高效液相色譜法測(cè)定化妝品中氫和苯酚

作為一種消毒和防腐藥物，苯乙二醇和氫乙二醇可用于皮膚傷口和濕疹，具有一定的美白效果。但由于它們的毒性大,長(zhǎng)期接觸會(huì)引起白血病及心血管疾病,我國(guó)衛(wèi)生部2007年1月頒布的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定苯酚、氫醌為美白祛斑類化妝品的禁用物質(zhì)。2007年衛(wèi)生部頒布標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定方法在1999年標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上加以改進(jìn),推薦方法為高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析法、氣相色譜法、高效液相色譜法3種。對(duì)于可能出現(xiàn)的陽(yáng)性結(jié)果第一種方法采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確認(rèn),后兩種方法使用保留時(shí)間定性,相關(guān)參考文獻(xiàn)中也大多使用保留時(shí)間定性的方法。但由于化妝品種類繁多,基體復(fù)雜,單純用保留時(shí)間定性可靠性差,容易造成“誤判”。作者利用常規(guī)的高效液相色譜(紫外檢測(cè)器)和紫外分光光度計(jì),建立了反相高效液相色譜結(jié)合紫外法對(duì)化妝品中苯酚、氫醌定性確認(rèn)和定量檢測(cè)的方法,并對(duì)市場(chǎng)上不同品牌中高低檔美白祛斑類化妝品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果準(zhǔn)確,可為沒(méi)有配置二極管陣列檢測(cè)器及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用設(shè)備的化妝品生產(chǎn)廠家及質(zhì)監(jiān)部門提供一定參考。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器、檢測(cè)方法Agilent1100高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器),Agilent色譜儀器公司;TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限公司;超聲波清洗儀,上海醫(yī)用儀器廠;MettlerAE240分析天平(1/100000天平),梅特勒-托利多(上海)儀器有限公司。苯酚,分析純,重結(jié)晶,汕頭西隴化工廠;氫醌,色譜純,sigma公司;甲醇,色譜純,美國(guó)Tedia公司;其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.2流動(dòng)相、流速色譜柱:AgilentTC-C18(250mm×4.6mm,5μm);進(jìn)樣量20μL;流動(dòng)相為V(甲醇)∶V(水)=55∶45,流速為1.0mL/min;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)λ=280nm。1.3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制精密稱取苯酚標(biāo)準(zhǔn)品0.10701g,氫醌標(biāo)準(zhǔn)品0.09703g置于燒杯中,少量甲醇溶解,移至100mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容,搖勻,配成質(zhì)量濃度分別為1.0701g/L、0.9703g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精確稱取化妝品試樣約1.000g于具塞比色管中,加甲醇定容至10mL,超聲提取20min,離心分離,取上清液以0.22μm濾膜過(guò)濾。2結(jié)果與討論2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇經(jīng)紫外全波長(zhǎng)掃描,苯酚、氫醌甲醇溶液在212nm、228nm及280nm處有較大吸收?？紤]到在前兩個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)下,流動(dòng)相中甲醇的紫外吸收較強(qiáng),基線不穩(wěn),且化妝品中許多組分都有吸收,造成較大干擾,故選擇280nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。另?yè)?jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,用ODS柱,甲醇為流動(dòng)相,目標(biāo)物無(wú)響應(yīng),經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證未曾發(fā)現(xiàn)類似問(wèn)題。采用如下色譜條件:AgilentTC-C18色譜柱,流動(dòng)相為甲醇/水(體積比55∶45),流速1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)λ=280nm,進(jìn)樣量20μL,分析苯酚、氫醌混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn),苯酚、氫醌有較好的分離效果。根據(jù)對(duì)兩種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣,確定氫醌的保留時(shí)間為3.692min,苯酚的保留時(shí)間為5.878min。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL分別置于10mL容量瓶中,甲醇定容。按上述色譜條件,進(jìn)樣20μL測(cè)定。每份標(biāo)液測(cè)定5次,取峰面積平均值,以峰面積A為縱坐標(biāo),相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線,見(jiàn)圖2。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行回歸,得到氫醌的回歸方程為:y=23.083ρ+1.049(r=0.9999);苯酚的回歸方程為:y=12.861ρ+1.062(r=0.9998)。2.3加標(biāo)回收率試驗(yàn)取氫醌質(zhì)量濃度為97.03mg/L、苯酚質(zhì)量濃度為107.01mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,補(bǔ)充進(jìn)樣3次,共8次,測(cè)得結(jié)果平均值為97.12mg/L和107.09mg/L,計(jì)算RSD分別為1.7%和1.9%。精密量取氫醌質(zhì)量濃度為10.40mg/L、苯酚質(zhì)量濃度為13.56mg/L供試液2mL,定量精確加入標(biāo)準(zhǔn)溶液(氫醌48.51mg/L、苯酚53.51mg/L)0.2mL、0.4mL、0.6mL、1.0mL,使用與樣品相同的方法制備和測(cè)定,取5次測(cè)定平均值計(jì)算回收率,回收率在96.2%～102.8%,結(jié)果見(jiàn)表1。從表1中可知,該方法具有良好的準(zhǔn)確度、精密度和重現(xiàn)性。2.4紫外光譜分析對(duì)南通大型商場(chǎng)、個(gè)體批發(fā)市場(chǎng)銷售及美容院銷售使用的38種中高低檔美白護(hù)膚產(chǎn)品使用上述色譜方法進(jìn)行苯酚、氫醌相對(duì)含量的測(cè)定,采用保留時(shí)間定性。其中購(gòu)自大型商場(chǎng)的某著名歐產(chǎn)高級(jí)日霜及國(guó)產(chǎn)高級(jí)頸霜的分析結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn),樣品色譜圖中有一與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間相同的成分,若單純以保留時(shí)間進(jìn)行定性,勢(shì)必得出化妝品中含有氫醌的結(jié)論,可能會(huì)引起對(duì)商品質(zhì)量的“誤判”。對(duì)標(biāo)液和樣品提取液進(jìn)行紫外掃描,吸收光譜見(jiàn)圖4。由圖4可見(jiàn),標(biāo)液與樣品溶液的紫外光譜吸收峰位置和形狀完全不同,說(shuō)明是兩種不同的物質(zhì),從而確定樣品中不含氫醌、苯酚。對(duì)38種樣品測(cè)定結(jié)果,單純以保留時(shí)間定性,發(fā)現(xiàn)有11種樣品出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,以紫外光譜和保留時(shí)間共同確認(rèn),最終在兩個(gè)樣品中檢出氫醌和苯酚,定性結(jié)果與參照《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確認(rèn)結(jié)果完全一致。2.5b氫和苯酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)將檢出含氫醌的樣品按1.3中樣品溶液的配制方法處理,在上述色譜條件下測(cè)定5次,取峰面積平均值,按線性方程計(jì)算氫醌、苯酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。樣品一(某美白祛痘按摩膏)中氫醌、苯酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.6μg/g、19.7μg/g;樣品二(某祛斑面膜)中氫醌、苯酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21.7μg/g、16.2μg/g。3標(biāo)準(zhǔn)曲線及方法用甲醇超聲提取目標(biāo)物,高效