苯磺酸氨氯地平片的質(zhì)量控制

苯磺酸氨基丙烯酸酯（norvac）是治療高血壓的單一制劑。作為一種抗高血壓藥物二羥吡啶，它可以抑制神經(jīng)退行性鈣抗劑，阻礙血管平滑肌和心肌的收縮過程，從而降低周一和周期管的阻力和血壓。目前，苯磺酸氨氯地平的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國藥典》然而，已有的研究1實(shí)驗(yàn)試劑和儀器高效液相色譜儀(配備5410紫外檢測器、5210自動進(jìn)樣器、5110輸液泵)、高效液相色譜儀(配備L-2450DAD檢測器、L-2200自動進(jìn)樣器、L-2130輸液泵)(日本Hitachi公司),PHS-3C型精密pH計(上海雷磁儀器公司),XPE26電子天平(德國MettlerToledo公司),SartoriusBT-25S電子分析天平、SartoriusSQP電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。乙酸銨(色譜純)、冰乙酸、鹽酸、質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%過氧化氫(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠),甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司),純凈水(沈陽娃哈哈榮泰食品有限公司),氫氧化鈉(分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)。苯磺酸氨氯地平片(自制，規(guī)格為每片5mg,按氨氯地平計，批號：20190110、20190111、20190112),苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%,批號100374-201605),雜質(zhì)A(歐洲藥典委員會，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%,批號Y0001068),雜質(zhì)B(歐洲藥典委員會，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%,批號Y0001069),雜質(zhì)D(加拿大TRC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.0%,批號12-DHL-127-1),雜質(zhì)E(加拿大TRC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%,批號1-GSU-153-1),雜質(zhì)F(加拿大TRC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.0%,批號1-TAH-95-1),雜質(zhì)G(歐洲藥典委員會，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%,批號Y0001070),雜質(zhì)H(加拿大TRC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.2%,批號9-JLI-122-5),雜質(zhì)N-F(加拿大TRC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.1%,批號1270-094A3),雜質(zhì)3(加拿大RXA公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%,批號17-A000413-09),雜質(zhì)8(加拿大TLC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%,批號1763-009A4),雜質(zhì)15(加拿大TLC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%,批號2578-054A3),雜質(zhì)19(加拿大TLC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%,批號2327-081A4),雜質(zhì)20(加拿大TLC公司，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%,批號3047-082A3),以上各試藥需避光操作。2方法和結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1稀釋劑的制備甲醇-水(體積比60∶40)。2.1.2供試品溶液的制備取同一批苯磺酸氨氯地平片10片，研細(xì)，取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平25mg),置25mL量瓶中，加稀釋劑適量，超聲5min使苯磺酸氨氯地平溶解，取出，放冷，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.1.3稀釋劑的稀釋精密量取供試品溶液1mL,置10mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻；精密量取1mL,置100mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。2.1.4白色粉末的制備稱取苯磺酸氨氯地平片處方比例的空白輔料適量，按“2.1.2”條方法制備空白輔料溶液。2.1.5對照品貯備液的制備取雜質(zhì)D和雜質(zhì)3對照品各約3mg,雜質(zhì)A、B、E、F、G、H、N-F、8、15、19和20對照品各約2mg,精密稱定，分別置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為各雜質(zhì)對照品貯備液。2.1.6混合雜質(zhì)對照溶液的制備分別精密量取各雜質(zhì)對照品貯備液適量置10mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，配制成雜質(zhì)A、E、F質(zhì)量濃度約為1.5mg·L2.1.7系統(tǒng)適用性溶液的制備取苯磺酸氨氯地平對照品約13.9mg,精密稱定，置10mL量瓶中，用稀釋劑溶解，按“2.1.6”條方法制備，分別精密量取各雜質(zhì)對照品貯備液于上述10mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。2.2在鉻條件下和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)2.2.1條件1色譜柱：Waters2.2.2系統(tǒng)適用性測試取系統(tǒng)適用性溶液，按“2.2.1”條色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，氨氯地平與各雜質(zhì)及各雜質(zhì)之間的分離度均大于2.0。2.3方法學(xué)的檢驗(yàn)2.3.1氧化破壞試驗(yàn)精密量取空白輔料溶液、系統(tǒng)適用性溶液各20μL,按“2.2.1”條色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖2。結(jié)果顯示，空白輔料不干擾主成分及其雜質(zhì)的測定。取苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，置10mL玻璃試管中，酒精燈外焰加熱至藥物部分變色，放冷，加入適量稀釋劑超聲溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為熱破壞溶液。取苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，置10mL量瓶中，加入稀釋劑2mL,超聲5min,取出，放冷，加入2mol·L取苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，置10mL量瓶中，加入稀釋劑2mL,超聲5min,取出，放冷，加入2mol·L取苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，置10mL量瓶中，加入稀釋劑2mL,超聲5min,取出，放冷，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%過氧化氫溶液2mL,80℃水浴1h,冷卻后稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為氧化破壞溶液。取苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，置10mL量瓶中，加入稀釋劑2mL,超聲5min,取出，放冷，稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，于4500lx光照10d后，取出，濾過，取續(xù)濾液作為光破壞溶液。精密量取上述溶液各20μL,按“2.2.1”條色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖3。結(jié)果顯示，各降解產(chǎn)物均能與主成分達(dá)到良好分離，且主成分色譜峰峰純度大于99.9%。2.3.2線性和域精密量取苯磺酸氨氯地平各雜質(zhì)對照品貯備液適量，用稀釋劑稀釋成一系列的線性溶液，以各雜質(zhì)峰面積(2.3.3儀器精密度試驗(yàn)精密量取混合雜質(zhì)對照品溶液20μL,連續(xù)進(jìn)樣6次。按照表2順序各雜質(zhì)峰面積的RSD依次分別為1.8%、1.1%、0.9%、1.9%、1.9%、1.6%、0.8%、2.0%、0.66%、0.9%、1.7%、2.1%、0.9%,均小于3.0%,表明儀器精密度良好。2.3.4定量限和檢測限將各雜質(zhì)對照品貯備液逐級稀釋，精密量取20μL進(jìn)行檢測，以信噪比(S/N)為10的濃度作為雜質(zhì)定量限，信噪比(S/N)為3的濃度作為雜質(zhì)檢測限。按照表2順序各雜質(zhì)的檢測限依次分別為55.6、18.9、72.4、101.4、66.7、11.6、12.9、17.0、5.0、14.4、19.2、25.8、18.8μg·L2.3.5面積的變化率取混合雜質(zhì)對照品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10、12h取樣，精密量取20μL,按“2.2.1”條色譜條件進(jìn)樣分析，測定并計算各雜質(zhì)峰面積的變化率RE。在12h內(nèi)混合雜質(zhì)對照品溶液各雜質(zhì)峰面積的變化率RE均在±3.0%范圍內(nèi)，表明混合雜質(zhì)對照品溶液室溫放置12h內(nèi)穩(wěn)定。取供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10、12h取樣，精密量取20μL,在“2.2.1”條色譜條件進(jìn)樣分析，雜質(zhì)B、D、G、19、20均低于定量限，測定并計算雜質(zhì)8的峰面積的變化率RE,其他已知雜質(zhì)未檢出。在2h內(nèi)供試品溶液中雜質(zhì)8的峰面積的變化率RE在±3.0%范圍外，表明供試品溶液需臨用新制。2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果取同一批苯磺酸氨氯地平片細(xì)粉6份(約相當(dāng)于氨氯地平10mg),精密稱定，分別置10mL量瓶中，加稀釋劑適量，超聲5min使苯磺酸氨氯地平溶解，取出，放冷，分別加入各雜質(zhì)對照品貯備液適量，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，配制成與混合雜質(zhì)對照品溶液中各雜質(zhì)質(zhì)量濃度相同的溶液，濾過，以外標(biāo)法計算各雜質(zhì)含量的RSD,按照表2順序依次分別為1.0%、0.73%、1.0%、1.8%、1.2%、0.72%、0.76%、0.45%、0.35%、0.66%、1.8%、1.0%、1.1%,均小于3.0%,該方法重復(fù)性良好。2.3.7回收率的測定稱取9份苯磺酸氨氯地平片處方比例的空白輔料適量，置10mL量瓶中，分別加入各雜質(zhì)對照品儲備液，配制成“2.1.6”混合雜質(zhì)對照品溶液中各雜質(zhì)對照品濃度的80%、100%、120%,用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為低、中、高三個質(zhì)量濃度的9份回收率樣品溶液。在“2.2.1”條色譜條件下進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計算各雜質(zhì)低、中、高質(zhì)量濃度的平均回收率和RSD(%),結(jié)果見表3。各雜質(zhì)在低、中、高三個質(zhì)量濃度下的回收率均在90%～108%之間，且平均回收率RSD(%)均小于3.0%,該方法準(zhǔn)確度良好。2.3.8耐用性試驗(yàn)取供試品溶液、對照溶液和系統(tǒng)適用性溶液，分別考察流速±0.1mL·min2.4雜質(zhì)含量測定取三批苯磺酸氨氯地平片(批號：20190110、20190111、20190112),按“2.1”條方法分別制備供試品溶液和對照溶液。精密量取混合雜質(zhì)對照品溶液和上述供試品溶液、對照溶液各20μL,在“2.2.1”條色譜條件進(jìn)行樣品檢測，以外標(biāo)法計算已知雜質(zhì)含量，以主成分自身稀釋對照法計算總雜質(zhì)含量。三批苯磺酸氨氯地平片中，雜質(zhì)B、D、G、8、19、20小于定量限，其他已知雜質(zhì)未檢出，且總雜質(zhì)含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次分別為0.048%、0.046%、0.044%,均低于限度(0.6%),三批苯磺酸氨氯地平片符合要求。3討論3.1色度條件的選擇《中華人民共和國藥典》3.2稀釋劑和稀釋劑的選擇存試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，使用流動相稀釋樣品時，樣品易降解產(chǎn)生新雜質(zhì)。同時，以甲醇-水代替流動相制備樣品溶液時，采集的色譜圖與原色譜圖一致，所以選擇甲醇-水作為稀釋劑，但二者比例不同時，采集的色譜圖也不同。以空白溶劑干擾試驗(yàn)篩選了甲醇-水(體積比80∶20、70∶30、63∶37、60∶40、50∶50)等五種不同比例的稀釋劑，最終選擇無干擾且無梯度峰的甲醇-水(體積比60∶40)作為稀釋劑。3.3雜質(zhì)及總雜質(zhì)含量參照《中華人民共和國藥典》與《歐洲藥典》,采用外標(biāo)法計算13種已知雜質(zhì)的含量，采