選重組痘苗載體疫苗免疫表達(dá)基因產(chǎn)物—免疫原免疫反應(yīng)Attenuatedpoliovirus腺病毒減毒傷寒桿菌BCG減毒微生物

也稱DNA疫苗或基因疫苗，使用能夠表達(dá)抗原的基因本身，即核酸制成的疫苗。疫苗制劑的主要成分不是基因表達(dá)產(chǎn)物，而是核酸（DNA或RNA）。

特點(diǎn)：制備簡(jiǎn)單。穩(wěn)定性好易于保存和運(yùn)輸。在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)抗原蛋白、免疫效果持續(xù)。載體本身無免疫原性。誘導(dǎo)細(xì)胞免疫能力較強(qiáng)。不存在其它疫苗在機(jī)體免疫功能低下時(shí)不能使用的限制。3.核酸疫苗（NucleicAcidVaccine,GeneVaccine）Plasmidvaccine

常用的是pBR322或pUC質(zhì)粒為基本骨架。只含有菌源性復(fù)制起始點(diǎn)。穩(wěn)定性好，在大腸桿菌中有較高的拷貝數(shù)。具有能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)的強(qiáng)啟動(dòng)子。

核酸疫苗表達(dá)載體的選擇核酸疫苗有待解決的問題能否產(chǎn)生DNA抗體？外源基因在體內(nèi)的持續(xù)表達(dá)，能否引起免疫耐受、自身免疫或超敏反應(yīng)？外源基因能否與機(jī)體染色體整合導(dǎo)致癌變？DNA免疫效力低下問題。

使用分子生物學(xué)技術(shù)去除與毒力相關(guān)基因獲得的缺失突變株制成的活疫苗。

特點(diǎn)：突變性狀明確、穩(wěn)定。不易反祖。

4.基因缺失活疫苗（GeneDelectedLiveVaccine）5.蛋白工程疫苗（ProteinEngineeredVaccine）將抗原基因加以改造，使之發(fā)生突變、插入、缺失、構(gòu)型改變等，甚至進(jìn)行不同基因或部分結(jié)構(gòu)域的人工重組，以期達(dá)到增強(qiáng)其產(chǎn)物的免疫原性、擴(kuò)大反應(yīng)譜、去除有害作用或副反應(yīng)的疫苗。

使用遺傳重組方法獲得的重組微生物制成的疫苗。通常是將對(duì)人體無致病性的弱毒株與強(qiáng)毒株（野毒株）混合感染，弱毒株與強(qiáng)毒株間發(fā)生基因片段交換造成重組篩選出的疫苗株。

特點(diǎn)：含有強(qiáng)毒株強(qiáng)免疫原性基因片段。對(duì)人體不致病。二、遺傳重組疫苗（GeneticRecombinantVaccine）三、合成肽疫苗（SyntheticPeptideVaccine）用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽造成的疫苗。

特點(diǎn)：保護(hù)機(jī)理明確?？山M合不同免疫活性細(xì)胞識(shí)別位點(diǎn)或表位。純度高。工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低。也稱可控緩釋疫苗（ControlledSlowReleaseVaccine）：是指使用微膠囊技術(shù)將特定抗原包裹后制成的疫苗。

特點(diǎn)：穩(wěn)定性好。免疫原性強(qiáng)，可維持高抗體水平?？煽诜?。指使用與特定抗原免疫原性相近的抗抗體（Ab2）做抗原制成的疫苗，實(shí)際上是一種模擬抗原。

特點(diǎn)：不含傳染性物質(zhì),可大量制備?？梢詮浹a(bǔ)基因工程技術(shù)無能為力的碳水化合物的不足。四、微膠囊疫苗（Micro-capsulizedVaccine）五、抗獨(dú)特型抗體疫苗（Anti-iditypeVaccine）Jerne的免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說要點(diǎn)1.機(jī)體對(duì)抗原刺激的免疫應(yīng)答是由獨(dú)特型和抗獨(dú)特型來調(diào)節(jié)。2.Ab1上的獨(dú)特型可被自身另一些B細(xì)胞識(shí)別而產(chǎn)生抗獨(dú)特型抗體（抗抗體、Ab2），同理，可產(chǎn)生Ab3、Ab4……，構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)，抗原的刺激猶如“一石激起千層浪”。3.一小部分Ab2（Ab2β）可能具有原來抗原的“內(nèi)影象”，大部分為Ab2а（非內(nèi)影象）?？躬?dú)特型疫苗種類作者病毒

狂犬病毒糖蛋白R(shí)eagan等（1983）呼腸孤病毒Sharpe等（1984）HBsAgKennedy等（1984，1986）Ⅱ型脊髓灰質(zhì)炎病毒Uytdehaag等（1985）新城疫病毒血凝素Tanaka等（1986）HSV-1糖蛋白DLathey等（1986）腎綜合征出血熱病毒米力等（1993）細(xì)菌

肺炎球菌McNamara等（1984）大腸桿菌（K13）Stein等（1984）肺炎球菌Ward等（1987）原蟲

瘧原蟲Naussenzweig等（1980）非洲錐蟲Sack等（1982）血吸蟲Grzych等（1985）

多價(jià)疫苗活載體疫苗真核表達(dá)“雞尾酒”疫苗（表位疫苗）治療性疫苗

新型疫苗研究的發(fā)展趨勢(shì)預(yù)防接種禁忌癥

高熱

急性傳染病

嚴(yán)重心血管病

自身免疫病

免疫缺陷病。

I期臨床試驗(yàn)：副作用、免疫原性（20～25人）。（安全性）II期臨床試驗(yàn)：特異免疫反應(yīng)，包括體液與細(xì)胞免疫（有效性）（50～400人）。III期臨床試驗(yàn)：保護(hù)性數(shù)據(jù)（數(shù)百、數(shù)千甚至數(shù)萬人）。（保護(hù)性）

新疫苗進(jìn)行臨床試驗(yàn)的GCP規(guī)范年齡①→疫苗↓出生1

月齡2

月齡3

月齡4

月齡5

月齡6

月齡8

月齡1

歲1.5~2

歲3

歲4

歲6

歲7

歲卡介苗基免

脊髓灰質(zhì)炎活疫苗②

基免基免基免

加強(qiáng)

加強(qiáng)

百白破混合制劑②

基免基免基免

加強(qiáng)

加強(qiáng)③麻疹活疫苗

基免

加強(qiáng)

乙肝疫苗基免④基免

基免

風(fēng)疹疫苗

初免

乙腦減毒活疫苗⑤

初免加強(qiáng)⑦

加強(qiáng)

初次免疫應(yīng)答：潛伏期長(zhǎng)，抗體多為IgM，效價(jià)低，維持時(shí)間短。再次免疫應(yīng)答