實(shí)驗(yàn)一顯微鏡構(gòu)造和使用及微生物檢測(cè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法，重點(diǎn)掌握普通光學(xué)顯微鏡油鏡的使用。2.了解和利用普通光學(xué)顯微鏡油鏡對(duì)細(xì)菌、放線菌進(jìn)行個(gè)體形態(tài)觀察。3.觀察并比較不同來源的微生物生長(zhǎng)的數(shù)量和類型。二、實(shí)驗(yàn)原理1.油鏡使用香柏油原理：1）.增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)100Χ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強(qiáng)度卻最大。從承載標(biāo)本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進(jìn)入空氣，再進(jìn)入鏡頭），有些光線會(huì)因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，致使在使用油鏡時(shí)會(huì)因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時(shí)須在油鏡與玻片之間加入與玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油鏡（通常用香柏游，其折射率n=1.52）。2）.增加顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率或分辨力(resolutionorresolvingpower)是指顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間的最小距離的能力。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：（公式P16）式中λ=光波波長(zhǎng)；NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。光學(xué)顯微鏡的光源不可能超出可見光的波長(zhǎng)范圍（0.4--0.7μm），而數(shù)值孔徑值則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=n×sinα式中α為光線最大入射角的半數(shù)。它取決于物鏡的直徑和焦距，一般來說在實(shí)際應(yīng)用中最大只能達(dá)到120O，而n為介質(zhì)折射率。由于香柏油的折射率（1.52）比空氣及水的折射率（分別為1.0和1.33）要高，因此以香柏油作為鏡頭于玻片之間介質(zhì)的油鏡所能達(dá)到的數(shù)值孔徑值（NA一般在1.2~1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等干鏡（NA都低于1.0）。若以可見光的平均波長(zhǎng)0.55μm來計(jì)算，數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨出距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達(dá)到0.2μm左右。2．微生物檢測(cè)原理微生物的基本特點(diǎn)是微生物在自然界分布廣泛，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)亦不例外。由于其個(gè)體微小，絕大部分微生物是用肉眼看不到的，因此，只有通過微生物的大量繁殖形成微生物群體，即菌落，才能通過肉眼直觀地看到它們。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.油鏡觀察：（1）上升聚光器，全開虹彩光圈。（2）用粗調(diào)節(jié)輪提起鏡筒或下降載物臺(tái)，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。右手順時(shí)針方向慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)輪使鏡筒下降或載物臺(tái)上升，與此同時(shí)，從顯微鏡的側(cè)面觀察使油鏡浸入油中，直到幾乎與標(biāo)本接觸時(shí)為止。注意不要壓到標(biāo)本，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡頭。（3）從接目鏡內(nèi)觀察，進(jìn)一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)輪將鏡筒徐徐上升或?qū)⑤d物臺(tái)徐徐下降，直到視野內(nèi)出現(xiàn)物像為止，然后用細(xì)調(diào)節(jié)輪校正焦距。如油鏡已離開油面而仍未見物象，必須再?gòu)膫?cè)面觀察，將油鏡降下，重復(fù)操作至物象看清為止。2.環(huán)境中微生物的檢測(cè)熔化培養(yǎng)基→倒平板→冷卻→無(wú)菌接種（頭發(fā)、牙垢、指甲、手指觸摸、暴露空氣5’、其它）四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果；1.選繪三種細(xì)菌個(gè)體形態(tài)圖(鉛筆)2．觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征，并記錄結(jié)果。五、討論分析（完成指定的思考題和作業(yè)題）1.簡(jiǎn)述利用顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌、放線菌個(gè)體形態(tài)圖的方法參考答案：.顯微鏡是光學(xué)精密儀器，在使用時(shí)要特別小心，使用前要熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能，檢查各總零件是否完好無(wú)損。鏡身有無(wú)灰塵，鏡頭是否清潔，做好必要的清潔和調(diào)整工作。2.拿取顯微鏡必須一只手拿著鏡臂，一只手托著鏡座，并保持鏡身的上下垂直，應(yīng)避免震動(dòng)，輕放臺(tái)上。切不可一只手提起，以防顯微鏡、反光鏡功目鏡墜落。3.使用前應(yīng)將鏡身擦拭一遍、用擦鏡紙將鏡頭擦凈（切不可用手指擦抹）。若遇到鏡臺(tái)或鏡頭上有干香柏油，可用擦鏡紙沾取少量二甲苯將其擦去。4.使用時(shí)如發(fā)現(xiàn)顯微鏡操作不靈活或有損壞，不要擅自拆卸修理，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師處理。5.注意保護(hù)鏡頭，切不可壓碎標(biāo)本被片，損壞鏡頭6.顯微鏡使用完畢，應(yīng)登記顯微鏡使用卡經(jīng)指導(dǎo)教師檢查后放回鏡箱。六、改進(jìn)實(shí)驗(yàn)建議。實(shí)驗(yàn)參考網(wǎng)址:1/index.htm電話:Email:fswuguoming@4．6菌落特征觀察內(nèi)容（1）菌落大小用格尺測(cè)量菌落的直徑。大菌落（5mm以上）、中等菌落（3~5mm）、小菌落（1~2mm）、露滴狀菌落（1mm以下）。（2）表面形狀分光滑、皺褶、顆粒狀、龜裂狀、同心環(huán)狀等（圖9-1A）。（3）凸起情況分?jǐn)U展、扁平、低凸起、凸起、高凸起、臺(tái)狀、草帽狀、臍狀、乳頭狀等（圖9-1B）。（4）邊緣狀況分整齊、波浪狀、裂葉狀、齒輪狀、鋸齒形等（圖9-1A）。（5）菌落形狀分圓形、放射狀、假根狀、不規(guī)則狀等（圖9-1A）。（6）表面光澤分閃光、金屬光澤、無(wú)光澤等。（7）菌落質(zhì)地分油脂狀、膜狀、松軟（粘稠）、脆硬等。于酒精燈旁以無(wú)菌操作打開平皿蓋，用接種環(huán)挑動(dòng)菌落，判別菌落質(zhì)地是否為松軟或脆硬等。（8）菌落顏色分乳白色、灰白色、檸檬色、橘黃色、金黃色、玫瑰紅色、粉紅色等。注意觀察平皿正反面或菌落邊緣與中央部位的顏色不同。（9）透明程度分透明、半透明、不透明等。A.菌落的形狀及邊緣狀況1.圓形、邊緣整齊、表面光滑；2.不規(guī)則狀；3.邊緣波浪狀；4.邊緣鋸齒狀；5.同心圓狀；6.邊緣缺刻狀、表面呈顆粒狀；7.絲狀；8.假根狀B.菌落的凸起情況1.扁平、擴(kuò)展；2.低凸面，3.高凸面；4.臺(tái)狀；5.臍狀；6.草帽狀；7.乳頭狀；8.褶