血清甲胎蛋白(AFP)定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)文件編號(hào):XXX生效日期：共頁(yè)第頁(yè)1.目的規(guī)范操作流程，保證血清甲胎蛋白(AFP)定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。2.原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18min完成。2．1·第1步孵育：10μl標(biāo)本、生物素化的單克隆AFP特異抗體和釕(Ru)標(biāo)記的單克隆AFP特異抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。2．2·第2步孵育：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果由機(jī)器自動(dòng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。此曲線由儀器通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標(biāo)準(zhǔn)曲線而得。3.標(biāo)本要求3．1．1血清標(biāo)本采集用標(biāo)準(zhǔn)樣本試管或含分離膠的試管。標(biāo)本在2~8℃可穩(wěn)定7天，－20℃可穩(wěn)定3個(gè)月。含沉淀的標(biāo)本使用前需離心。心(大約15000g，10min或2000~3500r／min，5~10min)澄清，方可進(jìn)行檢測(cè)。3．3·患者準(zhǔn)備的一般要求：患者在采血前24h內(nèi)應(yīng)避免運(yùn)動(dòng)和飲酒，不宜改變飲食習(xí)慣和睡眠習(xí)慣。一般主張?jiān)诮?2h后空腹取血，門(mén)診患者提倡靜坐15min后再采血。4.試劑與儀器4．2·試劑使用：試劑盒中的試劑是一個(gè)整體，打開(kāi)后可立即使用，不能被分開(kāi)。正確操作需要的所有信息可通過(guò)相應(yīng)的試劑條碼讀取。素結(jié)合能力：470ng生物素／mg粒子。含防腐劑。4．3．3R2：Ru(bpy)32＋標(biāo)記的抗AFP單克隆抗體(黑色瓶蓋)，1瓶，10ml。濃度4．4·其他材料：AFP定標(biāo)液(CalSet)、腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品(PreciControlTumorMarker)1和2、分析杯和Elecsys分析吸頭(移液管吸頭加樣槍頭)、通用稀釋液、ProCell系統(tǒng)緩沖液、CleanCell檢測(cè)池洗液、SysWash(附加洗液)、SysClean系統(tǒng)清洗、ProCellM系統(tǒng)緩沖液、ProbeWashM清洗液、廢物袋。4．5．1存放在2~8℃。為了確保使用前自動(dòng)混勻期間提供足夠量的磁性微粒，甲胎蛋白試劑盒儲(chǔ)存時(shí)，切莫倒置。器上，8周(交替貯存在冰箱內(nèi)和儀器上，室溫20~25℃，開(kāi)瓶使用時(shí)間累計(jì)約20h)。5.操作步驟5．1．1在使用前分析儀自動(dòng)使微粒處于懸浮狀態(tài)。通過(guò)各試劑條形碼可讀取其詳細(xì)實(shí)驗(yàn)參數(shù)。在少數(shù)情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取信息時(shí)，請(qǐng)輸入標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。儀將自動(dòng)調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度及各試劑瓶瓶蓋的開(kāi)關(guān)狀態(tài)。6.校準(zhǔn)組帶有一個(gè)含有各批試劑定標(biāo)具體信息的條碼標(biāo)簽。使用AFP定標(biāo)液CalSet使預(yù)定義的主曲線適用于分析儀。6．2·定標(biāo)頻率：必須使用新鮮試劑對(duì)每個(gè)試劑批進(jìn)行一次定標(biāo)(即試劑盒上機(jī)登入后的24h內(nèi))。下列情況建議重新定標(biāo)：使用同一批試劑的1個(gè)月后(28天)；7天后(在分析儀上使用同一試劑盒)；根據(jù)需要：質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)，比如質(zhì)控結(jié)果在規(guī)定的限值外；若兩水平質(zhì)控均在控，則定標(biāo)曲線可延至試劑及質(zhì)控批號(hào)更換。線的有效性，注意任何偏差。7.質(zhì)控該測(cè)試適用的質(zhì)控液PreciControlproTumor1和2；也可以用其他合適的質(zhì)控液，如××LyphochekTumorMarkerPlusControl。在以下情況建議進(jìn)行質(zhì)控檢測(cè)：每24h進(jìn)行一次檢測(cè)；每一個(gè)新批號(hào)試劑盒；每一次定標(biāo)以后。所獲值應(yīng)在限定內(nèi)，如果超出限定值，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)及時(shí)采取糾正措施。8.結(jié)果判斷如果測(cè)定值高于檢測(cè)范圍，報(bào)告為＞1000U／ml或1210ng／ml(結(jié)果達(dá)到50000U／ml或60500ng／ml樣本應(yīng)作50倍稀釋)。稀釋。稀釋后的標(biāo)本AFP含量必須高于20U／ml(24ng／ml)。如用手工稀釋?zhuān)Y(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。8．4·檢測(cè)結(jié)果的不確定度：依據(jù)本科室不確定度評(píng)估程序性文件計(jì)算不確定度，并將年度不同水平質(zhì)控值進(jìn)行評(píng)估，評(píng)估結(jié)果以表格的形式附于SOP文件內(nèi)，計(jì)算公式如下：μA＝SμB＝μ校準(zhǔn)品＝U廠家／KU＝2UCUrel＝U／X均值Uc＝槡u＋u9.生物參考區(qū)間Umlngml10.性能參數(shù) (脂質(zhì)＜1500mg／dl)和生物素＜60ng／ml等干擾。不受類(lèi)風(fēng)濕因子干擾(1500U／ml)。37種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定無(wú)干擾。接受高劑量生物素(＞5mg／d)治療的患者，至少要等最后一次攝入生物素8h后才能采血。不受類(lèi)風(fēng)濕因子干擾(1500U／ml)。AFP濃度高達(dá)1×106U／ml(1．21×106ng／ml)也不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。接受過(guò)小鼠單抗治療或診斷的患者會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。11.臨床意義11．1·AFP來(lái)源于卵黃囊、未分化肝細(xì)胞和胎兒胃腸道。70％~95％的原發(fā)性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。但尚未發(fā)現(xiàn)AFP含量與腫瘤大小、惡性程度等有關(guān)系。AFP含量顯著升高一般提示原發(fā)性肝細(xì)胞癌。在轉(zhuǎn)移性肝癌中，AFP一般低于350~400U／ml。AFP中度升高也常見(jiàn)于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg攜帶者。11．2·不推薦將AFP用于普通人群的癌癥篩查。孕婦血清或羊水AFP升高提示胎兒脊柱裂、無(wú)腦癥、食管atresia或多胎，AFP降低(結(jié)合孕婦年齡)提示未出生的嬰兒有唐氏綜合征的危險(xiǎn)性。有18％~25％患者可無(wú)AFP升高，值得注意。病毒性肝炎、肝硬化AFP有不同程度的升高，但其水平常＜500ng／ml，個(gè)別慢性活動(dòng)性肝炎患者在活動(dòng)期其水平可達(dá)800~1000ng／ml，應(yīng)結(jié)合影像學(xué)綜合分析，并定期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。實(shí)際上大部分患者＜100ng／ml。AFP升高