兩種麻醉劑對克氏原螯蝦幼蝦呼吸與排泄的影響

用于水生動物生產(chǎn)過程中使用的麻醉劑有很多，包括ms-222、t香酚、苯丙胺和禮賓卡因。其中，ms-222和t香酚是常用的麻醉劑。克氏原螯蝦Procambarusclarkii又稱小龍蝦、淡水龍蝦,隸屬于甲殼綱Crustacea、十足目Decapoda、螯蝦科Cabaridae、原螯蝦屬Procambarus,原產(chǎn)于墨西哥北部和美國南部,后發(fā)展至夏威夷、日本、歐洲和尼羅河流域,大約在20世紀(jì)30年代末期由日本引入中國南京市,由于該蝦適應(yīng)性強(qiáng),對水質(zhì)要求不高,適宜淡水養(yǎng)殖,目前已在中國各大水系均有分布?？耸显r味道鮮美、營養(yǎng)豐富,深受消費(fèi)者喜愛,是中國重要的水產(chǎn)資源種類1材料和方法1.1麻醉溫度和時間試驗(yàn)蝦采自湖北潛江后湖某養(yǎng)殖場,選取體質(zhì)量為(4.18±0.54)g的健康克氏原螯蝦,在長江水產(chǎn)研究所循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)暫養(yǎng)兩周。飼養(yǎng)水為經(jīng)過濾后充分曝氣的自來水,水中溶氧為(7.0±0.3)mg/L,水溫為(18±1)℃,pH為(7.6±0.2)。試驗(yàn)前1d停止喂食。試驗(yàn)用麻醉劑MS-222和丁香酚均購自武漢普洛斯試劑有限公司。MS-222水溶液略呈酸性,與碳酸氫鈉按質(zhì)量比為1∶1混合溶于水后使用,可降低麻醉過程中的應(yīng)激反應(yīng)。丁香酚為蒼黃色液體,不溶于水,可溶于酒精,使用時按質(zhì)量比為1∶5的比例溶于酒精后再溶于水試驗(yàn)裝置為自制的密封靜止水式呼吸測定儀,根據(jù)蝦體的大小選用2.5L的錐形試驗(yàn)瓶。采用保鮮膜密封口,不能產(chǎn)生氣泡,以恒溫水槽控溫,溫度誤差控制在±0.5℃。1.2方法1.2.1水生動物試驗(yàn)MS-222質(zhì)量濃度分別設(shè)置為0、20、40、60、80、100mg/L,丁香酚質(zhì)量濃度分別設(shè)置為0、8、16、24、32、40mg/L。每個錐形瓶中投放10尾克氏原螯蝦幼蝦,每個濃度試驗(yàn)設(shè)3個平行組,另設(shè)1個空白對照組(呼吸室無蝦),水溫為(18.0±0.5)℃。在暫養(yǎng)池內(nèi)隨機(jī)撈取試驗(yàn)蝦,放入清水中禁食1d后進(jìn)行正式試驗(yàn)。試驗(yàn)在15:00—17:00進(jìn)行,試驗(yàn)開始時將蝦快速放入試驗(yàn)瓶中,用虹吸法利用導(dǎo)管向試驗(yàn)瓶內(nèi)加水,直至瓶內(nèi)水量增加1倍,封口后將試驗(yàn)瓶放置在恒溫水槽中,并置于光線暗處。試驗(yàn)結(jié)束后,為使瓶里面的溶解氧和氨氮混合均勻,將試驗(yàn)瓶搖晃顛倒3~4次,用導(dǎo)管插入瓶底再利用虹吸原理快速采集水樣。分別采用Winkler氏碘量法和奈氏試劑法即時測定試驗(yàn)組和對照組試驗(yàn)瓶內(nèi)的溶解氧和氨氮濃度,用濾紙吸干蝦體水分,在電子天平上稱量其濕質(zhì)量(精確到0.01g)。1.2.2膜密封瓶口設(shè)計(jì)采用靜水呼吸室法,呼吸室為2.5L的錐形瓶,用保鮮膜密封瓶口,利用虹吸原理進(jìn)水和采集水樣。在呼吸室中放幼蝦10尾,并設(shè)3個平行,將試驗(yàn)瓶置于恒溫水槽中進(jìn)行試驗(yàn)。測定試驗(yàn)蝦死亡半數(shù)時的溶解氧濃度,作為該溫度下的窒息點(diǎn)。1.2.3氧率、排氨量、排氨率耗氧量[mg/(ind.·h)]、耗氧率[mg/(g·h)]、排氨量[μg/(ind.·h)]、排氨率[μg/(g·h)]計(jì)算公式分別為其中:B1.3eans.d.的分析試驗(yàn)結(jié)果均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±S.D.)表示,用Excel與SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,顯著性水平設(shè)為0.05。2結(jié)果與分析2.1無顯著性差異pMS-222對克氏原螯蝦耗氧率和耗氧量的影響如圖1所示,隨著MS-222濃度的升高,克氏原螯蝦耗氧率和耗氧量均呈先升高后下降的趨勢。與耗氧量相比,耗氧率更能反映其代謝水平變化。單因素方差分析表明:當(dāng)MS-222濃度為20mg/L時,克氏原螯蝦耗氧率高于0mg/L濃度組(對照組),但無顯著性差異(P>0.05);當(dāng)MS-222濃度為40mg/L時,克氏原螯蝦耗氧率顯著高于對照組和其他濃度組(P<0.05);隨著MS-222濃度的繼續(xù)升高,克氏原螯蝦耗氧率開始下降,MS-222濃度為60~100mg/L時與對照組無顯著性差異(P>0.05)。MS-222對克氏原螯蝦排氨率和排氨量的影響如圖2所示,隨著MS-222濃度的升高,克氏原螯蝦排氨率和排氨量均呈先升高后下降的趨勢。單因素方差分析表明:當(dāng)MS-222濃度為20mg/L時,克氏原螯蝦排氨率略高于對照組,但無顯著性差異(P>0.05);當(dāng)MS-222濃度為40mg/L時,克氏原螯蝦排氨率顯著高于對照組和其他濃度組(P<0.05);隨著MS-222濃度的繼續(xù)升高,克氏原螯蝦排氨率開始下降,MS-222濃度為60~100mg/L時與對照組均無顯著性差異(P>0.05),但100mg/L濃度組排氨率顯著低于20~60mg/L濃度組(P<0.05)。2.2克氏原螯蝦幼蝦耗氧率丁香酚對克氏原螯蝦耗氧率和耗氧量的影響如圖3所示,隨著丁香酚濃度的升高,克氏原螯蝦耗氧率和耗氧量呈先升高后下降的趨勢。單因素方差分析表明:當(dāng)丁香酚濃度為8mg/L時,克氏原螯蝦耗氧率略高于對照組,但無顯著性差異(P>0.05);當(dāng)丁香酚濃度為16~24mg/L時,克氏原螯蝦耗氧率顯著高于對照組(P<0.05);隨著丁香酚濃度的繼續(xù)升高,克氏原螯蝦耗氧率開始下降,丁香酚濃度為32mg/L時,耗氧率與對照組無顯著性差異(P>0.05),而濃度為40mg/L時,耗氧率顯著低于對照組和其他濃度組(P<0.05)。丁香酚對克氏原螯蝦排氨率和排氨量的影響如圖4所示,隨著丁香酚濃度的升高,丁香酚對克氏原螯蝦排氨率和排氨量呈先升高后下降的趨勢。單因素方差分析表明:當(dāng)丁香酚濃度為8mg/L時,克氏原螯蝦排氨率高于對照組,但無顯著性差異(P>0.05);當(dāng)丁香酚濃度為16~24mg/L時,克氏原螯蝦排氨率顯著高于對照組(P<0.05);隨著丁香酚濃度的繼續(xù)升高,克氏原螯蝦排氨率開始下降,丁香酚濃度為32mg/L時,排氨率與對照組無顯著性差異(P>0.05),而濃度為40mg/L時,排氨率顯著低于對照組(P<0.05)。2.3丁香酚組的死蝦試驗(yàn)3h時對照組蝦開始死亡,4h時MS-222組開始出現(xiàn)死蝦,最后是丁香酚組。麻醉對克氏原螯蝦窒息點(diǎn)的影響見表1,其窒息點(diǎn)依次為丁香酚組>MS-222組>對照組,且各組間有顯著性差異(P<0.05)。3討論3.1ms-32對克氏原螯蝦幼蝦耗氧率、排氨率的影響水生動物的代謝活動多與氧的利用密切相關(guān),耗氧率可以直接或間接地反映其新陳代謝和生理狀況。對水生動物耗氧率的測定不僅可以為動物生理學(xué)提供基礎(chǔ)資料,在養(yǎng)殖過程中也有一定的應(yīng)用價(jià)值本研究中同時測量了克氏原螯蝦的耗氧量與耗氧率、排氨量與排氨率,試驗(yàn)結(jié)果顯示,雖然同一個體的耗氧量與耗氧率、排氨量與排氨率的變化規(guī)律是一致的,但在試驗(yàn)中,由于試驗(yàn)個體的體質(zhì)量差異和計(jì)算方式不同,進(jìn)行群體統(tǒng)計(jì)時耗氧率和排氨率更能明顯地反映其生理變化。本試驗(yàn)中,濃度為20~100mg/L的MS-222不能降低克氏原螯蝦的耗氧率,雖然濃度為100mg/L的MS-222可以降低其排氨率,但與對照組相比無顯著性差異,這表明,MS-222對克氏原螯蝦基本無麻醉作用,這與MS-222對羅氏沼蝦經(jīng)不同濃度的丁香酚麻醉后,克氏原螯蝦的耗氧率和排氨率均呈先升高后降低趨勢。低濃度麻醉時,克氏原螯蝦的耗氧率和排氨率均升高,其原因是低濃度的麻醉劑對克氏原螯蝦產(chǎn)生一定的脅迫作用,造成蝦的活動增多,同時新陳代謝的強(qiáng)度增大。而高濃度麻醉時,克氏原螯蝦的耗氧率和排氨率降低,原因是丁香酚使克氏原螯蝦進(jìn)入麻醉過程的各個時期,蝦的耗氧率和排氨率均呈不同程度的下降,其中40mg/L濃度組蝦的耗氧率及排氨率均顯著低于對照組。對羅氏沼蝦及日本對蝦的麻醉行為和復(fù)蘇時間進(jìn)行的研究也表明,丁香酚也可以使羅氏沼蝦及日本對蝦進(jìn)入麻醉狀態(tài),對其有麻醉效果研究表明,蝦類在麻醉劑選擇范圍上比魚類要狹隘。在運(yùn)輸上,合適劑量的麻醉劑尤其是關(guān)鍵,若麻醉劑濃度較低,蝦不能進(jìn)入麻醉狀態(tài),達(dá)不到應(yīng)有的效果;若麻醉劑濃度過高,則可能對克氏原螯蝦造成潛在的傷害,并造成損失。本研究表明,丁香酚質(zhì)量濃度為40mg/L時