上篇組織學(xué)第1章組織學(xué)緒論一、組織學(xué)的內(nèi)容和意義

組織學(xué)（histology）

是研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué),從組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上對(duì)機(jī)體進(jìn)行研究。心臟（器官）→心?。ńM織）→心肌細(xì)胞（細(xì)胞）1ppt課件心肌細(xì)胞→肌原纖維（亞細(xì)胞）→肌節(jié)→肌絲（分子）2ppt課件組織學(xué)的內(nèi)容：細(xì)胞、組織、器官和系統(tǒng)。細(xì)胞(cell)

是機(jī)體結(jié)構(gòu)與功能的基本單位，由細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核構(gòu)成。

細(xì)胞的形態(tài)、大小適應(yīng)其功能。3ppt課件組織(tissue)

由細(xì)胞群和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。

人體基本組織：

上皮組織、結(jié)締組織、肌組織和神經(jīng)組織。

細(xì)胞外基質(zhì)由細(xì)胞所產(chǎn)生，包括纖維、基質(zhì)和組織液。4ppt課件基本組織(光鏡結(jié)構(gòu))上皮組織結(jié)締組織肌組織神經(jīng)組織5ppt課件組織以不同的種類、數(shù)量和方式組合形成器官；若干功能相關(guān)的器官構(gòu)成系統(tǒng)。6ppt課件意義：※促進(jìn)了生理學(xué)的進(jìn)步※是病理學(xué)的基礎(chǔ)※掌握組織的基本知識(shí)和技能，是學(xué)好生理學(xué)和病理學(xué)的前提。7ppt課件二、組織學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史和當(dāng)代組織學(xué)⒈光學(xué)顯微鏡的發(fā)明與細(xì)胞概念的提出光學(xué)顯微鏡（lightmicroscopeLM)是16世紀(jì)末荷蘭人（Janssen兄弟）發(fā)明的。1665年英國(guó)人胡克用自制的顯微鏡觀察了軟木塞薄片，將一層薄壁圍成的小室稱作“細(xì)胞”。8ppt課件⒉細(xì)胞學(xué)說(shuō)的提出及組織學(xué)的建立

施萬(wàn)（Schwann1838

）、施萊登（1839）提出“細(xì)胞學(xué)說(shuō)”：細(xì)胞是一切動(dòng)、植物體的基本結(jié)構(gòu)和功能單位；細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行著復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)；新細(xì)胞由原有細(xì)胞產(chǎn)生。

1858年，德國(guó)人（virshow）提出了細(xì)胞病理學(xué)說(shuō)，認(rèn)為細(xì)胞損害是一切疾病的基礎(chǔ)，使得細(xì)胞學(xué)說(shuō)愈加完善。由于顯微鏡制造技術(shù)的提高、組織切片機(jī)的發(fā)明、生物標(biāo)本的固定和染色方法的出現(xiàn)，19世紀(jì)下半葉成為組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)發(fā)展的黃金時(shí)代，人們已能較正確地描述細(xì)胞結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞水平對(duì)機(jī)體標(biāo)本進(jìn)行全面而詳細(xì)的觀察和研究。

9ppt課件⒊電子顯微鏡（electronmicroscope,EM）1932年由盧斯卡、科諾爾發(fā)明了電子顯微鏡，使顯微鏡的分辨率從光鏡的0.2μm提高到電鏡的0.2nm。1nm(納米)＝10-3μm(微米)＝10-6mm（毫米）電鏡觀察到的結(jié)構(gòu)，稱超微結(jié)構(gòu)：即細(xì)胞膜、細(xì)胞器、染色體等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)及細(xì)胞外基質(zhì)中的纖維等。⒋當(dāng)代組織學(xué)由于新儀器、新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用，特別是免疫組織化學(xué)技術(shù)、原位雜交技術(shù)將組織學(xué)引入分子水平。10ppt課件三、組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法★審視角度從組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子來(lái)審視。組織水平：組織層次順序、特征性結(jié)構(gòu)和細(xì)胞；細(xì)胞水平：主要細(xì)胞的分布、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（含重要細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)）及主要功能?！镄螒B(tài)和結(jié)構(gòu)相統(tǒng)一結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，功能是結(jié)構(gòu)的表現(xiàn)?！锱囵B(yǎng)觀察能力：重視實(shí)習(xí)課和圖像觀察培養(yǎng)空間思維能力：將二維圖形還原為三維構(gòu)像。11ppt課件二維圖形與三維構(gòu)像12ppt課件單柱上皮不同方位的切片圖13ppt課件結(jié)構(gòu)與功能舒張狀態(tài)收縮狀態(tài)14ppt課件靜態(tài)與動(dòng)態(tài)15ppt課件綜合與比較16ppt課件

問(wèn)題

解決方法

觀察對(duì)象太小

放大（顯微鏡）

觀察對(duì)象無(wú)色，無(wú)反差

染色

觀察對(duì)象生化成分不同

細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)

觀察對(duì)象是活體

培養(yǎng)四、組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介17ppt課件四、組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介光學(xué)顯微鏡技術(shù)分：普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)和特殊光學(xué)顯微鏡技術(shù)。分辨率：區(qū)別兩點(diǎn)間的最小距離。人眼0.2mm光鏡0.2μm1mm=1000μm制片法切片法：石蠟切片

冰凍切片

火棉膠切片涂片：血液

分泌物……鋪片：疏松結(jié)締組織

腸系膜、胸膜、腹膜……磨片：骨、牙18ppt課件(一)普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)石蠟切片術(shù)(paraffinsectioning)是經(jīng)典而常用的技術(shù)，其基本程序：⒈取材與固定用蛋白質(zhì)凝固劑(例如甲醛、乙醇、丙酮等；混合固定液如Bouin液、Carnoy液、Zenker液等)固定新鮮的組織塊(一般以不超過(guò)0.5cm3大小為宜)，目的在于保持細(xì)胞、組織在生活狀態(tài)下的形態(tài)結(jié)構(gòu)。⒉脫水與包埋組織經(jīng)固定后，還要通過(guò)濃度逐級(jí)上升的乙醇將其所含的水分脫除。因乙醇不溶于包埋劑——石蠟，故需用二甲苯(xylene)置換出組織塊中的乙醇。然后將組織塊放在融化的石蠟中．使石蠟液浸入組織細(xì)胞內(nèi)，冷卻后組織塊便具有石蠟的硬度。19ppt課件⒊切片與染色將包有組織的蠟塊用切片機(jī)(microtome)切成5～10μm的薄片，貼于載玻片上，此切片稱石蠟切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟后，進(jìn)行染色。 最常用的染色方法是蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色，簡(jiǎn)稱HE染色。蘇木精為堿性，可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體等染成紫藍(lán)色：伊紅呈酸性，可使細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞外基質(zhì)中的成分染成粉紅色。細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)中的成分易于被堿性染料和酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia)；而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱中性(neutrophilia)。⒋封片切片經(jīng)脫水、透明后，滴加中性樹膠并覆以蓋玻片進(jìn)行封固后，便可在顯微鏡下進(jìn)行觀察。20ppt課件基本程序⒈取材和固定⒉脫水和包埋⒊切片和染色⒋封片四、組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介石蠟切片術(shù)（paraffinsectioning）（一）光鏡技術(shù)21ppt課件石蠟切片機(jī)切片厚度5～10μ22ppt課件恒冷箱冰凍切片機(jī)23ppt課件顯微鏡下觀察染色切片光鏡分辨率約為0.2μm24ppt課件蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE染色法）：蘇木精為堿性染料，使染色質(zhì)和核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，使胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)著紅色。嗜酸性（acidophilia);嗜堿性(basophilia)；中性(neutrophilia)25ppt課件蘇木精為堿性染料，使染色質(zhì)和核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，使胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)著紅色。嗜酸性（acidophilia);嗜堿性(basophilia)；中性(neutrophilia)26ppt課件其他染色方法，如：有的細(xì)胞經(jīng)重鉻酸鹽處理后呈棕褐色，稱嗜鉻性(chromaffinity）；

有的細(xì)胞或組織成分經(jīng)硝酸銀處理后呈黑色，稱親銀性(argentaffin)；

若經(jīng)硝酸銀處理后，尚需添加還原劑才能顯色的現(xiàn)象稱嗜銀性(argyrophilia）；

肥大細(xì)胞中的顆粒經(jīng)甲苯胺藍(lán)等堿性染料染色后，呈紫紅色，該現(xiàn)象稱異染性(metachromasia。27ppt課件28ppt課件29ppt課件30ppt課件31ppt課件32ppt課件常用的特殊光學(xué)顯微鏡技術(shù):

⒈熒光顯微鏡技術(shù)熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)以紫外線為光源，能夠激發(fā)細(xì)胞、內(nèi)的熒光物質(zhì)或者熒光染料發(fā)出熒光。適用于觀察細(xì)胞、組織內(nèi)各種自發(fā)熒光物質(zhì)，也可以觀察光素或者熒光染料標(biāo)記的細(xì)胞、組織結(jié)構(gòu)。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素(FITC)、碘化丙啶(PI)等。33ppt課件⒉相差顯微鏡技術(shù)相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)可將活細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)對(duì)光產(chǎn)不同折射(相位差)轉(zhuǎn)換為明暗差別(振幅差)，從而使觀察對(duì)象結(jié)構(gòu)反差明顯，適用于觀察活細(xì)胞未經(jīng)染色的形態(tài)結(jié)構(gòu)；而倒置相差顯微鏡可觀察生長(zhǎng)在培養(yǎng)瓶活細(xì)胞，并進(jìn)行攝片及錄像以記錄活細(xì)胞的增殖、分裂和運(yùn)動(dòng)等行為。34ppt課件激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)以激光作為激發(fā)光，通過(guò)計(jì)算機(jī)控制的掃描裝置．獲得細(xì)胞和組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像，能觀察細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)各種成分的細(xì)微變化，并可動(dòng)態(tài)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)各種離子、pH、膜電位等生理信號(hào)，廣泛地應(yīng)用于組織和細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、生理學(xué)、藥理學(xué)和遺傳學(xué)等領(lǐng)域研究。35ppt課件⒈透射電鏡技術(shù)透射電鏡(transmissionelectronmicroscope，TEM)是通過(guò)電子槍發(fā)射的電子束穿透觀察樣品后，經(jīng)電磁場(chǎng)的聚合放大并在熒光屏上顯像。由于電子束在不同的電壓下(一般為50～100kV)產(chǎn)生不同的短波長(zhǎng)，所以電鏡的分辨率可達(dá)0.1～0.2nm，放大倍數(shù)可以從數(shù)千倍到幾百萬(wàn)倍。

(二)電鏡技術(shù)36ppt課件透射電鏡樣品的制備主要過(guò)程：取材:新鮮,組織塊(大小以不超過(guò)lmm3為宜);固定:用戊二醛和鋨酸依次固定;包埋:樹脂；切片:超薄切片（厚度為25～80nm）；染色:醋酸鈾和檸檬酸鉛；電鏡下觀察：電鏡下所看到的結(jié)構(gòu)通常稱超微結(jié)構(gòu)。熒光屏上呈較黑暗的圖像，稱電子密度高；反之圖像則較明亮，稱電子密度低。37ppt課件⒈透射電鏡術(shù)（transmissionelectronmicroscopy,TEM）用于觀察組織細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。透射電鏡樣品的制備主要過(guò)程：

戊二醛、鋨酸雙重固定→樹脂包埋→超薄切片（50－80nm厚）→電子染色（醋酸鈾、檸檬酸鉛）

根據(jù)電子束在不同結(jié)構(gòu)上被散射程度的差異表現(xiàn)為電子密度高（黑或深灰色）和電子密度低（淺灰色）38ppt課件用透射電子顯鏡觀察超薄切片標(biāo)本電鏡分辨率約為0.1～0.2nm39ppt課件漿細(xì)胞電子密度高/低（LM）結(jié)構(gòu)（EM）結(jié)構(gòu)40ppt課件⒉掃描電鏡(scanningelectronmicroscope，SEM)通過(guò)極細(xì)的電子束(電子探針)在樣品表面掃描，將樣品表面產(chǎn)生的二次電子用探測(cè)器收集，形成電信號(hào)送達(dá)熒光屏上顯像。主要用于觀察較大的樣品表面結(jié)構(gòu)，圖像富有三維立體感。SEM分辨率為6～10nm。41ppt課件血細(xì)胞（SEM）血細(xì)胞（LM）42ppt課件(三)組織化學(xué)術(shù)（histochemistry）組織化學(xué)(histochemistry)技術(shù)是利用物理和化學(xué)反應(yīng)的原理，使組織、細(xì)胞內(nèi)某種待檢化學(xué)成分形成有色沉淀物，便于在光鏡或電鏡下對(duì)其進(jìn)行定性、定位甚至定量研究。

⑴糖類顯示法最常用的方法是過(guò)碘酸一希夫反應(yīng)(periodicacid．Schiffreaction)，簡(jiǎn)稱PAS反應(yīng)。其原理是：糖被強(qiáng)氧化劑過(guò)碘酸氧化后，形成醛基；后者與無(wú)色的亞硫酸品紅復(fù)合物(即希夫試劑)結(jié)合，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物，故PAS反應(yīng)陽(yáng)性部位即表示多糖存在之處。⒈一般組織化學(xué)術(shù)：43ppt課件44ppt課件⑵酶類顯示法各種酶對(duì)其相應(yīng)底物水解、氧化產(chǎn)生的反應(yīng)物與捕獲劑發(fā)生反應(yīng)時(shí)，可形成有顏色的最終產(chǎn)物。一般以最終產(chǎn)物顯色的深淺程度來(lái)判斷活性酶的有無(wú)與強(qiáng)弱。45ppt課件

(3)脂類顯示法標(biāo)本可用甲醛固定，冷凍切片。用油紅O、尼羅藍(lán)、蘇丹類脂溶性染料(如蘇丹Ⅲ、蘇丹黑B)染色，使脂類(脂肪、類脂)呈相應(yīng)染料的顏色。46ppt課件⒉免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理，檢測(cè)組織、細(xì)胞內(nèi)的多肽和蛋白質(zhì)等大分子。

多肽和蛋白質(zhì)(抗原)→另一種動(dòng)物→特異性抗體(免疫球蛋白)→與標(biāo)記物(熒光素、酶、膠體金)結(jié)合→標(biāo)記抗體→組織切片或者培養(yǎng)細(xì)胞→抗體將與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合→顯微鏡觀察標(biāo)記物→肽或蛋白質(zhì)的存在與分布47ppt課件圖10免疫組織化學(xué)原理模式圖48ppt課件⒊原位雜交(insituhybridization)技術(shù)其原理是用帶有標(biāo)記物的核酸探針(一段已知的堿基序列)，與細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸按堿基配對(duì)的原則，進(jìn)行特異性結(jié)合(即雜交)。并通過(guò)標(biāo)記物的顯示，可在光鏡、電鏡下觀察待測(cè)的核酸的有無(wú)、位置與定量。49ppt課件㈥細(xì)胞