1,25(OH)2D3聯(lián)合黃芪多糖對體外骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用及其機制

李浩,劉東閣,閆姝琪,任淑萍（吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室,吉林長春130021）胰島素抵抗（insulinresistance,IR）是一種機體的病理生理狀態(tài),主要發(fā)生在骨骼肌、脂肪和肝臟組織中,其特征為胰島素介導(dǎo)的靶器官對胰島素作用的敏感性降低,被認(rèn)為是多種疾病的致病驅(qū)動因素[1-2］。當(dāng)機體發(fā)生IR時,胰島素和胰高血糖素分泌發(fā)生紊亂,并可導(dǎo)致多種代謝疾病的發(fā)生,例如高血糖癥、2型糖尿?。╰ype2diabetesmellitus,T2DM）、代謝綜合征、非酒精性脂肪肝病和動脈粥樣硬化等[3-4］。研究[5-6］顯示：氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致IR的重要因素。氧化應(yīng)激能夠激活核因子κB（nuclearfactorkappa-B,NF-κB）信號通路,抑制胰島素介導(dǎo)的胰島素受體（insulinreceptor,InsR）和胰島素受體底物1（insulinreceptorsubstrate-1,IRS-1）的酪氨酸磷酸化,導(dǎo)致胰島素信號失活；炎癥反應(yīng)能夠激活c-JunN-末端激酶（c-JunN-terminalkinase,JNK）和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase,MAPK）信號通路,干擾胰島素信號的傳導(dǎo),抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運進而發(fā)生IR[7-8］。骨化三醇[1,25-dihydroxycholecalciferol,1,25（OH）2D3］是維生素D的活性形式,可抑制體內(nèi)活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）的產(chǎn)生并下調(diào)NF-κB的表達(dá),通過IRS-1/葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（glucosetransporter4,GLUT4）級聯(lián)反應(yīng)改善糖尿病模型中的葡萄糖代謝,并改善IR[9］；黃芪多糖（astragaluspolysaccharide,APS）是從黃芪干燥根中提取的一類大分子活性物質(zhì),能夠降低糖尿病大鼠模型體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平,增加GLUT4的表達(dá),使胰島素受體底物（insulinreceptorsubstrate,IRS）表達(dá)數(shù)明顯上調(diào),減輕IR[10］。然而,目前尚未見關(guān)于二者聯(lián)合作用緩解IR的報道。本文作者在體外建立骨骼肌細(xì)胞IR模型,通過給予細(xì)胞APS和（或）1,25（OH）2D3,探討1,25（OH）2D3聯(lián)合APS對骨骼肌細(xì)胞IR的緩解作用及其機制,為防治IR提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.1細(xì)胞、主要試劑和儀器大鼠L6成肌細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。DMEM高糖培養(yǎng)基和胎牛血清（以色列BI公司）,CCK-8試劑（美國APExBIO公司）,活性氧檢測試劑盒和BCA蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物公司）,ECL發(fā)光試劑盒（上海莫納生物科技有限公司）,APS（北京索萊寶生物科技公司）,1,25（OH）2D3（梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司）,InsR、IRS-1、磷酸化胰島素受體底物1（phosphorylatedinsulinreceptorsubstrate1,p-IRS-1）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38mitogenactivatedproteinkinase,p38MAPK）和磷酸化P65κB（phosphorylatedP65,p-P65）抗體（美國CST公司）,GLUT4、Toll樣受體4（Toll-likereceptor4,TLR4）、HRP標(biāo)記的抗兔和抗小鼠抗體（美國Abcam公司）、P65抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）,單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocytechemoattractantprotein1,MCP-1）、腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6,IL-6）和白細(xì)胞介素10（interleukin-10,IL-10）ELISA試劑盒（上海Lengton生物科技有限公司）。凝膠電泳系統(tǒng)、電轉(zhuǎn)系統(tǒng)和實時定量PCR儀（美國Bio-Rad公司）。1.2L6成肌細(xì)胞的培養(yǎng)和骨骼肌細(xì)胞的誘導(dǎo)和分化L6成肌細(xì)胞采用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基,置于5%CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長至70%～80%時傳代和凍存。L6成肌細(xì)胞貼壁后,在含10%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基中生長至70%～80%時,更換為含2%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)分化培養(yǎng)4～7d,每48h換1次培養(yǎng)液,直至80%的細(xì)胞長出肌管,表明骨骼肌細(xì)胞分化成熟。1.3體外骨骼肌細(xì)胞IR模型的制備將狀態(tài)良好且分化成熟的骨骼肌細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,待細(xì)胞密度達(dá)到70%左右,加入不同濃度（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mmol·L-1）棕櫚酸（palmiticacid,PA）溶液（建立IR模型,作為不同濃度PA組,同時設(shè)置對照組,37℃培養(yǎng)12、24和36h后,棄去舊培養(yǎng)基,加入不含血清的低糖DMEM培養(yǎng)基,37℃繼續(xù)培養(yǎng),再加入100nmol·L-1胰島素溶液作用1h后,采用Beckman全自動生化分析儀檢測培養(yǎng)基中剩余葡萄糖濃度。模型建立成功標(biāo)準(zhǔn)：與對照組比較,PA組葡萄糖消耗率明顯降低,提示骨骼肌細(xì)胞IR模型建立成功。1.4CCK-8法檢測各組骨骼肌細(xì)胞存活率將處于對數(shù)生長期的L6成肌細(xì)胞以每孔1×105個的密度接種至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,按照“1.2”步驟進行誘導(dǎo)分化。實驗分為空白組、對照組和不同濃度（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mmol·L-1）PA組,各組設(shè)置6個平行復(fù)孔,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12、24和36h。采用APS處理時將細(xì)胞分為空白組、對照組、PA組、PA+不同濃度（25、50、100和200mg·L-1）APS組。1,25（OH）2D3處理時將細(xì)胞分為空白組、對照組、PA組、PA+不同濃度（1、10、100和1000nmol·L-1）1,25（OH）2D3組。分化成熟后,加入0.4mmol·L-1PA溶液作用24h,再加入上述不同濃度APS或1,25（OH）2D3溶液,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h。取出細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔加入10μLCCK-8溶液,混勻,培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2h,然后輕輕振蕩混勻,在酶標(biāo)儀490nm處測量各孔的吸光度（A）值。細(xì)胞存活率=[（實驗孔A值-空白孔A值）/（對照孔A值-空白孔A值）］×100%。1.5己糖激酶法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中葡萄糖濃度將處于對數(shù)生長期的L6成肌細(xì)胞以1×105個/孔的密度接種至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,按照“1.2”步驟誘導(dǎo)分化。加入APS處理后,實驗分為空白組、對照組、PA組、PA+不同濃度（25、50、100和200mg·L-1）APS組。加入1,25（OH）2D3處理后實驗分為空白組、對照組、PA組、PA+不同濃度（1、10、100和1000nmol·L-1）1,25（OH）2D3組。分化成熟后,加入0.4mmol·L-1PA溶液作用24h,再加入上述不同濃度APS或1,25（OH）2D3溶液,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h。吸取細(xì)胞上清液,采用Beckman全自動生化分析儀測定培養(yǎng)基中剩余葡萄糖濃度。1.6細(xì)胞分組和處理實驗分為對照組（不進行任何處理）、PA組（給予0.4mmol·L-1PA作用24h）、PA+APS組（給予0.4mmol·L-1PA作用24h后再給予100mg·L-1APS作用24h）、PA+1,25（OH）2D3組[給予0.4mmol·L-1PA作用24h后再給予100nmol·L-11,25（OH）2D3作用24h］和PA+APS+1,25（OH）2D3組[給予0.4mmol·L-1PA作用24h后再給予100mg·L－1APS和100nmol·L-11,25（OH）2D3作用24h］。1.7L6成肌細(xì)胞分化的鑒定L6成肌細(xì)胞貼壁后,按照上述方法進行誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)分化培養(yǎng)4～7d,期間倒置顯微鏡下拍照并記錄。1.8流式細(xì)胞術(shù)檢測骨骼肌細(xì)胞中ROS水平細(xì)胞經(jīng)PA、APS和1,25（OH）2D3處理后,采用無EDTA的胰酶對細(xì)胞進行消化,于15mL離心管中離心,棄上清,加入1mLPBS緩沖液重懸管底細(xì)胞,移入2mLEP管中,按照ROS檢測試劑盒的說明書進行操作。ROS表達(dá)水平=實驗組ROS陽性細(xì)胞百分率/對照組ROS陽性細(xì)胞百分率。1.9ELISA法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1水平按照試劑盒說明書要求加樣后,以空白孔調(diào)零,在450nm波長處依序測量各孔A值。采用ELISA法進行計算,擬合模型采用Logistic曲線（四參數(shù)）。根據(jù)ELISA試劑盒說明書檢測各組細(xì)胞上清液中MCP-1、IL-10、IL-6和TNF-α水平。1.10Westernblotting法檢測各組骨骼肌細(xì)胞中胰島素抵抗相關(guān)蛋白和氧化應(yīng)激相關(guān)通路蛋白表達(dá)水平收集各組細(xì)胞,采用含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液提取總蛋白,采用BCA蛋白定量試劑盒檢測細(xì)胞濃度,調(diào)整為統(tǒng)一濃度后100℃、5min進行蛋白變性,于-20℃保存。加入蛋白樣品進行電泳后,轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,5%脫脂奶粉室溫封閉2h,加入InsR、IRS-1、p-IRS-1、p38MAPK、P65、p-P65、GLUT4和TLR4一抗（1∶1000）,4℃冰箱過夜；TBST溶液清洗3次后加入二抗（1∶2000）,室溫孵育2h,TBST洗膜后,加入ECL顯影液,全自動化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)進行曝光。以GAPDH為內(nèi)參,采用ImageJ軟件分析目的蛋白表達(dá)水平。1.11統(tǒng)計學(xué)分析采用Excel錄入數(shù)據(jù),采用SPSS24.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。各組細(xì)胞存活率、各組細(xì)胞上清中葡萄糖濃度、細(xì)胞中ROS水平、各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1水平和目的蛋白表達(dá)水平符合正態(tài)分布且方差齊,以±s表示,多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1L6成肌細(xì)胞分化為骨骼肌細(xì)胞的鑒定倒置顯微鏡下觀察L6細(xì)胞復(fù)蘇后,約24h貼壁,鏡下可見細(xì)胞排列不規(guī)則,無肌型結(jié)構(gòu),細(xì)胞界限不清,多數(shù)呈橢圓形或多角形等形態(tài)；細(xì)胞生長至70%～80%時,采用含2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)第4天可見細(xì)胞逐漸形成肌型結(jié)構(gòu),排列規(guī)則,呈長梭形；誘導(dǎo)7d后細(xì)胞融合形成較多明顯的肌管,表明誘導(dǎo)分化成功。見圖1。圖1誘導(dǎo)和分化后不同時間點各組骨骼肌細(xì)胞的形態(tài)表現(xiàn)Fig.1Morphologyofskeletalmusclecellsinvariousgroupsatdifferenttimepointsafterinductionanddifferentiation2.2骨骼肌細(xì)胞IR模型的評價誘導(dǎo)分化后的骨骼肌細(xì)胞與0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mmol·L-1PA溶液共同孵育12、24和36h,隨著PA濃度的增加,細(xì)胞存活率逐漸降低。與對照組比較,作用12h時0.2mmol·L-1PA組細(xì)胞存活率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。作用24h時,0.4mmol·L-1PA組細(xì)胞存活率達(dá)70%。隨著PA作用時間和濃度升高,細(xì)胞上清中葡萄糖濃度升高,說明細(xì)胞葡萄糖攝取能力降低。與對照組比較,作用12h時1.0mmol·L-1PA組和作用24h時0.4mmol·L-1PA組細(xì)胞上清中葡萄糖濃度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞葡萄糖攝取能力隨著PA作用時間的增加和濃度的升高而明顯降低,說明IR模型建立成功。因此,本實驗確定PA造模濃度為0.4mmol·L-1,造模時間為24h。各組骨骼肌細(xì)胞存活率見圖2,各組細(xì)胞上清中葡萄糖濃度見圖3。圖2各組骨骼肌細(xì)胞存活率Fig.2Survivalratesofskeletalmusclecellsinvariousgroups圖3各組骨骼肌細(xì)胞上清中葡萄糖濃度Fig.3Concentrationsofglucoseincellsupernatantofskeletalmusclecellsinvariousgroups2.3APS和1,25（OH）2D3濃度的確定隨著APS濃度的升高,細(xì)胞存活率和葡萄糖攝取能力逐漸增強。與PA組（20.62%±5.04%）比較,當(dāng)APS濃度為100mg·L-1時細(xì)胞存活率（54.62%±4.87%）明顯高于PA組,因此本實驗選擇100mg·L-1APS進行后續(xù)實驗。隨著1,25（OH）2D3濃度的升高,細(xì)胞存活率和葡萄糖攝取能力逐漸增強。與PA組（32.24%±0.45%）比較,1,25（OH）2D3濃度為100nmol·L-1時,細(xì)胞存活率（50.69%±2.20%）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）,因此本實驗選擇100nmol·L-11,25（OH）2D3進行后續(xù)實驗。2.4各組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平與對照組比較,PA組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平明顯升高（P＜0.05）；與PA組比較,PA+APS組、PA+1,25（OH）2D3和PA+APS+1,25（OH）2D3組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平明顯降低（P＜0.05）；與PA+APS組和PA+1,25（OH）2D3組比較,PA+APS+1,25（OH）2D3組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平明顯降低（P＜0.05）。見圖4和表1。表1各組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平Tab.1LevelsofROSinskeletalmusclecellsinvariousgroups(n=3,x±s）圖4各組骨骼肌細(xì)胞中ROS水平Fig.4LevelsofROSinskeletalmusclecellsinvariousgroups2.5各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10、TNF-α和MCP-1水平與對照組比較,PA組細(xì)胞培養(yǎng)上清中促炎癥因子IL-6、TNF-α和MCP-1水平均明顯升高（P＜0.05）,抗炎性因子IL-10水平均明顯降低（P＜0.05）；與PA組比較,PA+APS組和PA+1,25（OH）2D3組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α和MCP-1水平均明顯降低（P＜0.05）,IL-10水平均明顯升高（P＜0.05）；與PA+1,25（OH）2D3組比較,PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與PA+APS組和PA+1,25（OH）2D3組比較,PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10水平明顯升高（P＜0.05）。見表2。表2各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子水平Tab.2Levelsofinflammatoryfactorsinculturesupernatantofcellsinvariousgroups[n=3,±s,ρB/(ng·L-1)]表2各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子水平Tab.2Levelsofinflammatoryfactorsinculturesupernatantofcellsinvariousgroups[n=3,±s,ρB/(ng·L-1)]*P＜0.05vscontrolgroup；△P＜0.05vsPAgroup；#P＜0.05vsPA+APSgroup；○P＜0.05vsPA+1,25（OH）2D3group.GroupControlPAPA+APSPA+1,25(OH)2D3PA+APS+1,25(OH)2D3FPIL-10（10-3）4.093±0.0570.385±0.025*1.162±0.018*△1.316±0.044*△2.241±0.072*△#○893.3＜0.01IL-655.810±1.810106.595±0.083*59.552±0.981△71.752±2.486*△#54.009±0.861△○194.1＜0.01TNF-α45.678±2.918138.161±0.903*62.660±2.736*△73.865±0.412*△#66.781±1.233*△340.6＜0.01MCP-141.322±0.733146.014±1.338*41.940±0.869△44.912±1.072△44.208±1.229△1847＜0.012.6各組細(xì)胞中IR相關(guān)蛋白表達(dá)水平與對照組比較,PA組、PA+APS組和PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）。與PA組比較,PA+1,25（OH）2D3和PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中IR及PA+APS組、PA+1,25（OH）2D3和PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05）。PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中IR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表達(dá)水平均明顯高于PA+APS組和PA+1,25（OH）2D3組（P＜0.05）。見圖5和表3。表3各組骨骼肌細(xì)胞中InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表達(dá)水平Tab.3ExpressionlevelsofInsR,IRS-1,p-IRS-1,andGLUT4proteinsinskeletalmusclecellsinvariousgroups(n=3,x±s）圖5各組骨骼肌細(xì)胞中InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B-D）Fig.5Electrophoregram(A)andhistograms(B-D)ofexpressionsofInsR,IRS-1,p-IRS-1,andGLUT4proteinsinskeletalmusclecellsinvariousgroups2.7各組細(xì)胞中氧化應(yīng)激相關(guān)通路蛋白表達(dá)水平與對照組比較,PA組細(xì)胞中P65、p-P65、p38MAPK和TLR4蛋白表達(dá)水平,PA+APS組細(xì)胞中P65、p-P65、p38MAPK和TLR4蛋白表達(dá)水平,PA+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中P65和p38MAPK蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05）。與PA組比較,PA+APS組、PA+1,25（OH）2D3組和PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中P65、p-P65、p38MAPK和TLR4蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。與PA+APS和PA+1,25（OH）2D3組比較,PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中p-P65和p38MAPK蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）,PA+APS+1,25（OH）2D3組細(xì)胞中TLR4蛋白表達(dá)水平明顯低于PA+APS組（P＜0.05）。見圖6和表4。表4各組骨骼肌細(xì)胞中p38MAPK、P65、p-P65和TLR4蛋白表達(dá)水平Tab.4Expressionlevelsofp38MAPK,P65,p-P65,andTLR4proteinsinskeletalmusclecellsinvariousgroups(n=3,x±s）圖6各組骨骼肌細(xì)胞中p38MAPK、P65、p-P65和TLR4蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B－D）Fig.6Electrophoregram(A)andhistograms(B－D)ofexpressionsofp38MAPK,P65,p-P65,andTLR4proteinsinskeletalmusclecellsinvariousgroups3討論不良的生活行為方式可以導(dǎo)致機體內(nèi)氧化還原失衡,誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng),并激活與炎癥、凋亡和免疫等相關(guān)的多種細(xì)胞信號通路,干擾胰島素信號的傳導(dǎo),最終誘導(dǎo)IR的發(fā)生[11-12］。IR不僅導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降,壽命縮短,還會給社會帶來沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[13］。因此研究緩解IR的藥物并探討其作用機制將有助于防治代謝綜合征、心血管疾病和相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展[14-15］。骨骼肌是葡萄糖攝取和儲存的主要場所,其內(nèi)發(fā)生的葡萄糖代謝紊亂會影響全身的代謝[16］。近年來,有研究[10］顯示：APS可通過降低IR中細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,增加細(xì)胞葡萄糖的攝取和利用；1,25（OH）2D3可通過增強胰島素敏感性,降低機體慢性炎癥反應(yīng)來緩解IR。然而,目前尚未見關(guān)于二者聯(lián)合作用緩解IR的研究報道。因此本文作者在體外建立骨骼肌細(xì)胞IR模型,通過給予細(xì)胞APS和（或）1,25（OH）2D3,探討1,25（OH）2D3聯(lián)合APS對骨骼肌細(xì)胞IR的緩解作用及其機制,為防治IR提供科學(xué)依據(jù)。骨骼肌是全身葡萄糖代謝的重要場所,約80%的葡萄糖代謝發(fā)生在骨骼肌組織中,所以本實驗以骨骼肌細(xì)胞作為研究對象,研究1,25（OH）2D3聯(lián)合APS對骨骼肌細(xì)胞IR的緩解作用及其機制。研究[17］顯示：組織中游離脂肪酸（freefattyacid,FFA）的積聚可以導(dǎo)致NADPH氧化酶和PKC激酶依賴性激活,進而促進ROS的產(chǎn)生,激活氧化應(yīng)激通路,降低胰島素敏感性,導(dǎo)致IR的發(fā)生。已知血漿中FFA由飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸組成,而PA作為常見的飽和脂肪酸,已被證實可以誘導(dǎo)肝組織發(fā)生IR,并產(chǎn)生大量ROS[18］。本研究以PA誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞產(chǎn)生IR建立體外細(xì)胞模型,結(jié)果顯示：隨著PA作用時間的增加和作用濃度的升高,骨骼肌細(xì)胞存活率和葡萄糖攝取能力降低,說明PA可以誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞發(fā)生IR,這與前人研究[19-20］結(jié)論一致。另外,本研究結(jié)果顯示：PA作用24h