第二章中藥制劑樣品預(yù)處理

作用將被測成分有效地從樣品中釋放出來，并制成便于分析測定的穩(wěn)定試樣。除去雜質(zhì)、純化樣品，以提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度。富集濃縮或進(jìn)行衍生化，以測定低含量被測成分。衍生化不僅可提高檢測器的靈敏度，還可以提高方法的選擇性。使試樣的形式及所用溶劑符合分析測定的要求。步驟：第一節(jié)樣品預(yù)處理的常用方法

樣品的預(yù)處理包括取樣過程中對固體樣品的粉碎和制備供試品過程中的提取和分離凈化。粉碎提取分離凈化1.保證所取樣品均勻而有代表性，提高測定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度。樣品的粉碎目的2.加速被測定組分的提取完全。最粗粉指能全部通過一號篩，但混有能通過三號篩不超過20%的粉末粗粉指能全部通過二號篩，但混有能通過四號篩不超過40%的粉末中粉指能全部通過四號篩，但混有能通過五號篩不超過60%的粉末細(xì)粉指能全部通過五號篩，并含能通過六號篩不少于95%的粉末最細(xì)粉指能全部通過六號篩，并含能通過七號篩不少于95%的粉末極細(xì)粉指能全部通過八號篩，并含能通過九號篩不少于95%的粉末篩號孔徑目數(shù)1號篩2000±70μm10目2號篩850±29μm24目3號篩355±13μm50目4號篩250±9.9μm65目5號篩180±7.6μm80目6號篩150±6.6μm100目7號篩125±5.8μm120目8號篩90±4.6μm150目9號篩75±4.1μm200目目數(shù)是指物料的粒度或粗細(xì)度，一般定義是指在1英寸*1英寸的面積內(nèi)有多少個(gè)網(wǎng)孔數(shù)粉碎時(shí)需注意：1.避免過細(xì)2.避免樣品受污染3.避免粉塵飛散及揮發(fā)性成分的損失4.避免丟棄不易通過篩孔的部分顆粒常用設(shè)備粉碎機(jī)研缽玻璃勻漿器高速勻漿機(jī)關(guān)鍵——提取完全提取方法

溶劑提取法水蒸汽蒸餾法超臨界流體萃取升華法微波輔助萃取萃取冷浸回流連續(xù)回流超聲樣品的提取又稱溶劑萃取或液液萃取，亦稱抽提，是利用系統(tǒng)中組分在溶劑中有不同的溶解度來分離混合物。萃取優(yōu)點(diǎn)：方便快捷分配比越大，效果越好冷浸法稱取一定量樣品置于帶塞容器內(nèi)，搖勻后放置，浸泡提取,取浸泡后的溶液測定有效成分。溶劑用量為樣品重量的10～50倍浸泡時(shí)間12～24小時(shí)冷浸法最為簡單，尤其適合家庭配制藥酒。(1)取本品（白芍）粉末0.5g，加乙醇10ml，振搖5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。

部分測定法（等量法）：即將浸泡后的溶液，用適宜濾器濾過，精密量取一定體積，與一定樣品重量相當(dāng)，進(jìn)行測定。全部測定法（總量測定法）：將浸泡后的溶液濾過，濾渣充分用溶劑洗滌至提取完全，合并濾液及洗液，濃縮或蒸干，殘留物用另一溶劑溶解，定量轉(zhuǎn)入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行測定。注意：此法不適宜揮發(fā)性較大的提取溶劑注意：轉(zhuǎn)移完全

優(yōu)點(diǎn)適于熱不穩(wěn)定樣品操作簡單提取雜質(zhì)少缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)費(fèi)溶劑本法是以有機(jī)溶劑作溶媒，用回流裝置，加熱回流提取，提取至一定時(shí)間后，濾出提取液，經(jīng)處理后制成供試品溶液。萬應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測定（2010版藥典）在HCl-70%乙醇（1:100）溶液30ml，加熱回流1h回流提取法(2)取本品（石菖蒲）粉末0.2g，加石油醚(60～90℃)20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)邮兔?60～90℃)1ml使溶解，作為供試品溶液。1、提取雜質(zhì)較多；2、不適于對熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分。

優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)1、提取效率高于冷浸法；2、提取時(shí)間縮短，每次0.5～2小時(shí)，至提取完全為止。樣品置索氏提取器中，利用遇熱可以揮發(fā)的溶劑進(jìn)行反復(fù)提?。ㄏ喈?dāng)于總是在使用新鮮溶劑提取），一般提取數(shù)小時(shí)方可完全。保和丸（陳皮等）中橙皮甙測定（2010版藥典）樣品5g，加甲醇80ml，加熱回流至提取液無色為止連續(xù)回流提取法（索氏提取）索氏提取器(3)取本品細(xì)粉0.25g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，浸泡15小時(shí)，加熱回流提取至提取液無色?；厥杖軇┲粮桑瑲?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。受熱易分解的成分不宜使用。

優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)1、無需過濾，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶劑，再用適宜溶劑溶解，定容，進(jìn)行測定。2、效率高，溶劑少，雜質(zhì)少?；亓髋c連續(xù)回流裝置對比樣品置適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤胩崛∪軇?，放入超聲振蕩器（超聲波清洗器）中進(jìn)行提取。保濟(jì)丸（厚樸等）中厚樸酚測定（2010版藥典）取樣品1g，石油醚（30-60℃），超聲處理（功率500W，頻率33kHz）2次（100ml，50ml），每次30min超聲提取法(4)取本品（冬凌草）粉末1g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。

※注明超聲波的頻率、功率，以保證重現(xiàn)性優(yōu)點(diǎn)：超聲提取能使樣品粉末更好地分散于溶劑中提高提取效率和提取速度。（超聲的助溶作用）缺點(diǎn)：促使化學(xué)反應(yīng)發(fā)生（如氧化還原反應(yīng)、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。水蒸氣蒸餾指將含有揮發(fā)性成分的植物材料與水共蒸餾，使揮發(fā)性成分隨水蒸氣一并餾出，經(jīng)冷凝分取揮發(fā)性成分的浸提方法。適用：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、在水中穩(wěn)定且難溶或不溶于水的植物活性成分的提取。直接法間接法超臨界流體萃取超臨界流體萃取法（SFE）就是利用超臨界流體為溶劑，從固體或液體中萃取出某些有效組分，并進(jìn)行分離的一種技術(shù)。超臨界流體（SF）是指某種氣體（液體）或氣體（液體）混合物在操作壓力和溫度均高于臨界點(diǎn)時(shí)，使其密度接近液體，而其擴(kuò)散系數(shù)和黏度均接近氣體，其性質(zhì)介于氣體和液體之間的流體。升華法某些固體物質(zhì)如水楊酸、苯甲酸、樟腦等受熱在低于其熔點(diǎn)的溫度下，不經(jīng)過熔化就可直接轉(zhuǎn)化為蒸氣，蒸氣遇冷后又凝結(jié)為固體稱為升華。中藥中有一些成分具有升華性質(zhì)，能利用升華的方法直接從中藥中提取出來。從樟木中升華的樟腦，在《本草綱目》中已有詳細(xì)記載，為世界上最早應(yīng)用升華法制取藥材有效成分的記述。微波輔助萃取微波輔助萃?。∕AE）是將樣品置于不吸收微波的容器中，用微波加熱，進(jìn)行萃取的一種方法。樣品的分離凈化關(guān)鍵——保留有效成分提取液大多還需進(jìn)一步分離凈化，除去干擾組分后才可進(jìn)行測定。常用的分離凈化方法有以下幾種，萃取法、蒸餾法、色譜法、沉淀法、鹽析法、消化法。其中萃取和蒸餾既是提取方法，也是分離凈化方法。萃取法蒸餾法沉淀法色譜法鹽析法

消化法分離凈化方法原則：從提取液中除去對測定有干擾的雜質(zhì)，而又不損失被測定成分依據(jù)：被測定成分和雜質(zhì)在理化性質(zhì)上的差異，結(jié)合測定方法的要求注意：

1）過量的試劑若干擾被測組分的測定，則應(yīng)設(shè)法除去；

2）大量雜質(zhì)以沉淀形式除去時(shí)，被測成分不應(yīng)產(chǎn)生共沉淀而損失；

3）被測組分生成沉淀時(shí)，其沉淀經(jīng)分離后可重新溶解或直接用重量法測定。沉淀法沉淀法是基于某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液以得到凈化的方法。產(chǎn)婦康顆粒中水蘇堿的含量測定（2010版藥典）利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。

色譜法按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜其中，微柱色譜設(shè)備簡單，使用方便、快速，凈化效率高，最常用。當(dāng)目標(biāo)物與填料極性相似時(shí)，樣品流過柱后，目標(biāo)物在填料上有較好的保留，而極性與填料相差較遠(yuǎn)的雜質(zhì)直接流出，再用適當(dāng)洗脫液把目標(biāo)物洗脫、收集，分析；或使雜質(zhì)保留于柱上，直接洗脫被測成分進(jìn)行測定。微柱色譜，也稱固相萃取或液-固萃?。↙SE）柱的大?。洪L5～15cm，內(nèi)徑0.5～1cm原理硅膠、氧化鋁鍵合相硅膠大孔樹脂聚酰胺硅藻土、纖維素離子交換樹脂

填料硅膠作用機(jī)制：溶質(zhì)在吸附劑表面的極性吸附作用。非極性或極性低的雜質(zhì)先被洗出色譜柱，再用適當(dāng)極性的溶劑洗脫被測成分，而強(qiáng)極性的雜質(zhì)仍保留在柱上。特點(diǎn)：通常適于酸性和中性物質(zhì)的分離；如分離堿性物質(zhì)，可在展開劑中加入少量稀堿。氧化鋁

分離機(jī)制：溶質(zhì)在吸附劑表面的極性吸附作用堿性氧化鋁適于堿性和中性物質(zhì)的分離酸性氧化鋁適于分析酸性和中性物質(zhì)中性氧化鋁能將黃酮類成份吸附在柱上，可用于生物堿、苷的分離。八寶坤順丸中國藥典2010年版

對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，取約2g，精密稱定，精密加入70%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，通過中性氧化鋁柱（100~200目，2g，內(nèi)徑1cm，用50%甲醇濕法裝柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脫，收集洗脫液至近刻度，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液10ul與供試品溶液10~15ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每丸含白芍以芍藥苷計(jì)，不得少于2.6mg。鍵合相硅膠

十八烷基鍵合相硅膠（簡稱C18或ODS）借助化學(xué)反應(yīng)方法將固定液的官能團(tuán)鍵合在硅膠的表面而構(gòu)成鍵合相硅膠。常用于脂溶性和水溶性成分的分離，如苷元和苷的分離。操作:活化----2ml甲醇沖洗以潤濕鍵合相和除去雜質(zhì)，再以0.5ml水洗去柱中甲醇。上樣----將樣品用一定的溶劑溶解轉(zhuǎn)移入柱。清洗----最大程度除去干擾物（2-5ml水）。洗脫----用小體積的溶劑（2-5ml甲醇）將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。

大孔樹脂特點(diǎn)：表面積大，傳質(zhì)速率較高，具有不同的極性及適于吸附較大分子。

極性：丙稀酰胺聚合物非極性：苯乙烯和二乙烯苯的共聚物極性化合物非極性水溶性成分吸附

樹脂在使用前需要前處理：用甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時(shí)還需用酸、堿清洗。該填料用量常為1～2g，有時(shí)也用100～150mg來萃取血、尿中藥物。測定復(fù)方歸芪劑中的黃芪甲苷用大孔樹脂除去水溶性的多糖雜質(zhì)，再用30%乙醇洗脫黃芪甲苷。

聚酰胺測定黃酮時(shí)，用樣品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分雜質(zhì)，以95%乙醇洗脫總黃酮后測定。

機(jī)制：主要通過與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離。硅藻土、纖維素

機(jī)制：分配作用應(yīng)用：多以水基質(zhì)液為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，較親脂的成分從固定相轉(zhuǎn)移到流動(dòng)相，而被洗脫。硅藻土和纖維素是常用的親水型填料。離子交換樹脂弱酸性藥物：中性和堿性條件下用陰離子交換樹脂柱，水及有機(jī)溶劑洗脫后，酸性溶液洗脫目標(biāo)成分（堿性藥物則與之相反）離子交換樹脂可除去樣品中的離子，防止組分分解，用于萃取樣品液中可解離化合物。例益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的鑒別

取本品10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，…加在強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱（732Na-型，內(nèi)徑0.9cm，柱長12cm）上，以水洗至流出液近無色，棄去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脫，收集洗脫液…作為供試品溶液。濕化消化（強(qiáng)酸腐蝕）

A硝酸-高氯酸法

B硝酸-硫酸法

C硫酸-硫酸鹽法干法消化（高溫?zé)胱疲y定中藥制劑中的無機(jī)元素,采用消化法破壞有機(jī)物質(zhì)。消化法硝酸-高氯酸法：適用于血、尿、生物組織等生物樣品和含動(dòng)植物藥制劑的破壞，經(jīng)破壞后所得無機(jī)離子均為高價(jià)態(tài)離子，對含氮雜環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。硝酸-硫酸法：適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，無機(jī)金屬離子均氧化成高價(jià)態(tài)。與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采用此法。硫酸-硫酸鹽法：經(jīng)本法破壞所得金屬離子，多為低價(jià)態(tài)。常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞。

濕法消化法

儀器：凱氏瓶試劑：優(yōu)級純水：去離子水或高純水瓶頸長耐高溫干法消化法

操作：將適量樣品置于坩鍋中，常加無水Na2CO3或輕質(zhì)MgO等以助灰化，混勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。

將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)分解的目的，本法不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)樣品的破壞。1）灼燒溫度在420℃以下，以免某些被測金屬化合物的揮發(fā)。2）檢查灰化是否完全，可將灰分放冷后，加入稍過量的稀HCl-水（1:3）或硝酸-水（1:3）溶液，振搖。若呈色或有不溶有機(jī)物，可于水浴上將溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼燒。3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但此時(shí)切勿棄去。注意第二節(jié)中藥各劑型樣品的預(yù)處理特點(diǎn)固體中藥制劑預(yù)處理特點(diǎn)丸劑片劑散劑顆粒劑栓劑滴丸劑丸劑預(yù)處理的特點(diǎn)直接研碎或粉碎水蜜丸、水丸、糊丸、蠟丸蜜丸含有相當(dāng)多的蜂蜜不能直接研碎或粉碎，切成小塊，可直接加溶劑進(jìn)行提取或加入硅藻土進(jìn)行特殊處理后進(jìn)行提取。片劑預(yù)處理的特點(diǎn)片劑粉碎過篩提取糖衣片需去糖衣散劑的預(yù)處理特點(diǎn)散劑中一般使用藥材粉末，很多成分仍保留在被粉碎的藥材組織中，而且分布也不均勻，所以在分析取樣時(shí)應(yīng)注意樣品的代表性。滴丸劑預(yù)處理特點(diǎn)基質(zhì)的存在對滴丸的分析影響較大，因此，在分析前，必須先將基質(zhì)與被檢測成分分離，。對一些酸堿性指標(biāo)成分，可通過酸化或堿化處理，讓其游離或成鹽后，用水或有機(jī)溶劑萃取，從而達(dá)到與基質(zhì)分離的目的。顆粒劑預(yù)處理的特點(diǎn)顆粒劑全部為藥材提取物用適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行溶解或提取含藥材細(xì)粉注意提取溶劑的滲透性，可采用超聲提取法或回流提取法栓劑預(yù)處理的特點(diǎn)基質(zhì)的存在會干擾分析結(jié)果，除去基質(zhì)的方法有：

將栓劑與硅藻土等惰性材料混合、研勻，轉(zhuǎn)入回流提取器中，用適宜的溶劑回流提取，親水性基質(zhì)一般用有機(jī)溶劑提取，油脂性基質(zhì)一般用水或烯醇提取。油脂性基質(zhì)還可將栓劑切成小塊加適量水，于溫水浴上加熱使其融化，攪拌一定時(shí)間，置冰浴中使基質(zhì)凝固，將水溶液濾出，如此反復(fù)2-3次，可將水溶性成分提取出來。半固體中藥制劑的預(yù)處理特點(diǎn)半固體中藥包括流浸膏劑、浸膏劑、糖漿劑和煎膏劑。流浸膏劑和浸膏劑預(yù)處理的特點(diǎn)當(dāng)二者由單味藥組成時(shí)，相對雜質(zhì)較少，個(gè)別制劑可經(jīng)稀釋后直接測定。若雜質(zhì)較多需要凈化處理時(shí)，可采用稀釋后萃取法、回流提取法及柱色譜分離法等，有時(shí)還需考慮所加液體或固體稀釋劑可能產(chǎn)生的干擾。

糖漿劑預(yù)處理的特點(diǎn)分離、凈化的方法有溶劑萃取法、柱層析法。糖漿劑因含較多的蔗糖，溶液較為粘稠，分