第八章植物離體培養(yǎng)育種

第八章植物離體培養(yǎng)育種

園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第八章植物離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及應(yīng)用第二節(jié)

組織與器官培養(yǎng)第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第八章植物離體培養(yǎng)育種第一節(jié)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用一、植物離體培養(yǎng)的概念植物離體培養(yǎng)（Plantinvitroculture）：即廣義的植物組織培養(yǎng)（Planttissueculture），是指通過無菌操作，將植物的組織、器官、細(xì)胞以及原生質(zhì)體等接種于人工配制的培養(yǎng)基上，在人工控制的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價值的其他生物產(chǎn)品的一種技術(shù)。是現(xiàn)代生物技術(shù)的一個重要組成部分。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用二、植物離體培養(yǎng)的類型按外植體的種類和培養(yǎng)目的來分:1、胚胎培養(yǎng)（embryoculture）2、組織培養(yǎng)（tissueculture）3、器官培養(yǎng)（organculture）4、花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)（pollenandantherculture）5、細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）6、原生質(zhì)體培養(yǎng)（protoplastculture）園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用二、植物離體培養(yǎng)的類型按外植體的種類和培養(yǎng)目的來分:1、胚胎培養(yǎng)（embryoculture）:

以胚及具有胚的器官作為外植體，在離體培養(yǎng)條件下，使其再生完整植株的技術(shù)。包括胚（幼胚、成熟胚）、胚乳、胚珠、子房。2、組織培養(yǎng)（tissueculture）：以植物各部分組織為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。如分生組織、形成層組織、表皮組織、薄壁組織等園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用二、植物離體培養(yǎng)的類型3、器官培養(yǎng)（organculture）以植物的某一器官的全部或部分或器官原基作為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。如根尖、莖尖、莖段、葉片等4、花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)（pollenandantherculture）

花粉培養(yǎng)通常是指以未成熟花粉作為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。又稱游離小孢子培養(yǎng)?；ㄋ幣囵B(yǎng)通常是指以未成熟花藥作為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用二、植物離體培養(yǎng)的類型5、細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）

以能保持較好分散性的單細(xì)胞或很小的細(xì)胞團(tuán)作為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。6、原生質(zhì)體培養(yǎng)（protoplastculture）

以除去細(xì)胞壁而獲得的原生質(zhì)體作為外植體的離體培養(yǎng)技術(shù)。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用1、擴(kuò)大變異范圍

植物組織細(xì)胞培養(yǎng)物及其再生植株并非是遺傳上同一的。體細(xì)胞無性系變異，變異譜甚廣，且是隨機(jī)的。2、克服遠(yuǎn)緣雜交的一些障礙

用胚珠和子房培養(yǎng)進(jìn)行試管授粉和受精，可以克服由于柱頭或花柱等障礙所造成的雜交或自交不親和性。

胚培養(yǎng)克服雜種不育性。胚挽救園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用3、獲得體細(xì)胞雜種

通過原生質(zhì)體融合途徑可以部分克服有性雜交種間的障礙，獲得體細(xì)胞雜種。不同種間、屬間甚至科間通過該技術(shù)可以廣泛雜交，這對于無性繁殖的園藝植物具有更特殊的意義。

對稱融合、非對稱融合。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用4、倍性控制

通過植物的胚胎、器官及細(xì)胞培養(yǎng)，可以實現(xiàn)對再生植株的倍性控制。胚乳培養(yǎng)三倍體植株

花粉、花藥培養(yǎng)單倍體植株細(xì)胞培養(yǎng)（染色體加倍）多倍體植株園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用5、突變的誘導(dǎo)和離體選擇

培養(yǎng)組織或細(xì)胞處在不斷地分裂分化狀態(tài)，它容易受到培養(yǎng)條件和外加壓力的影響而產(chǎn)生突變，而且這種突變可以在實驗室相對均一的條件下進(jìn)行選擇，提高選擇效果。誘變物質(zhì)：物理和化學(xué)物質(zhì)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用6、加速親本材料的純化

通過花藥及花粉培養(yǎng)再生單倍體植株，再使單倍體植株的染色體加倍，便可獲得純合穩(wěn)定的二倍體植株。7、快速無性繁殖

名特優(yōu)新品種、優(yōu)良自交不親和系、雄性不育系等園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用8、獲得脫毒苗

農(nóng)作物中有很多植物都帶有病毒，特別是無性繁殖作物，所帶病毒多是通過營養(yǎng)體繁殖，嚴(yán)重影響作物產(chǎn)量和品質(zhì)。9、種質(zhì)資源的試管保存利用莖尖及細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)合低溫或超低溫冷凍貯藏保存種質(zhì)資源。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)用三、植物離體培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用10、可作為外源基因轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)

利用植物組織、細(xì)胞及原生質(zhì)體作為受體。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第一節(jié)植物離體培養(yǎng)的概念及其應(yīng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)一、實驗室二、培養(yǎng)條件三、步驟與方法園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)一、實驗室1、無菌操作室2、培養(yǎng)室3、化學(xué)實驗室、洗滌消毒室和細(xì)胞學(xué)實驗室園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)二、培養(yǎng)條件1、培養(yǎng)基2、無菌操作3、培養(yǎng)的環(huán)境條件園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)二、培養(yǎng)條件1、培養(yǎng)基種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分：無機(jī)成分、有機(jī)成分、天然復(fù)合物、植物生長調(diào)節(jié)劑配方：常用的有MS、ER、B5、SH、HE等。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)二、培養(yǎng)條件2、無菌操作污染來源培養(yǎng)基及玻璃器皿無菌操作室、所用器械外植體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)二、培養(yǎng)條件2、無菌操作材料的消毒消毒劑的種類：Ca(Cl)2、NaClO、H2O2、AgNO3、HgCl2、酒精等消毒方法：材料修整——流水沖洗——藥劑消毒（常用75%乙醇浸漬30s——0.1%升汞浸泡2~10min或2%~10%NaClO浸泡10~30min——無菌蒸餾水沖洗3~5次）園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)二、培養(yǎng)條件3、培養(yǎng)的環(huán)境條件光照：白色熒光燈，光強(qiáng)1000~5000Lx，12~16hr，用自動定時器控制光照時間溫度：多為25±2℃濕度：容器內(nèi)濕度：100%

環(huán)境濕度：要求70%~80%園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)三、步驟與方法1、無菌培養(yǎng)的建立2、營養(yǎng)繁殖體的增殖3、生根4、試管苗移栽大田園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)三、步驟與方法1、無菌培養(yǎng)的建立

主要考慮外植體能夠存活,沒有菌的污染2、營養(yǎng)繁殖體的增殖

使繁殖體實現(xiàn)最大限度地增殖。

增殖方式：誘導(dǎo)腋芽的發(fā)生誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽體細(xì)胞胚胎發(fā)生園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)三、步驟與方法3、生根生根產(chǎn)生完整植株，要求培養(yǎng)基中含促進(jìn)生根的生長素類物質(zhì)。4、試管苗移栽大田

主要目的是提高移栽成活率。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第二節(jié)組織與器官培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種一、單倍體在植物育種上的重要性二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)三、單倍體植株的染色體加倍園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種一、單倍體在植物育種上的重要性單倍體染色體加倍可獲得純合二倍體有利于遠(yuǎn)緣雜交新類型的培育和穩(wěn)定與誘變育種相結(jié)合可加速育種進(jìn)程可作為外源基因轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、花藥培養(yǎng)材料的選?。捍蠖鄶?shù)為單核中晚期材料滅菌接種培養(yǎng)再生單倍體植株園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、花藥培養(yǎng)接種培養(yǎng)

接種：盡量避免損傷花藥徹底去除花絲

培養(yǎng)：方式：固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)培養(yǎng)條件：一些作物培養(yǎng)初期需黑暗培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、花藥培養(yǎng)再生單倍體植株胚狀體途徑愈傷組織器官分化途徑園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)2、花粉培養(yǎng)花粉的分離：機(jī)械分離法：在液體培養(yǎng)基中，輕輕擠壓花藥或花蕾，200目鎳絲網(wǎng)過濾，3~4次離心（500r/min3~5min)自然散落法：花藥直接接種，自然開裂時移走花藥繼續(xù)培養(yǎng)或離心收集花粉后培養(yǎng)。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)2、花粉培養(yǎng)花粉的培養(yǎng)：淺層液體培養(yǎng)法看護(hù)培養(yǎng)法園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種二、花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)3、影響花藥及花粉培養(yǎng)的因素供體植株的基因型培養(yǎng)基小孢子發(fā)育階段供體植株的生理狀態(tài)及培養(yǎng)前的預(yù)處理培養(yǎng)方式園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體育種三、單倍體植株的染色體加倍自然加倍人工誘導(dǎo)加倍從愈傷組織再生二倍體植株園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第三節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)與單倍體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選一、單細(xì)胞培養(yǎng)二、細(xì)胞突變體的篩選園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選一、單細(xì)胞培養(yǎng)單細(xì)胞培養(yǎng)是指從植物組織器官或愈傷組織游離出單細(xì)胞，在無菌條件下，使其再生完整植株的技術(shù)。1、單離細(xì)胞的方法物理方法：外植體→愈傷組織→液體培養(yǎng)基中振蕩→過濾→離心（500r/min5~10min）化學(xué)方法：草酸鈣、秋水仙堿、水解乳蛋白酶法：果膠酶和纖維素酶園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選一、單細(xì)胞培養(yǎng)2、單細(xì)胞培養(yǎng)方法液體淺層培養(yǎng)微滴培養(yǎng)平板培養(yǎng)看護(hù)培養(yǎng)飼喂層培養(yǎng)條件培養(yǎng)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選一、單細(xì)胞培養(yǎng)3、培養(yǎng)細(xì)胞的密度及活力測定起始培養(yǎng)的細(xì)胞密度：每毫升培養(yǎng)液104~108個細(xì)胞細(xì)胞活力測定：染色法熒光素雙醋酸鹽（FDA）酚藏花紅

Evansblue(Evans藍(lán)）植板率的測定園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選一、單細(xì)胞培養(yǎng)3、培養(yǎng)細(xì)胞的密度及活力測定植板率的測定：植板率是平板培養(yǎng)中常用的一個術(shù)語，用來反映植板效率的高低，其含義是每個平板接種細(xì)胞總數(shù)中形成細(xì)胞團(tuán)的百分率。植板率=每平板形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)/每平板接種的細(xì)胞總數(shù)×100%園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選二、細(xì)胞突變體的篩選1、細(xì)胞突變體篩選的一般技術(shù)細(xì)胞材料的選擇誘發(fā)突變的方法突變細(xì)胞的選擇方法園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩選二、細(xì)胞突變體的篩選2、突變性狀的遺傳基礎(chǔ)及其穩(wěn)定性鑒定3、農(nóng)業(yè)上有用性狀的突變體離體篩選對病害的抗性對土壤障礙的抗耐性對除草劑的抗性對溫度的抗耐性園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)及其突變體篩園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交植物原生質(zhì)體：是指除去細(xì)胞壁的由質(zhì)膜包裹著的具有生活力的裸細(xì)胞。原生質(zhì)體融合：也稱體細(xì)胞雜交，指使不同的原生質(zhì)體相互融合形成雜種細(xì)胞，再經(jīng)過人工培養(yǎng)誘導(dǎo)雜種細(xì)胞分化形成植株的過程。一、原生質(zhì)體的分離二、原生質(zhì)體的培養(yǎng)三、原生質(zhì)體的融合四、原生質(zhì)體融合體的發(fā)育及雜種細(xì)胞的篩選五、體細(xì)胞雜種植株的再生及其鑒定園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體的分離1、分離原生質(zhì)體的材料來源葉肉組織，無菌苗的子葉，愈傷組織及懸浮細(xì)胞最常用。園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體的分離2、分離方法機(jī)械法酶分離法酶：纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶滲透壓穩(wěn)定劑：甘露醇、山梨醇、葡萄糖等園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體的分離3、原生質(zhì)體分離的操作程序分離：兩步法：果膠酶使細(xì)胞分離→纖維素酶及半纖維素酶降解細(xì)胞壁一步法：果膠酶、纖維素酶及半纖維素酶混合處理

園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體的分離3、原生質(zhì)體分離的操作程序純化：過濾離心漂浮法界面法園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體的分離3、原生質(zhì)體分離的操作程序過濾離心：40~60μm鎳絲網(wǎng)過濾→離心（1000r/min3~5min）→清洗液懸浮離心3~5次漂浮法：原生質(zhì)體懸浮液與0.3~0.6mol/L蔗糖溶液混合→離心（800~1000r/min5min）→吸管收集→懸浮離心界面法：過濾→CPW-13%甘露醇溶液洗滌→離心→沉淀用8mLCPW-25%蔗糖溶液懸浮→加入2mLCPW-13%甘露醇溶液→離心園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種界面梯度離心獲得的原生質(zhì)體聚集帶園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種界面梯度離心獲得的原生質(zhì)體聚集帶純化后的原生質(zhì)體純化后的原生質(zhì)體園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交二、原生質(zhì)體的培養(yǎng)1、原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法同單細(xì)胞培養(yǎng)2、原生質(zhì)體的分裂與增殖3、植株再生園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交二、原生質(zhì)體的培養(yǎng)2、原生質(zhì)體的分裂與增殖園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交二、原生質(zhì)體的培養(yǎng)2、原生質(zhì)體的分裂與增殖園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交小愈傷組織轉(zhuǎn)至固體培養(yǎng)基來自原生質(zhì)體的小愈傷組織

來自原生質(zhì)體的細(xì)胞團(tuán)小愈傷組織轉(zhuǎn)至固體培養(yǎng)基來自原生質(zhì)體的小愈傷組織來自原生質(zhì)園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交三、原生質(zhì)體的融合3、植物再生園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交三、原生質(zhì)體的融合1、原生質(zhì)體融合的類型自發(fā)融合誘導(dǎo)融合2、誘導(dǎo)融合的方法和步驟園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種誘導(dǎo)融合的方法和步驟

123原生質(zhì)體融合過程（圖版1,2,3是間隔2min拍攝到的同一個融合體）園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種誘導(dǎo)融合的方法和步驟

123原生園藝植物育種學(xué)—離體培養(yǎng)育種第五節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞