免疫學(xué)中與抗原偶聯(lián)的載體蛋白的選擇原則檢測(cè)方法關(guān)鍵需要看你偶聯(lián)的蛋白的特性。需要根據(jù)蛋白特性來(lái)選擇不同的偶聯(lián)方法，不同的偶聯(lián)方法針對(duì)的功能基團(tuán)不同，位置當(dāng)然更加不固定了，活化劑種類更多，不是沒有人回答你的問題，而是你的問題范圍太廣無(wú)法回答！我曾經(jīng)做過小分子和蛋白質(zhì)的偶聯(lián)，有一些自己總結(jié)的綜述，你可以參考以下：人工抗原合成常用的載體載體表面應(yīng)首先應(yīng)具有化學(xué)活性基團(tuán)，這些基團(tuán)可以直接與抗生素或農(nóng)藥分子偶聯(lián)，這是化學(xué)偶聯(lián)制備抗原的前提；其次，載體應(yīng)具備一定的容量，可以偶聯(lián)足夠的分子；載體還應(yīng)該是惰性的，不應(yīng)干擾偶聯(lián)分子的功能；而且載體應(yīng)具有足夠的穩(wěn)定性，且應(yīng)該是廉價(jià)易得的。常用來(lái)作為合**工抗原的載體蛋白質(zhì)有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、人血清白蛋白25人)及人工合成的多聚賴氨酸(PLL)等。這些蛋白質(zhì)分子中的a和￡-氨基(等電點(diǎn)8和10)、苯酚基、巰基(等電點(diǎn)為9)、咪唑基(等電點(diǎn)為7)、羧基(等電點(diǎn)2?4,大部分來(lái)自天冬氨酸或谷氨酸的B-和Y-羧基)等在等電點(diǎn)pH條件下，一部分成為質(zhì)子，另一部分未質(zhì)子化的親核基團(tuán)則具有反應(yīng)活性，可與半抗原中的對(duì)應(yīng)基團(tuán)結(jié)合。當(dāng)然，這些基團(tuán)的反應(yīng)性也取決于蛋白質(zhì)各種氨基酸殘基的微環(huán)境。牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HAS)分子中含有大量的賴氨酸，故有許多自由氨基存在，且在不同pH和離子強(qiáng)度下能保持較大的溶解度。此外，這些蛋白質(zhì)在用有機(jī)溶劑(如吡啶、二甲基甲酰胺)溶解時(shí)，其活性基團(tuán)仍呈可溶狀態(tài)，因此，這兩種蛋白質(zhì)是最常用的載體蛋白質(zhì)。近年來(lái)，有研究報(bào)道用人工合成的多聚肽（最常用的是多聚賴氨酸）作載體，表現(xiàn)出能增加半抗原的免疫原性，從而使產(chǎn)生征對(duì)半抗原的特異性抗體可能性增加，被廣泛應(yīng)用［31，32］。1.2.2人工抗原合成方法小分子半抗原與載體蛋白偶聯(lián)效果會(huì)受到偶聯(lián)物的濃度及其相對(duì)比例、偶聯(lián)劑的有效濃度及其相對(duì)量、緩沖液成分及其純度和離子強(qiáng)度、pH以及半抗原的穩(wěn)定性、可溶性和理化特性等因素的影響。通常是在條件溫和的水溶液中將半抗原與載體蛋白共價(jià)結(jié)合，不宜在高溫、低溫、強(qiáng)堿、強(qiáng)酸條件下進(jìn)行。一般是由半抗原上的活性基團(tuán)決定偶聯(lián)合成的方法，常用的方法如下：1.2.2.1分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯(lián)1）混合酸酐法（mixedanhydridemethod）：也稱氯甲酸異丁酯法。半抗原上的羧基在正丁胺存在下與氯甲酸異丁酯反應(yīng)，形成混合酸酐的中間體，再與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng)，形成半抗原與蛋白質(zhì)的結(jié)合物2）碳二亞胺法（CDI）：碳二亞胺（EDC）使羥基和氨基間脫水形成酰胺鍵，半抗原上的羧基先與EDC反應(yīng)生成一個(gè)中間物，然后再與蛋白質(zhì)上的氨基反應(yīng)，形成半抗原與蛋白質(zhì)的結(jié)合物（見圖1.5）。EDC被稱作零長(zhǎng)度交聯(lián)劑之一，因?yàn)樗鳛轷０锋I的形成介質(zhì)并沒有形成手臂分子。此連接方法十分簡(jiǎn)便，只需將載體蛋白質(zhì)和抗原按一定比例混合在適當(dāng)?shù)娜芤褐?，然后加入水溶性碳化二亞胺，攪??2h，置室溫24h，再經(jīng)透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通過某些化學(xué)反應(yīng)引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法進(jìn)行偶聯(lián)。1.2.2.2含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯(lián)1）戊二醛法：雙功能試劑戊二醛的兩個(gè)醛基分別與半抗原和蛋白質(zhì)上的氨基形成schiff鍵（-N=C，在半抗原和蛋白質(zhì)間引入一個(gè)5碳橋。這一反應(yīng)條件溫和，可在4?40℃及pH6.0?8.0內(nèi)進(jìn)行，操作亦簡(jiǎn)便，因此應(yīng)用廣泛。戊二醛受到光照、溫度和堿性的影響，可能發(fā)生自我聚合，減弱其交聯(lián)作用，因此最好使用新鮮的戊二醛。2）重氮化法：用于活性基團(tuán)是芳香胺基的半抗原，芳香胺基與NaNO2和HCl反應(yīng)得到一個(gè)重氮鹽，它可直接接到蛋白質(zhì)酪氨酸羧基的鄰位上，形成一個(gè)偶氮化合物（見圖1.6）。1.3.2.3含羥基半抗原的偶聯(lián)1）琥珀酸酐法：半抗原的羥基與琥珀酸酐在無(wú)水吡啶中反應(yīng)得到一個(gè)琥珀酸半酯（帶有羧基的中間體），再經(jīng)碳二亞胺法或混合酸酐法與蛋白質(zhì)氨基結(jié)合，在半抗原與蛋白質(zhì)載體間插入一個(gè)琥珀?；▓D1.7）。2）羰基二咪唑法：N,N’-羰基二咪唑是引入羰基的高活性試