口服福氏宋內(nèi)菌痢疾雙價活疫苗KoufuFushiSongneijunLijiShuangjiaHuoyimiaoDysenteryVaccine(Live)ofS.flexneriandS.sonnei,Oral本品系用表達福氏2a和宋內(nèi)志賀菌雙價菌體抗原的FS菌株，經(jīng)培養(yǎng)收集菌體后，加入穩(wěn)定劑凍干制成。用于預(yù)防細(xì)菌性痢疾。1基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、水、原料及輔料、器具、動物等應(yīng)符合“凡例”的有關(guān)要求。2制造2.1菌種生產(chǎn)用菌種應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”的有關(guān)規(guī)定。2.1.1名稱及來源采用重組技術(shù)構(gòu)建的、能表達福氏2a和宋內(nèi)志賀菌菌體抗原的FS菌株。2.1.2種子批的建立應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”的有關(guān)規(guī)定。2.1.3種子批的傳代工作種子批菌種啟開后至疫苗生產(chǎn)，傳代應(yīng)不超過代。2.1.4種子批菌種的檢定2.1.4.1培養(yǎng)特性FS株在固體瓊脂上培養(yǎng)后生長呈無色半透明光滑的菌落。2.1.4.2染色鏡檢涂片染色鏡檢應(yīng)為革蘭陰性桿菌。2.1.4.3生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖、甘露醇，遲緩發(fā)酵半乳糖，但不產(chǎn)氣；不發(fā)酵乳糖、麥芽糖、蔗糖；無動力(附錄XW)。2.1.4.4血清學(xué)試驗玻片凝集試驗取35?37°C培養(yǎng)18?20小時的培養(yǎng)物，與相應(yīng)的福氏志賀菌群3、4，11型參考血清和宋內(nèi)志賀菌I相參考血清，分別進行玻片凝集試驗，均應(yīng)在1分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集反應(yīng)。定量凝集試驗取35?37C培養(yǎng)18?20小時的培養(yǎng)物，以滅菌PBS(pH7.2?7.4)稀釋成1.0X109/ml的菌懸液，分別與福氏志賀菌群3、4，11型參考血清和宋內(nèi)志賀菌I相參考血清做定量凝集試驗，充分混合后置35?37C過夜，肉眼觀察結(jié)果，以凝集之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)效價，凝集效價應(yīng)不低于參考血清原效價之半。2.1.4.5豚鼠角結(jié)膜毒力試驗選用體重300?350g豚鼠(Hartely)2只，取35?37C培養(yǎng)18?20小時的菌苔一接種環(huán)(直徑3mm，約含5X1010個活菌)涂布于豚鼠角結(jié)膜，連續(xù)觀察7日，不得出現(xiàn)任何炎癥反應(yīng)。2.1.4.6免疫力試驗選用體重14?16g小鼠40只，分為4組，每組10只，其中兩組為免疫組，每只皮下注射總菌2.5X109,另兩組為生理氯化鈉溶液對照組。共注射3次，每次間隔3天。于末次注射后第14天，用福氏2a和宋內(nèi)志賀菌菌株5"。，分別攻擊免疫組和對照組各一組，觀察3天，保護率應(yīng)大于70%。2.1.4.7免疫原性試驗將FS株接種于厚金格爾(簡稱厚氏)斜面或其他適宜培養(yǎng)基，35?37°C培養(yǎng)18?20小時，刮取菌苔于滅菌的PBS(pH7.2?7.4)中，稀釋至一定濃度，經(jīng)耳靜脈免疫體重2kg左右的家兔3只，每次0.5ml，免疫4次，間隔5?7天，4次注射的劑量分別含菌2.5X108、5.0X108、1.0X109、2.0X109，于末次注射后10?14天采血做定量凝集試驗，測血清抗體效價。免疫血清對福氏2a型志賀菌的凝集效價不低于1：1280，對宋內(nèi)志賀菌效價應(yīng)不低于1：320，2/3家兔血清之凝集效價達到上述要求即為合格。2.1.4.8質(zhì)粒DNA檢測用KadoLiu法提取FS培養(yǎng)物的質(zhì)粒DNA，經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳法檢測應(yīng)呈該菌株典型的質(zhì)粒圖譜。應(yīng)有分子質(zhì)量為49MD(百萬道爾頓)和74MD的兩條大質(zhì)粒帶及另兩條小質(zhì)粒帶。2.1.5菌種保存種子批應(yīng)凍干保存丑C以下。2.2原液2.2.1生產(chǎn)用種子工作種子批菌種檢定合格后可使用2年，但每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性，合格后方可使用。啟開凍干工作種子批菌種，用滅菌PBS(pH7.2?7.4)或厚氏肉水復(fù)蘇后鋪種厚氏斜面或接種厚氏液體培養(yǎng)基，置35?37C培養(yǎng)18?20小時；第2?3代菌種采用厚氏液體培養(yǎng)基，35?37C培養(yǎng)6?8小時。由此制備生產(chǎn)用種子。2.2.2生產(chǎn)用培養(yǎng)基采用厚氏液體培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基。2.2.3菌種接種和培養(yǎng)將純菌檢查合格的種子液接種于培養(yǎng)罐內(nèi)，初始濃度達4X108/ml以上為宜，35?37C培養(yǎng)8?11小時。培養(yǎng)過程中應(yīng)取樣鏡檢，發(fā)現(xiàn)污染即廢棄。2.2.4收獲在細(xì)菌對數(shù)生長期末時收獲菌體，離心后將菌體混懸于已滅菌的穩(wěn)定劑中。2.2.5原液檢定按3.1項進行。2.3半成品2.3.1配制將混懸于穩(wěn)定劑中的濃菌液，用含5%蔗糖、0.5%明膠的磷酸緩沖液稀釋至1.0X10u/ml?？捎脝闻夯蚨嗯夯旌吓渲啤?.3.2半成品檢定按3.2項進行。2.4成品2.4.1分批應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2.4.2分裝應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。分裝后立即凍干，凍干過程中制品溫度不超過30r。干燥完畢后立即進行真空或充氮封口。2.4.3規(guī)格每瓶1ml。含菌1.0X1011，其中活菌數(shù)應(yīng)不低于2.0X101。。2.4.4包裝應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”的規(guī)定。3檢定3.1原液檢定3.1.1純菌檢查供試品接種于厚氏斜面，于35?37°C培養(yǎng)48小時，應(yīng)無雜菌生長。3.1.2濃度測定按“中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)”測定濃度。3.2半成品檢定3.2.1純菌檢查同3.1.1項。3.2.2活菌率測定根據(jù)“中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)”比濁濃度將供試品稀釋至總菌1.0X1011/ml，采用平皿計數(shù)法檢測活菌數(shù)，活菌率應(yīng)不低于25%。3.3成品檢定除水分測定外，應(yīng)按制品標(biāo)示量加入滅菌PBS(pH7.2?7.4)，復(fù)溶后進行其余各項檢定。3.3.1鑒別試驗將本品接種厚氏斜面，置35?37C培養(yǎng)18?20小時后，取菌苔分別用福氏志賀菌群3、4及II型血清和宋內(nèi)志賀菌I相血清做玻片凝集試驗，應(yīng)出現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)。3.3.2物理檢查3.3.2.1外觀應(yīng)為乳白色或淡黃色的疏松體，加入滅菌PBS后應(yīng)在1分鐘內(nèi)溶解。3.3.2.2裝量差異按附錄IA中裝量差異項進行，應(yīng)符合規(guī)定。3.3.3水分應(yīng)不高于3.0%(附錄WD)。3.3.4純菌檢查同3.1.1項。3.3.5活菌數(shù)測定采用平皿計數(shù)法檢測活菌數(shù)，應(yīng)不低于2.0X10i0/ml。3.3.6免疫原性試驗取本品1瓶復(fù)溶后，接種于厚氏斜面，置35?37°C培養(yǎng)18?20小時，刮取菌苔于滅菌PBS（pH7.2?7.4），按2.1.4.7項進行。每10批制品抽檢1批進行本試驗。3.3.7豚鼠角結(jié)膜毒力試驗按2.1.4.4項進行。3.3.8安全試驗選用體重18?22g小鼠5只，并分別稱重；每只灌服1.0X1010的菌量，觀察7天，小鼠應(yīng)健存、體重增加。如不符合上述要求，可用10只小鼠復(fù)試1次。3.4稀釋劑檢定每袋稀釋劑含碳酸氫鈉0.1?0.2g、維生素C鈉鹽0.05?0.1g、糖蜜素0.05?0.1g。加滅菌注射用水50ml溶解后測定。3.4.1pH值pH應(yīng)為7.5?8.5（附錄VA）。3.4.2微生物限度檢查依法檢查（附錄刈G），應(yīng)符合規(guī)定。4保存、運輸及有效期于2?8C避光保存和運輸。自生產(chǎn)之日起有效期為1年。5使用說明應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定和批準(zhǔn)的內(nèi)容。口服福氏宋內(nèi)氏菌痢疾雙價活疫苗使用說明［藥品名稱］通用名：口服福氏宋內(nèi)氏菌痢疾雙價活疫苗英文名稱：BivalentLiveVaccineofS.flenerizaandS.sonnei,Oral漢語拼音：KoufuFushiSongneishijunLijiShuangjiaYimiao［成分和性狀］本品系用可表達福氏2a和宋內(nèi)氏志賀菌雙價菌體抗原的痢疾FS菌株，經(jīng)培養(yǎng)收獲菌體，加入穩(wěn)定劑凍干制成。為乳白色或略帶黃色的疏松體。輔料：按批準(zhǔn)的執(zhí)行。［接種對象］各年齡組人員均可服用本品。［作用與用途］服用本疫苗后，可使機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。用于預(yù)防細(xì)菌性痢疾。［規(guī)格］每瓶1ml，含菌1.0X1011，活菌數(shù)不低于2.0X1010。［用法用量］［免疫程序和劑量全程免疫服用3次，每次間隔5-7天，成人首次服用1瓶，第2、3次各2瓶；6-13歲兒童服成人半量；5歲以下兒童服成人1/3量。用50ml涼開水溶解1包稀釋劑，制成稀釋液。開啟疫苗瓶，用所附吸管吸取稀釋液少許，加入到疫苗瓶內(nèi)，將溶解后的制品移入到稀釋液中，混均后服用。［不良反應(yīng)］偶有惡心，腹部不適等輕微反應(yīng)。常見不良反應(yīng)：⑴一過性輕度嘔吐、腹瀉，多數(shù)情況下于^~3天內(nèi)自動消失。⑵服用疫苗后1?2周內(nèi)，可能出現(xiàn)一過性發(fā)熱反應(yīng)。其中大多數(shù)的發(fā)熱反應(yīng)為輕度發(fā)熱反應(yīng)，持續(xù)1~2天后可自行緩解，一般不需處理，必要時適當(dāng)休息，多喝開水，注意保暖，防止繼發(fā)感染；對于中度發(fā)熱反應(yīng)或發(fā)熱時間超逾小時者，可給予對癥處理。罕見不良反應(yīng)：⑴嚴(yán)重發(fā)熱反應(yīng)：應(yīng)給予對癥處理，以防高熱驚厥。(2)持續(xù)嘔吐、腹瀉超過3天及腹瀉次數(shù)超過5次/天以上。極罕見不良反應(yīng)：服用疫苗后72小時內(nèi)可能出現(xiàn)過敏性皮疹，應(yīng)及時就診。［禁忌］免疫缺陷或免疫功能不仝者。消化道及心臟、肝臟及腎臟疾病者。急性傳染病和發(fā)熱者。⑴已知對該疫苗的任何組份過敏者。⑵患急性疾病、嚴(yán)重慢性疾病、慢性疾病的急性發(fā)作期和發(fā)熱者。⑶免疫缺陷、免疫功能低下或正在接受免疫抑制治療者。⑷妊娠期婦女。［注意事項］1——本品嚴(yán)禁注射！本品應(yīng)在空腹或餐后2小時服用。開啟后應(yīng)立即使用。⑴以下情況者慎用：家族和個人有驚厥史者、患慢性疾病者、過敏體質(zhì)者、哺乳期婦女。⑵使用前檢查標(biāo)簽，有效期應(yīng)符合要求。膠囊劑應(yīng)無破裂。⑶膠囊劑不得拆開膠囊服用，以免影響疫苗的免疫效果。⑷本品與抗生素同時應(yīng)用時可能影響疫苗的免疫效果。⑸用