中藥制劑檢驗

第一節(jié)概述中藥制劑是根據(jù)中醫(yī)藥理論和用藥原則，由單味或多味中藥材（中藥浸出物、提取物）按規(guī)定的處方和方法加工而成的單方或復方制劑。中藥制劑分析是以中醫(yī)藥理論為指導，運用現(xiàn)代分析理論和方法研究中藥制劑質量的一門應用學科。中藥制劑分析的對象應該是制劑組方中起主要作用的有效成分、毒性成分、或影響療效的化學成分，對其做出定性、定量等各方面的評價。

1注意：中藥制劑必須是以中醫(yī)藥基礎理論和用藥原則為指導制成的單方或復方制劑。中藥的成方制劑又稱為中成藥。21、中藥市場混亂同物異名同名異物（30多種，鱗毛蕨科、蹄蓋蕨科、紫萁科、烏毛蕨科）貫眾二、中藥制劑分析的特點（一）有效成分的難確定性3同物異名現(xiàn)象嚴重：重樓為百合科.的根莖又名七葉一枝花、蚤休、草河車。拳參為蓼科.的根莖又名草河車。42.中藥材質量的不穩(wěn)定性生長環(huán)境、采收季節(jié)及部位差異麻黃東北→西北（-）麻黃堿含量↑（+）麻黃堿含量↓GAP中藥材生產(chǎn)質量管理規(guī)范5益母草水蘇堿營養(yǎng)期含量最高益母草堿營養(yǎng)期含量最低薄荷腦秋季葉變黃時含量最高丹參酮11、12月份含量最高63、五倍子鞣質（＞70%）槐米蘆?。ǎ?0%）長春花長春新堿（百萬分之一）美登木美登木堿（千萬分之一）各種有效成分在中藥中含量相差懸殊7（二）中成藥化學成分的多樣性、復雜性。1）由多味中藥組成的復方制劑，其化學成分極為復雜多樣。2）中藥制劑由多種單味藥材組成，所含化學成分相互影響。3）各種化學成分在中藥中的含量相差懸殊。8（三）中藥組方的規(guī)律性中藥制劑嚴格按照中醫(yī)理論和用藥原則而組方的。首先進行組方分析，隨方?jīng)Q定測定主藥，選擇合適的檢測指標，是目前質量分析方法的特點之一。在進行質量分析時首先以中醫(yī)理論和用藥原則為指導，進行組方分析，按功能主治分出主、輔、從、次藥味和藥群，選擇某合適的化學成分為指標來說明其與質量的關系。9（四）各成分含量的差異性各種化學成分在中藥中的含量相差懸殊。在分離和檢測中，要采取的分析方法要具有較好的靈敏度。

10（五）劑型的多樣性劑型的多樣性決定了方法的多樣性，所以在制劑分析中大多需要進行提取、分離、凈化等繁瑣的預處理，以排除干擾。11（六）分析方法的先進性中藥制劑的復雜性決定了分析的方法必須有專屬性強和靈敏度高的特點，所以，中藥制劑分析的方法主要是運用先進的科學技術手段來進行。12

二、影響中藥制劑質量的因素

(一)原料藥材的品種、規(guī)格、產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)、加工方法的影響。所以，原料藥在投料前要進行真?zhèn)舞b別和含量測定，合格后方可投料。才能保證中藥制劑的質量。

(二)炮制方法的影響（三）生產(chǎn)工藝的影響(四)中藥制劑的包裝、貯藏、保管的影響。13中藥制劑分析特點①化學成分多而復雜②質量受多種因素影響③易吸潮、染菌、有效成分常不穩(wěn)定④有效成分含量一般較低中藥制劑分類1.液體制劑①合劑與口服液②酒劑和酊劑2.半固體制劑①煎膏劑②浸膏劑和流浸膏劑3.固體制劑丸劑、散劑、顆粒劑(沖劑)、片劑、膠囊劑

14三、中藥指紋圖譜定義：中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特征的色譜圖或光譜圖。特點：主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性?！罢w性”和“模糊性”為其顯著特點。

15整體性：將指紋圖譜作為一個整體來分析和比較它的綜合特征以達到鑒別的目的。模糊性：強調分析、比較指紋圖譜的相似性，而不是完全相同。是一種綜合的、量化的色譜鑒別手段。

16分類：狹義的中藥指紋圖譜是指中藥化學(成分)指紋圖譜，廣義的中藥指紋圖譜則可按應用對象、測定手段進行不同的分類。

17按應用對象分類中藥指紋圖譜可用于中藥制劑研究、生產(chǎn)過程的各個階段，按應用對象來分類，可分為中藥材指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。如分得更細，還可包括用于工藝生產(chǎn)過程中間產(chǎn)物的指紋圖譜。但是對于某一種中藥材的指紋圖譜，需要有大量的數(shù)據(jù)積累，才能制定合理的相似性標準。

18按測定手段分類中藥指紋圖譜按測定手段可分為中藥化學(成分)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥生物指紋圖譜主要是測定各種中藥材的DNA圖譜，由于每個物種基因的唯一性和遺傳性，中藥材DNA指紋圖譜可用于對中藥材的種屬鑒定、植物分類研究和品質研究。它對中藥材GAP（良好的農(nóng)業(yè)規(guī)范）基地建設、中藥材種植規(guī)范(SOP)、選擇優(yōu)良種質資源和藥材道地性研究極為有用。

19方法：薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法。

HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規(guī)分析手段。高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術的首選方法。隨著HPLC—MS和GC—MS等聯(lián)用技術的應用，中藥指紋圖譜技術更趨完善。

20甘草的HPLC指紋圖譜21中藥指紋圖譜建立的意義：中藥及其制劑均為多組分復雜體系，因此評價其質量應采用與之相適應的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，但現(xiàn)行的顯微鑒別、理化鑒別和含量測定等方法都不足以解決這一問題，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數(shù)量，進而對藥品質量進行整體描述和評價。這也正好符合中醫(yī)藥整體學說。在此基礎上，如果進一步開展譜效學研究，可使中藥質量與其藥效真正結合起來，有助于闡明中藥作用機理。總之，中藥指紋圖譜的研究和建立，對于提高中藥質量，促進中藥現(xiàn)代化具有重要意義。

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第二節(jié)中藥制劑分析工作的基本程序

中藥制劑分析程序一般可分取樣、測試樣品溶液的制備和測定（包括定性鑒別、雜質檢查、含量測定）等。（一）、取樣

1．供試品要具有代表性；原則是均勻、合理。

2．嚴格按照規(guī)定的取樣方法進行取樣：一般應從每個包裝的四角和中央五處取樣，深度可達1/32/3處。取得的樣品裝入清潔、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批號、數(shù)量、取樣日期及取樣人。

233．抽取供試品的數(shù)量：各類中藥制劑取樣大致是至少夠3次檢驗的用量。貴重藥品可酌情取樣。制劑（散劑、顆粒劑）一般取樣100g，可從包裝的上、中、下三層及周圍間隔相等部位取樣若干，將所得樣品混勻，按〝四分法”取樣。24

液體制劑（口服液、藥酒、糖漿、酊劑等）一般取樣200ml。同時須注意均勻取樣。

固體中成藥（丸劑、片劑）成品取樣一般為100g，壓片后取樣200片。丸劑一般取10丸。

膠囊劑稱取不少于20個膠囊，傾出其中的藥料，稱定空膠囊的重量，由總重中減去，即為膠囊內藥料的重量。依標示量及供試量稱取部分藥料供分析。一般取樣量為100g。25注射液的取樣，灌注、熔封，滅菌前后應經(jīng)過兩次分析。灌封前將注射液混合均勻，如液體取樣原則取樣，再按標示量及供試量分別取部分進行檢驗；經(jīng)滅菌后的注射液須按原來的方法進行分析檢驗。已封好的安瓿，取樣量一般為200支。其它劑型的中成藥，可根據(jù)具體情況隨意抽取一定數(shù)量，作為隨機抽樣。

供試樣品檢驗完畢，應保留一半數(shù)量作為留樣觀察。26§2.中藥制劑分析的一般程序

取樣(Sampling)

樣品溶液的制備(Preparationofsamplesolution)

定性分析(Qualitativeanalysis)

檢查(Detection)

定量分析(Quantitativeanalysis)原則(根據(jù)目標成分的理化性質或根據(jù)劑型而定)提取方法

Extraction冷浸萃取回流超聲波超臨界提取(SFE)純化Purification萃取、柱色譜法雜質檢查制劑要求的檢查項目一般雜質特殊雜質①灰分(總灰分和酸不溶性灰分)②重金屬③砷鹽④殘留農(nóng)藥⑤微生物細菌27

（二）、供試品溶液的制備制備的原則：最大限度地保留被測成分的，除去干擾成分，并使被測成分達到分析方法檢測限所需濃度。中藥制劑供試品溶液的制備一般分為提取、分離、凈化等過程。

1.中藥制劑樣品的提取

28⑴浸漬法：樣品置溶劑里，室溫下浸泡一段時間的提取方法。適用范圍：適宜植物性粉末；不宜動物性粉末特點：適宜易溶出的組分，適宜遇熱不穩(wěn)定的藥物；費時（8～24小時）29⑵回流法：樣品置索氏提取器中，利用溶劑反復提取，提取效率高，溶劑少，遇熱不穩(wěn)定的有效成分不宜用此法；特點：

1.加快溶出速度，省時

2.適宜受熱穩(wěn)定的藥物

3.適宜較難溶出的組分30⑶水蒸氣蒸餾法：適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組分的測定。麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油

⑷微量升華法：適用于化學成分隨加熱升華，從制劑中分離出來的組分。31⑸超聲波提取法，樣品置容器中，溶劑提取，效率高，一般樣品30min內即可完成。2.凈化方法⑴

液-液萃取法:溶劑直接萃取、離子對萃取，操作繁，易乳化。⑵沉淀法：采用某些試劑沉淀雜質或沉淀待測成分。32⑶蒸餾法：利用待測成分或其分解產(chǎn)物具有揮發(fā)性的特點，采用蒸餾法、收集餾液進行含量測定，必須明確測定成分的結構才可用此法。⑷色譜法（液-固萃取法），常用凈化劑有三氧化二鋁、氧化鎂、硅膠、活性炭、大孔樹脂、離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠C18、C8等。

其中離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠C18、C8等目前有較多商品預處理柱，使用方便，操作簡單，凈化效率高。33（二）供試品的分析供試品的分析包括鑒別、檢查、含量測定。1.鑒別1）性狀鑒別系指中成藥的形狀、顏色、氣味等，凡藥典收載品，在藥典中均有規(guī)定，可按要求進行檢查。

2）顯微鑒別因為含有中藥原粉的中成藥均保留中藥材的顯微特征?？梢酝ㄟ^這些特征，對中成藥進行鑒別。34選擇原則：

1、應選有專屬性的特征進行鑒別

2、多來源的藥材應選擇共有的特征進行鑒別3）化學鑒別藥典中常用的方法有：熒光法、顯色法、沉淀法、微量升華法354）色譜鑒別紙色譜法、薄層色譜（應用最多Rf、顏色、熒光）、液相色譜（常與含量測定同時進行）、氣相色譜（適用于含揮發(fā)性成分的藥物等）。

中藥定性鑒別應選擇其中主藥（君藥）、輔藥（臣藥）作為主要對象，其次應鑒別毒劇藥及貴重藥材。362．雜質檢查

按我國藥典要求，中藥制劑需要檢查的項目da致可分為三類：1）污染型中成藥一般雜質檢查項目有：異物、灰分、酸不溶性灰分、重金屬、砷鹽等；衛(wèi)生學檢查：微生物細菌檢查；以及有的產(chǎn)品要求農(nóng)藥殘留量的檢測。2）特殊雜質型原料藥材摻假、有毒成分的限量檢查。37劑型的要求檢查類型（制劑通則要求檢查項目）

中成藥一般質量要求的檢查有：揮發(fā)油測定、水分測定（固體制劑）、乙醇含量測定、總固體、相對密度、pH值（酊劑、藥酒）、裝量差異（片重差異）、崩解度（片劑、膠囊劑）、熔點測定、旋光度測定等。

38雜質檢查的意義：水分——

結塊、霉變或有效成分水解灰分——

控制藥物本身及泥土、沙石等無機雜質砷鹽——

劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或化肥引入重金屬——

環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入殘留農(nóng)藥——

有毒39⑴水分烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）GC法40⑵總灰分法和酸不溶性灰分總灰分的測定：

已恒重的坩堝

500～600℃供試品————炭化———灰化——恒重△

酸不溶性灰分：

+HCl已恒重的坩堝

500～600℃供試品——過濾—————炭化————灰化△

︱

恒重41⑶重金屬硫代乙酰胺法：干法破壞、濕法破壞⑷砷鹽堿融法破壞、濕法破壞后采用古蔡氏法或二乙基二硫代氨基甲酸銀法和GC法測定。42（5）殘留農(nóng)藥1、總氯量的測定2、總磷量的測定（農(nóng)藥不明的樣品）3、GC法（已知農(nóng)藥的樣品）433.含量測定中成藥含量測定所采用的方法除經(jīng)典的重量法、容量法(包括中和法、容量沉淀法、絡合滴定法、氧化還原法及非水溶液滴定法等)外，還可采用電位法、庫倫滴定法、比色法、可見-紫外分光光度法、紅外分光光度法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、雙波長薄層掃描法等44含量測定項目選定①先選君藥或貴重藥②如君藥無法測定，再選臣藥③有效成分或指標成分清楚的，可以測定其含量④成分類別清楚的，可測定某一類總成分的含量，如總黃酮、總生物堿、總皂苷等⑤所測成分應歸屬于某單一味藥⑥檢測成分盡量與中醫(yī)用藥功能主治相近⑦如確定無法進行含量測定的，可選適當溶劑，測定浸出物含量45⑴化學分析法包括滴定分析法和重量法特點A、準確度、精密度高

B、抗干擾能力差46（2）分光光度法常用定量方法：1.對照法C樣=C標A樣/A標；C標A樣/（A標C樣）=樣品%，C樣和C標分別為樣品濃度和標準品濃度，C樣為樣品標示濃度。2.標準曲線法：從標準品吸光度-濃度曲線求得樣品濃度。473.吸收系數(shù)法按品種項下有規(guī)定的吸收系數(shù)進行計算。4.液-液萃取比色法有機溶劑提取后，分取有機層后比色測定含量的方法。48⑶薄層掃描法測定薄層板上斑點對單色光的吸收或反射的強度而進行定量的方法。特點A、分離效果好

B、適用于無法用UV、HPLC法測定的組分

C、準確度、精密度低于HPLC49薄層色譜定量的方法可分為二類，一類是薄層洗脫定量法，將被測化合物從薄層上洗脫下來，萃取后，再選擇適當方法進行測定。另一類是在展開后的薄層上直接進行測定。一、薄層洗脫定量

1．點樣在薄層板的起始線上，將定量的樣品液點成一條狀，點樣時應避免任何損失。在板的兩邊，點上對照品作為定位劑，如圖A，然后，在選好的溶劑中層開，斑點要集中，不應有拖尾現(xiàn)象。502.定位對本身有顏色的化合物可直接定位，對有熒光的化合物可在紫外光下觀察定位，對多數(shù)無色化合物不可在薄層上直接噴顯色劑定位，此時，應將待測組分的薄層部分用玻璃板懸空蓋住后再噴，這樣可利用兩邊的對照點顯色定位。51

523．捕集、洗脫和測定定位后，應捕集洗脫，若為軟板，可將待測組分的帶狀區(qū)域用捕集器收集，如圖(B)。若為硬板，可直接用捕集器收集，也可用刀片將樣品區(qū)帶的吸附劑定量地刮下，再用合適溶劑洗脫后，進行定量測定，如圖(C)。53洗脫溶劑，一般應選極性較大，對待測化合物溶解度亦較大的溶劑，如乙醚、氯仿、丙酮、乙醇、甲醇等，在單一溶劑洗脫效果欠佳時，可采用混合溶劑。洗脫方法可采用滲濾法、多次浸出法、加熱溫浸法、索氏回流提取法等。對不易洗脫的化合物，也可不經(jīng)洗脫，在吸附劑中加入適當?shù)娘@色劑，使其定量反應，然后離心或過濾后再進行測定。544.定量的方法主要有外標法和內標法，前者更為常用。

1．外標法首先做待測組分的標準曲線，其縱坐標為各個斑點的峰面積積分值A，橫坐標為相應各斑點的物質量(微克數(shù))。此時做標準曲線有2個目的，其一確定該組分的線性范圍。其二看標準曲線是否通過原點，若通過原點，分析樣品時用外標一點法定量，若不通過原點，分析樣品時用外標二點法定量。552．內標法通常配2份不同濃度的含不同量內標物的對照品溶液，并在一定量樣品溶液中加入已知質量的內標物，將這兩種溶液分別點在薄層上，展開后，內標物與對照品分開，用同一波長掃描，測峰面積。用對照品與內標物的峰面積比為縱坐標，用二者的濃度比為橫坐標作圖，所得曲線即為標準曲線。56影響薄層掃描定量的因素1.吸附劑性能及薄層質量薄層厚薄要均勻，吸附劑粒度要均勻。粒度不均，影響散射系數(shù)。厚度增加，Rf值增大。厚度下降，展開后斑點擴散較重。2．點樣操作與隨行標準原點直徑以1～3mm較合適，點樣過多會使原點“超載”，展開劑出現(xiàn)“繞行”現(xiàn)象，引起斑點拖尾或重疊，使掃描峰形不對稱或不能“基線分離”。定量點樣時，盡可能在同一塊薄層板上同時點上已知濃度的對照品，即隨行標準，一同展開，定量，并由這些對照品的測定值計算樣品含量。573．展開條件將薄層板與展開槽進行預飽和，可得到重現(xiàn)的色譜圖。展開時溫度變化應盡量小。展距要適宜，一般Rf值在0.2～0.8時最佳。展開用的溶劑必要時需經(jīng)過預處理。4.展開后要徹底清除溶劑，方可掃描。5.顯色顯色后應注意斑點的穩(wěn)定性，測量時必須在穩(wěn)定的時間中進行。為提高色斑的穩(wěn)定性，可將顯色后的薄層板避光保存，以同樣大小的玻璃片覆蓋并密封或將薄層板浸入20％聚乙二醇甲醇溶液中，待甲醇揮發(fā)后，薄層上形成聚乙二醇薄膜，使色斑與空氣隔絕，以保證色斑的穩(wěn)定。58⑷高效液相色譜法應用分析實例—萬氏牛黃清心丸[處方]牛黃10g朱砂60g黃連200g黃芩120g梔子120g郁金80g

[制法]以上六味，除牛黃外，朱砂水飛或粉碎成極細粉；其余黃連等四味粉碎成細粉；將牛黃研細，與上述粉末配研，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜100-200g制成大蜜丸，即得。59[性狀]本品為紅棕色至棕褐色的大蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。[方藥分析]本方來源于明.?痘疹世醫(yī)》心法，本方為清心開竅劑，主治熱邪內陷心包所致竅閉神昏癥。方中牛黃，清心解毒，豁痰開竅為君藥；黃連、黃芩、梔子清熱瀉火，為臣藥；朱砂清心，重鎮(zhèn)安神，郁金行氣開竅共為佐使藥，合用以奏透邪瀉熱，開竅安神之效。60[方藥分析]牛黃—清熱解毒藥，主含膽酸類成分。黃連—清熱燥濕藥，主要為小檗堿。黃芩—清熱燥濕藥，主要為黃酮類。梔子—清熱瀉火藥，主含梔子甙。朱砂—安神藥，主含硫化汞（HgS）。郁金—活血去瘀藥，主含揮發(fā)油。61鑒別顯微鑒別郁金—糊化淀粉團塊幾乎無色。梔子—種皮石細胞。黃芩—纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細。黃連—纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。朱砂—不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色。62化學鑒別1.朱砂的鑒別取本品3g，加水適量，研勻，反復洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加入鹽酸1ml及銅片少量，加熱煮沸，銅片由黃色變?yōu)殂y白色。HgS+2HCl+CuCuCl2+Hg+H2S注意：在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換反應析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色汞齊。632.人工牛黃的鑒別取本品，剪碎，加硅藻土0.6g，研勻，加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml，加熱回流30min,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。64TLC法硅膠G展開劑醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇（32:6:1:1）顯色劑10%磷鉬酸乙醇液653.黃芩的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研勻，加甲醇20ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備：黃芩甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。66TLC法硅膠G展開劑醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）顯色劑2%三氯化鐵乙醇液674.梔子的鑒別供試品溶液的制備：取本品3g，加乙醚15ml，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸乙酯30ml，加熱回流1hr,放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。68TLC法硅膠G展開劑醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10:7:2:0.5）顯色劑10%硫酸乙醇

695.黃連的鑒別供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的鹽酸-甲醇提取液4ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，使成1ml作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備：黃連對照藥材50mg，加甲醇10ml，回流加熱15min,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。