糞便涂片

蘭州大學第一醫(yī)院檢驗科

朱海平

糞便涂片

蘭州大學第一醫(yī)院檢驗科

朱海平

糞便菌群涂片檢查臨床意義

糞便中細菌數(shù)量、形態(tài)種類、比例與腸道菌群處于平衡還是失調狀態(tài)有著密切的關系

糞便菌群涂片能快速診斷腸道菌群失調，為早期預防、治療提供線索糞便菌群涂片檢查臨床意義糞便中細菌數(shù)量、菌群失調

概念：指機體某部位正常菌群中菌種間的平衡被打破，菌種間的比例大幅度變化而超出正常范圍的狀態(tài)。這種狀態(tài)進一步發(fā)展，機體出現(xiàn)一系列臨床病癥和體征，稱為菌群失調癥或菌群交替癥菌群失調概念：指機體某部位正常菌群中菌種間的平衡被打

什么會使菌群失調呢？糞便涂片課件菌群失調的原因抗生素的不合理應用（除抗生素本身毒副作用外）是主要誘因，殺滅致病菌的同時也殺滅有益菌，破壞了正常的微生態(tài)平衡，引起菌群失調。疾?。何杆崛狈Α⒏斡不?、胃腸腫瘤等；其他：手術、激素、同位素、放射線和免疫抑制劑的大量使用，都可造成菌群失調菌群失調的原因抗生素的不合理應用（除抗生素本身毒副作用外）是腸道菌群的檢測方法糞便涂片：革蘭氏染色—G+紫黑色、G-淺紅色

顯微鏡觀察細菌的總數(shù)、形態(tài)、比例等培養(yǎng)：需氧菌—埃希氏菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬等腸道菌群的檢測方法一、糞便直接涂片的優(yōu)缺點

1、優(yōu)點：①設備簡單②操作簡單③時間短④形象直觀，直接了解糞便菌群的“像”，熟練者對診斷菌群失調有較高的準確性。

一、糞便直接涂片的優(yōu)缺點2、缺點：①檢驗者必須有一定的經(jīng)驗，否則易判斷錯誤②主要是定性檢查，確定分度較困難。

2、缺點：二、操作技術1、涂片：

將新鮮大便多處沾取直接涂抹在潔凈的玻片上，糞便不可稀釋以防細菌變形。標本務求新鮮，涂片厚薄適宜2、外觀

：肉眼檢查外觀顏色、形狀（若含有膜狀物的大便應補做艱難梭菌培養(yǎng)）

3、鏡檢

：染色技術是診斷準確成功的關鍵，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌要對比鮮明。鏡檢時應將涂片視野全面觀覽，切不可看幾個視野就計數(shù)或報告

二、操作技術1、涂片：

將新鮮大便多處沾取直接涂抹在潔凈

三、檢查方法

1、細菌總數(shù)

觀察菌群涂片首先要總覽細菌總數(shù)，通過“比例概數(shù)法”進行判斷。

了解涂片上細菌的數(shù)量是增多還是減少，有無優(yōu)勢菌或真菌。細菌總數(shù)過多的情況較少見或不易引起重視，菌群失調時細菌總數(shù)多在正常、減少或消失。

三、檢查方法

2、觀察革蘭氏陽性、陰性桿菌及球菌的

比率改變

G+桿菌：G-桿菌：G+球菌：G-球菌（包括球菌/桿菌）比率反映了糞便菌群的質素，它一般不受糞便稀釋或濃縮的影響，所以較細菌總數(shù)有更大的意義，更能反映菌群的本質和預后。

2、觀察革蘭氏陽性、陰性桿菌及球菌的

比率改變

3、計數(shù)方法

選定有代表性視野中的部分區(qū)域作細菌分類計數(shù)，需要數(shù)100～200個細菌以求得比例。不同年齡的人的比例都不一樣，一般桿菌與球菌比例約為75：25。

3、計數(shù)方法

各年齡組細菌比率平均值的正常參考值（%）

年齡

G+桿菌

G-桿菌G+球菌

G-球菌

1d：

30.7—61.5

38.5—60.9

0—2.2

0—0.01

2d：

60.0—71.6

34.8—36.9

3.0—3.5

0—0.01

3d：

66.9—82.7

16.0—31.4

1.3—1.6

0—0.05

5d：

85.5—87.51

11.0—12.8

1.4—1.7

0.08—0.4

半年：

82.1—96.4

2.3—15.8

0.5—2.6

0.2—1.1

1歲：

78.4—94.5

3.5—16.6

1.5—2.6

0.3—1.7

5歲：

51.7—86.3

10.6—37.7

2.0—13.2

1.1—5.4

10歲：

56.7—88.5

7.6—30.7

2.5—12.2

2.0—6.7

18—25歲：54.3—78.6

12.2—35.2

2.2—12.5

2.4—9.0

41—55歲：39.4—59.3

37.3—49.6

2.4—5.9

3.4—6.7

56—65歲：35.3—56.8

44.3—49.6

2.3—5.9

3.6—6.7

66歲：

34.5—55.2

26.1—49.6

2.8—10.9

3.3—7.4

各年齡組細菌比率平均值的正常參考值（%）年齡腸道菌群各類細菌的比例

G+桿菌%G-桿菌%G+球菌%G-球菌%正常范圍

50.2-7423.5-442-130.5-9較正常增多

75-85

45-50

25-30

5-10較正常明顯增多

＞85

＞50

＞30

＞10較正常明顯減少

35-40

30-35

＜10

＜5較正常顯著減少

＜20-30

＜15-20

＜2

＜1

桿菌：球菌（G+桿菌+G-桿菌：G+球菌+G-球菌）

3-10：1

腸道菌群各類細菌的比例細菌總數(shù)的評定標準每油鏡視野細菌數(shù)評價

(數(shù)個視野平均值）

<10顯著減少

11-100明顯減少

101-500略減少

501-5000正常＞5000顯著增多細菌總數(shù)的評定標準腸道菌群的種類

99.9%厭氧菌G+桿菌：雙歧桿菌、乳桿菌、梭狀芽胞桿菌（產(chǎn)氣莢膜桿菌、艱難梭菌、破傷風梭菌）等G-桿菌：脆弱擬桿菌等G+球菌：消化鏈球菌等G-球菌：韋榮球菌等腸道菌群的種類99.9%厭氧菌腸道菌群的種類0.1%需氧菌G+桿菌：

芽孢桿菌（枯草芽胞桿菌、臘樣芽胞桿菌）G-桿菌：

大腸桿菌、沙門菌、志賀菌、普通變形桿菌銅綠假單菌等G+球菌：

葡萄球菌、鏈球菌等G-球菌：

奈瑟菌G-彎曲菌：空腸彎曲菌

腸道菌群的種類0.1%需氧菌腸道菌群與人體健康1、有益菌或稱共生菌：雙岐桿菌、乳桿菌、優(yōu)桿菌等2、中間菌：腸球菌、大腸桿菌、擬桿菌等，有益，也有害3、有害菌：銅綠假單胞菌、葡萄球菌、梭狀芽胞桿菌等腸道菌群與人體健康1、有益菌或稱共生菌：雙岐桿菌、乳正常女嬰4個月，母乳喂養(yǎng)，蛋黃樣正常軟便，似純培養(yǎng)的革蘭氏陽性桿菌占95%以上，呈正常菌群涂片所見糞便涂片課件男，1歲幼兒，正常糞便涂片。細菌總數(shù)正常，以革蘭氏陽性桿菌為主，革蘭氏陰性桿菌及革蘭氏陽性球菌均在正常范圍，呈正常菌群涂片所見糞便涂片課件健康壯年人之糞便，革蘭陽性菌（似乳桿菌和雙歧桿菌）多于革蘭陰性桿菌（似擬桿菌），革蘭陽性和革蘭陰性球菌在正常范圍，呈現(xiàn)壯年人之正常菌群涂片所見。健康壯年人之糞便，革蘭陽性菌（似乳桿菌和雙歧桿菌）多于革蘭陰健康青年人正常糞便涂片，革蘭氏陽性桿菌明顯多于革蘭氏陰性桿菌，呈正常菌群涂片所見健康青年人正常糞便涂片，革蘭氏陽性桿菌明顯多于革蘭氏陰性桿菌女性，63歲正常老年人糞便，革蘭氏陽性桿菌略多于革蘭氏陰性桿菌，革蘭氏陽性和陰性球菌及芽胞桿菌正常在范圍，呈現(xiàn)老年人正常菌群涂片女性，63歲正常老年人糞便，革蘭氏陽性桿菌略多于革蘭氏陰性桿檢查要點與報告要點

糞便涂片觀察到的細菌分為四類：

1、革蘭氏陽性桿菌

2、革蘭氏陰性桿菌

3、革蘭氏陽性球菌

4、革蘭氏陰性球菌

通過標本中四類細菌的百分比、有無比例倒置與正常菌群平衡狀態(tài)的正常百分比的比較,來評定受檢者的菌群狀態(tài)。

檢查要點與報告要點

涂片快速查菌群時根據(jù)菌群菌群失調嚴重程度可分為三度：

Ⅰ度和Ⅱ度菌群失調是數(shù)量的改變

Ⅲ度是質的改變

菌群失調分度的標準涂片快速查菌群時根據(jù)菌群菌群失調嚴重程

菌群失調的分度及診斷

Ⅰ度菌群失調

臨床表現(xiàn)：慢性腹瀉、輕、可自發(fā)緩解

糞便外觀：多為稀便，大便常規(guī)無明顯異常

涂片所見：細菌總數(shù)在正常低值，G+桿菌基本正常，G-桿菌略增加（或G+球菌較正常增加）

總之，僅是數(shù)量和比例輕度改變菌群失調的分度及診斷糞便涂片課件8天嬰兒稀便，腹瀉3-5次/天，革蘭氏陽性球菌及球桿菌增多，革蘭氏陽性桿菌減少，革蘭氏陰性桿菌相對多，呈現(xiàn)Ⅰ度菌群失調改變8天嬰兒稀便，腹瀉3-5次/天，革蘭氏陽性球菌及球桿菌增多，20歲，女性，輕度腹瀉之青年人糞便，2-4次/d?？梢姼锾m陰性桿菌多于革蘭陽性桿菌，為I度菌群失調改變，不需治療即可恢復。20歲，女性，輕度腹瀉之青年人糞便，2-4次/d。可見革蘭陰男，57歲，急性腸炎。革蘭陽性桿菌明顯減少，革蘭陰性桿菌在正常低值，革蘭陽性球菌明顯增多，呈現(xiàn)球桿比例倒置，菌群呈I度菌群失調改變。糞便涂片課件Ⅱ度菌群失調臨床表現(xiàn)：慢性腹瀉、不可逆糞便外觀：多為稀便、也可呈粘液水樣便、膿血或柏油樣便。大便常規(guī)可見少量白細胞和膿細胞。涂片所見：細菌總數(shù)明顯減少，G+桿菌減少，G-桿菌明顯增多（擬桿菌、大腸桿菌），G+球菌較正常增多，球桿比倒置，可見少量類酵母菌。Ⅱ度菌群失調臨床表現(xiàn)：慢性腹瀉、不可逆糞便涂片課件常住菌明顯減少，革蘭氏陽性桿菌顯著減少，革蘭氏陰性桿菌部分消失，革蘭氏陽性鏈球菌及類酵母菌增多，呈現(xiàn)Ⅱ度菌群失調改變常住菌明顯減少，革蘭氏陽性桿菌顯著減少，革蘭氏陰性桿菌部分消66歲女性慢性肝炎患者，腹瀉，黃色稀便。細菌總數(shù)略減少，革蘭陽性和革蘭陰性桿菌明顯減少，而革蘭陽性球菌增多，可見大量脂肪球（蘇丹III染色明顯），呈II度菌群失調改變。66歲女性慢性肝炎患者，腹瀉，黃色稀便。細菌總數(shù)略減少，革蘭Ⅲ度菌群失調臨床表現(xiàn)：急性腹瀉、二重感染、排便次數(shù)多，可出現(xiàn)低熱和白細胞升高糞便外觀：稀便或粘液便，常呈黃綠色或黑色；大便常規(guī)可見大量白細胞和膿細胞。涂片所見：細菌總數(shù)顯著減少；原有細菌大多被抑制，一種細菌或真菌占優(yōu)勢：葡萄球菌、白假絲酵母菌、致病大腸桿菌、艱難梭菌、銅綠假單菌、肺炎克雷伯菌總之，原菌群中的某一種少數(shù)菌成為菌群的絕對優(yōu)勢是Ⅲ度菌群失調癥的主要特點，應同時做糞便細菌的分離和鑒定。

Ⅲ度菌群失調臨床表現(xiàn)：急性腹瀉、二重感染、排便次數(shù)多，可出糞便涂片課件快速涂片查菌群：涂片所見細菌總數(shù)顯著減少，革蘭陽性、革蘭陰性桿菌消失，可見少數(shù)革蘭陽性球菌和較多量的酵母樣菌，呈現(xiàn)III度菌群失調改變。糞便涂片課件革蘭陽性桿菌減少，革蘭陰性桿菌明顯減少，酵母菌明顯增多，呈現(xiàn)III度菌群失調改變。革蘭陽性桿菌減少，革蘭陰性桿菌明顯減少，酵母菌明顯增多，呈現(xiàn)報告方式

報告方式有兩種：文字描述法和簡表法1、文字描述法：

具體描述細菌總數(shù)，革