天然藥物化學(xué)天然藥化教研室

第五章黃酮類化合物

（Flavonoids）1天然藥物化學(xué)第五章黃酮類化合物

第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分

苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。苷及極性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取。提取黃酮苷類成分時(shí)，應(yīng)避免發(fā)生水解，可按一般苷的提取方法先破壞酶的活性。(1)溶劑萃取法（系統(tǒng)分離法）-極性(2)堿提取酸沉淀法-酸性(3)炭粉吸附法

2第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分苷元：用氯仿、乙醚、乙酸第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（一）溶劑萃取法——利用化合物的極性藥材水或醇-水，加熱提取提取液濃縮，加3~4倍量醇（水提醇沉法）醇水液沉淀（水雜）濃縮，回收醇，加水混懸水混懸液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚層(葉綠素胡蘿卜素脂溶性成分)氯仿層(黃酮苷元)乙酸乙酯層(極性大苷元極性小的苷)正丁醇層(黃酮苷)水層(多糖蛋白質(zhì))（系統(tǒng)溶劑萃取）3第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（一）溶劑萃取法——利用在60-70℃下用濃鹽酸調(diào)至pH3-4，靜置1hr，抽濾第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（二）堿提取酸沉淀法——利用化合物的酸性

原理：黃酮＋堿成鹽（溶于水）沉淀加酸槐花米粗粉加水，攪拌下加入石灰乳至pH8-9，微沸30min，趁熱抽濾殘?jiān)鼮V液濾液沉淀（粗制蘆?。┨J丁4在60-70℃下用濃鹽酸調(diào)至pH3-4，靜置1hr，抽濾第三第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（二）堿提取酸沉淀法——利用化合物的酸性

堿：Ca(OH)2水溶液、Na2CO3水溶液或稀NaOH溶液

（即石灰乳或石灰水）

使含酚羥基化合物成鹽溶解

使含COOH的果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)形成沉淀而除去提取時(shí)，堿性不宜過(guò)強(qiáng)，以免破壞黃酮母核；酸化時(shí)，酸性不宜過(guò)強(qiáng)，以免形成鹽而溶解。5第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（二）堿提取酸沉淀法——第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（三）炭粉吸附法——主要用于黃酮苷的精制藥材甲醇提取物分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至上清液無(wú)黃酮反應(yīng)，過(guò)濾吸苷炭末濾液依次用沸水、沸甲醇、7%苯酚/水、15%酚/醇溶液進(jìn)行洗脫沸水洗脫液沸甲醇洗脫液7%苯酚/水洗脫液15%酚/醇洗脫液濃縮，加乙醚萃取

乙醚層（酚）水層（黃酮苷）6第三節(jié)提取與分離一、提取與粗分（三）炭粉吸附法——主要第三節(jié)提取與分離二、分離化合物的性質(zhì)極性

——

硅膠酸性

——

pH梯度萃取、離子交換樹脂形成氫鍵的能力——

聚酰胺

分子大小

——

葡聚糖凝膠

特殊結(jié)構(gòu)——

金屬鹽絡(luò)合（如鄰二酚羥基）

7第三節(jié)提取與分離二、分離化合物的性質(zhì)極性——硅膠酸性第三節(jié)提取與分離二、分離（一）柱色譜法1、硅膠柱色譜主要用于分離弱極性和中等極性的化合物，應(yīng)用最為廣泛。吸附規(guī)律：極性大的物質(zhì)易于被吸附一般洗脫順序：苷元＞單糖苷＞雙糖苷＞多糖苷8第三節(jié)提取與分離二、分離（一）柱色譜法1、硅膠柱色譜主第三節(jié)提取與分離二、分離2、聚酰胺柱色譜吸附原理：氫鍵締合洗脫順序規(guī)律：（先→后）（1）苷元相同，三糖苷＞雙糖苷＞單糖苷＞苷元（2）母核上羥基增加，洗脫速度減慢（3）羥基數(shù)目相同，有締合羥基＞無(wú)締合羥基（4）不同類型黃酮化合物，異黃酮＞二氫黃酮醇＞黃酮＞黃酮醇

（5）分子中芳香核、共軛雙鍵多則易被吸附，故查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。

9第三節(jié)提取與分離二、分離2、聚酰胺柱色譜吸附原理：氫鍵用醇水系統(tǒng)時(shí)相當(dāng)于反相色譜：RfＣ>Ｂ>Ａ,符合前述規(guī)律用氯仿甲醇系統(tǒng)相當(dāng)于正相色譜：RfＡ>Ｂ>Ｃ“雙重色譜”（了解）如：A苷元B單糖苷C二糖苷10用醇水系統(tǒng)時(shí)相當(dāng)于反相色譜：RfＣ>Ｂ>Ａ,符合前述規(guī)下列黃酮化合物：（1）用聚酰胺柱色譜，含水甲醇梯度洗脫，（2）用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，分別寫出洗脫順序D練習(xí)：ABCE聚酰胺：D>E>C>B>A硅膠：A>B>C>D>E11下列黃酮化合物：D練習(xí)：ABCE聚酰胺：D>E>C第三節(jié)提取與分離二、分離3、葡聚糖凝膠柱色譜常用型號(hào)：SephadexLH-20分離原理：黃酮苷——分子篩，按分子量由大到小的順序流出柱體。黃酮苷元——吸附作用，取決于游離酚羥基的數(shù)目（與位置無(wú)關(guān)），苷元的羥基數(shù)越多,越難洗脫。問(wèn)題:黃酮苷與游離黃酮的洗脫順序？12第三節(jié)提取與分離二、分離3、葡聚糖凝膠柱色譜常用型號(hào)：第三節(jié)提取與分離二、分離黃酮類化合物在SephadexLH-20(甲醇)上的Ve/V0黃酮類化合物取代圖式Ve/V0芹菜素5,7,4'-三羥基5.3木樨草素5,7,3',4'-四羥基6.3槲皮素3,5,7,3',4'-五羥基8.3楊梅素3,5,7,3',4',5'-六羥基9.2山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-蕓香糖苷雙糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷單糖苷4.9苷元的羥基數(shù)越多，越難以洗脫；苷的分子量越大，連接糖的數(shù)目越多，越容易洗脫。13第三節(jié)提取與分離二、分離黃酮類化合物在Sephadex第三節(jié)提取與分離二、分離3、葡聚糖凝膠柱色譜常用洗脫劑：（1）醇或含水醇，如甲醇、甲醇-水、乙醇等。（2）其它溶劑：如丙酮-水、氯仿-甲醇等。進(jìn)行洗脫劑更換時(shí)，要注意不同溶劑對(duì)填料的溶脹度差別不能過(guò)大。14第三節(jié)提取與分離二、分離3、葡聚糖凝膠柱色譜常用洗脫劑7,4'-二OH＞7-或4'-OH＞一般酚OH＞5-OH第三節(jié)提取與分離二、分離（二）梯度pH萃取法適于分離酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元酸性：溶于NaHCO3中溶于Na2CO3中溶于不同濃度NaOH中157,4'-二OH＞7-或4'-OH＞一般酚O第三節(jié)提取與分離二、分離（二）梯度pH萃取法樣品乙醚液5%NaHCO3堿液（7,4'-二羥基黃酮）乙醚液5%Na2CO3堿液（7或4'-羥基黃酮）乙醚液0.2%NaOH堿液（一般羥基黃酮）乙醚液4%NaOH堿液（僅含3-OH或5-OH黃酮）乙醚液（脂雜