腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的惡性生物行為及分子干預(yù) 詹啟敏中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所 200至013.8 教育部一、研究內(nèi)容1．細胞周期調(diào)控異常與腫瘤惡性增殖、侵襲相關(guān)分子機理腫瘤是一種“細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常”性疾病,我們將通過分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、和動物模型相結(jié)合的研究技術(shù)，重點研究抑癌基因p5、B1、Gad5介導(dǎo)的信號通路與細胞周期蛋白Aurora-A、Cyclin1、Plk1的相互作用，以及在細胞周期調(diào)控和腫瘤惡性表型形成中的生物學(xué)功能和分子機制從而揭示細胞增殖失調(diào)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的內(nèi)在聯(lián)系。2．細胞凋亡和分化異常與腫瘤侵襲性生長的關(guān)系細胞凋亡調(diào)控機制的異常與侵襲特性生長密切相關(guān)促進細胞死亡的機制失活和抑制凋亡的分子的大量表達使癌癥細胞存活延長使基因突變的積累和癌變機會的增加同時凋亡機制的異常導(dǎo)致腫瘤細胞具有抗藥性通過對細胞死亡新機制腫瘤干細胞凋亡相關(guān)研究細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與凋亡調(diào)控等研究深入探討侵襲性生長的機制。3．腫瘤干細胞和腫瘤微環(huán)境與腫瘤轉(zhuǎn)移的內(nèi)在關(guān)系以惡性腫瘤干細胞特異性表型為突破口，從白血病干細胞延伸至實體瘤干細胞研究其自我更新和分化的特性探討腫瘤轉(zhuǎn)移的起始因素和關(guān)鍵分子生物學(xué)性，別腫細與環(huán)腫瘤“質(zhì)”的互機制,從而特異性打擊腫瘤干細胞作為徹底消除腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的一種新策略提供重要的理論基礎(chǔ)。4.腫瘤血管和淋巴管新生介導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移機制已鑒定腫瘤組織中血管表達3達c等是沉默抗腫瘤免疫的重要活性分子能通過與淋巴細胞的對話誘導(dǎo)機體對腫瘤的免疫耐受是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤免疫逃避機制在本項目中我們擬進一步研究血管和淋巴管促腫瘤轉(zhuǎn)移的動力學(xué)應(yīng)用切片流式細胞儀等最新一代高通量組織和細胞分析平臺確定血管和淋巴管中預(yù)示早期腫瘤轉(zhuǎn)移的始動免疫分子和對其進行靶向干預(yù)策略的有效性。5.腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)記物與腫瘤轉(zhuǎn)移靶向識別將在前期工作的基礎(chǔ)上，開展腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用及相關(guān)機制研究，著重圍繞針對腫瘤轉(zhuǎn)移病灶的標(biāo)志物及對腫瘤細胞惡性生物行為影響的分子機制進行研1究；將以與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的酪氨酸磷酸酶PRL3和促干細胞生長因子Hiwi為切入點，深入研究PL3的促瘤機；過成標(biāo)到確識微病的。6.腫瘤轉(zhuǎn)伏和轉(zhuǎn)灶期斷除將利用針對亞臨床微小轉(zhuǎn)移病灶的靶向多肽，與促凋亡蛋白TRIL、白喉毒素及化療藥物與其融合制備一批針對亞臨床微小轉(zhuǎn)移病灶的導(dǎo)向生物治療制劑實現(xiàn)對腫瘤微小轉(zhuǎn)移病灶的靶向殺傷作用并通過調(diào)控免疫應(yīng)答篩選腫瘤細胞抗原肽特異性親和配體增強抗原提呈促進導(dǎo)向生物制劑有效清除微小腫瘤病灶。7．惡性腫瘤增殖拮抗阻遏研究研究作用于多環(huán)節(jié)阻遏腫瘤轉(zhuǎn)移的新型制劑是治療腫瘤的發(fā)展方向以腫瘤相關(guān)基因、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子等為靶點，采用轉(zhuǎn)基因RNA干擾技術(shù)和小分子藥物設(shè)計等手段闡明腫瘤增殖阻遏分子作用機制研究針對腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移作用的生物治療劑和小分子物質(zhì)并建立實時觀察腫瘤生成與轉(zhuǎn)移的示蹤方法觀察體內(nèi)的抗腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的效果，為新型腫瘤增殖阻遏劑的研究提供理論基礎(chǔ)。8．腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移分子靶向干預(yù)在前期研究中，我們已經(jīng)篩選出一批腫瘤轉(zhuǎn)移腫瘤相關(guān)基因和調(diào)節(jié)因子，包括L2PHPOMaCeapBPY2IP1DACTLOC374947、SC和3抗，向。2二、預(yù)期目總體目標(biāo)本項目將以建立阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移有效方法改善腫瘤患者預(yù)后保障人類健康為目標(biāo)分析腫瘤惡性生物學(xué)行為的基本生物要素和演化過程揭示腫瘤惡性增殖和侵襲表型與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的內(nèi)在聯(lián)系以嚴重危害我國人民生命健康的1～2究。展的制子治療上逐步形成自主創(chuàng)新的能力經(jīng)過5阻和抗。五年目標(biāo)1.明確腫瘤干細胞的轉(zhuǎn)移表型：自我更新是所有干細胞的主要特性之一。對于腫瘤干細胞來說，這一特性尤為重要。腫瘤干細胞自我更新和成瘤的分子機制目前還不清楚。我們擬研究在腫瘤干細胞中具有特異表達的分子，觀察這些特異性分子和腫瘤克隆與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的內(nèi)在聯(lián)系，從干細胞的自我更新的角度為尋找特異遏制腫瘤轉(zhuǎn)移的方法提供理論基礎(chǔ)和前期實驗數(shù)據(jù)。2.確定細胞惡性生物行為與腫瘤侵襲性生長、轉(zhuǎn)移潛能的分子分型：腫瘤是一種細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異”性疾,根據(jù)前“97篩選的關(guān)鍵子轉(zhuǎn)移性腫瘤的分子劃分成若干“細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異?！眮喰汀Ｔ诿糠N亞型中確定若干反映該通路功能狀況的“檢測分子”和逆轉(zhuǎn)功能異常的“藥靶分子”。通過新一代高通量細胞分析儀確定新的信號傳導(dǎo)通路和調(diào)節(jié)位點。3.明確促進腫瘤轉(zhuǎn)移生物行為形成的微環(huán)境機制：揭示腫瘤細胞與腫瘤微環(huán)境相互作用中關(guān)鍵的腫瘤免疫逃逸機制腫瘤“基質(zhì)在腫瘤轉(zhuǎn)移中的重要作用；并重點研究腫瘤血管內(nèi)皮細胞，淋巴管內(nèi)皮細胞與生理性血管和淋巴管生成機制的差異，確定可能的腫瘤轉(zhuǎn)移干擾阻斷靶點。34.進行腫瘤標(biāo)志物、靶向肽、特異性抗體和小分子拮抗劑等針對微小潛伏腫瘤病灶或殘留腫瘤細胞的分子藥靶的篩選、鑒定或合成，建立旨在徹底清除微小潛伏腫瘤病灶或殘留腫瘤細胞的有效方法。5.建立多種分子模型和模式動物學(xué)模型改進完善用于本項目分子機理研（如細胞增殖、凋亡和分化）的技術(shù)體系，建立我國腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因文庫，創(chuàng)建新的一批分析系統(tǒng)和技術(shù)支撐平臺。篩選腫瘤轉(zhuǎn)移的特異性拮抗劑，驗證可能作為阻斷腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移藥靶的有效性和臨床實用性，從功能效應(yīng)的角度出發(fā)，在分子、細胞、組織和整體水平設(shè)置驗證分析體系。6.培養(yǎng)一批在國際腫瘤學(xué)界有競爭力的中青年科學(xué)家，造就我國腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域?qū)W術(shù)群體強勢，集中我國專家的攻關(guān)能力，取得若干重大突破，建立我國發(fā)展抗腫瘤生物高科技產(chǎn)業(yè)的技術(shù)平臺和試驗基地。7.通過組織和集中我國專家的攻關(guān)能力，使該項目取得若干重大突破，大大提升我國在該領(lǐng)域的研究水平，確立在國際上的先進地位。研究成果主要以研究論文和獨立開發(fā)的技術(shù)成果（專利）形式公布，計劃在國內(nèi)外發(fā)表學(xué)術(shù)論文300篇左右著重在國外核心刊物發(fā)表學(xué)術(shù)論文60篇左右力爭在Sciece或Natre發(fā)表1~2篇論文申專利10項。將研成有劃納國家863新技和藥開進。4三、研究方案一) 總體學(xué)術(shù)思路本項目以探索腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的基本規(guī)律，并建立較為有效的阻遏方法為基本出發(fā)點，提出新的研究思路(1)瘤行殖分化凋達康態(tài)存)通過腫特異性抗體和小分子拮抗劑等針對微小潛伏腫瘤病灶或殘留腫瘤細胞的分子藥靶的篩選鑒定或合成建立旨在徹底清除微小潛伏腫瘤病灶或殘留腫瘤細胞的有效方法從而最大限度減少腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可能性通過功能效應(yīng)和臨床整體驗證的角度來檢驗分子干預(yù)的有效性和實用性真正做到有效控制腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，保護患者健康。二) 技術(shù)路線三)創(chuàng)新點與特色1.從多層次和多學(xué)科交叉入手，圍繞惡性腫瘤惡性生物學(xué)行為對細胞增殖、轉(zhuǎn)5移的影響這一腫瘤研究的關(guān)鍵問題，結(jié)合我國已有的研究積累和基礎(chǔ)，探索惡性腫瘤相關(guān)基因、功能蛋白、信號分子等可能的分子干預(yù)機制。2.在遵循腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的生物規(guī)律，建立有效的分子干預(yù)方法的基本觀點上，提出保持腫瘤患者健康狀態(tài)下的帶瘤細胞生存的新思路，作為控制腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的基本要素。3.惡性腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是在臨床治療達到痊愈后以潛伏腫瘤病灶或殘留瘤細胞復(fù)燃為基礎(chǔ)，因此，通過特異性靶向識別和清除微小潛伏腫瘤病灶或殘留腫瘤細胞，清除腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可能性為本項目長遠目標(biāo)或最終目的。4.將研究以腫瘤干細胞特異性表型為突破口，研究惡性腫瘤干細胞分化和自我更新的生物學(xué)基礎(chǔ)，為識別腫瘤轉(zhuǎn)移的起始因素和關(guān)鍵細胞生物學(xué)性質(zhì)、建立特異性清除腫瘤干細胞提供重要的理論基礎(chǔ)。5.從探索血管生成、新生淋巴管介導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移機制為切入點，建立有效的抗血管生成和阻礙新生淋巴管措施，闡明腫瘤新生血管、淋巴管組成部分參與局部免疫調(diào)節(jié)的機理及建立可能的干預(yù)手段。6.新型研究平臺及模式生物學(xué)的應(yīng)用，結(jié)合新的分子抑制劑篩選或合成，強調(diào)整體和體內(nèi)功能效應(yīng)驗證是本項目的獨特之處。四)可析本項目重點放在研究腫瘤細胞惡性生物行為和腫瘤轉(zhuǎn)移分子干預(yù)，實現(xiàn)遏制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的戰(zhàn)略目標(biāo)。項目總體方案切實可行，首先，在人才隊伍方面，承擔(dān)本項目研究工作的中堅力量和骨干分別是我國腫瘤生物學(xué)細胞生物學(xué)分子生物學(xué)、腫瘤免疫學(xué)、分子藥理學(xué)等領(lǐng)域的青年一代學(xué)科帶頭人和技術(shù)骨干。本研究隊伍主要以中青年科學(xué)家組成有6名國家杰出青年基金獲得者研究成績斐然（項目成員發(fā)表SCI文章560篇，總影響因子共為1400，SCI引用率超過10000次)個3”打，經(jīng)的和括6分子腫瘤學(xué)國家重點實驗室癌基因和相關(guān)基因國家重點實驗室生物膜與膜生物工程國家重點實驗室蛋白質(zhì)組學(xué)國家重點實驗室以及教育部重點學(xué)科相關(guān)實驗室通過資源和技術(shù)共享人員交流等前期合作的可取模式將為研究目標(biāo)的實現(xiàn)提供有力保障。（五）課題設(shè)計思路、各課題之間的聯(lián)系及與項目總體目標(biāo)的關(guān)系根據(jù)上述研究思路，本項目設(shè)置八個相對獨立又有密切關(guān)聯(lián)的課題：(1)細胞周期調(diào)控異常與腫瘤惡性增殖、侵襲相關(guān)分子機理：主要研究內(nèi)容：A．抑癌基因p53介導(dǎo)的ncRNA在細胞周期檢測點中的功能和分子機制ncRNA是非編碼蛋白質(zhì)RNA的總稱是基因組中極其重要的一部分哺乳動物基因組中大約有將近98％的序列都由非編碼蛋白的RNA基因組成ncRNA在細胞調(diào)控的各個重要生物學(xué)過程中發(fā)揮作用包括轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)剪切加工調(diào)節(jié)RNA定。量證cA與腫瘤的發(fā)發(fā)展密相關(guān)。們最新研究發(fā)現(xiàn)ncRNA細胞DA參周測些ncRNA的受癌因p3的調(diào)節(jié)。我們將重點探討ncRNA與細胞周期素依賴激酶復(fù)合物的相互作用，從時空和亞細胞定位的層面闡明ncRNA對這些細胞周期調(diào)控關(guān)鍵元件的活性影響和調(diào)控方式。重點研究p53對重要ncRNA調(diào)控的功能和ncRNA在細胞周期檢測點中形成的作用和分子機制，研究這些ncRNA表達異常導(dǎo)致細胞周期監(jiān)控系統(tǒng)破壞并繼發(fā)細胞失控性增殖的分子機制。7．腫瘤抑癌基因BRCA1調(diào)控的信號通路在中心體復(fù)制過程中的作用細胞中心體異常和染色體畸形是惡性腫瘤侵襲性生長的生物學(xué)基礎(chǔ)之一。BRC1基因突變基因敲導(dǎo)致細中心體常，形自發(fā)瘤并進出現(xiàn)腫瘤浸潤生長和移。我目前發(fā)現(xiàn)BRCA1及其調(diào)控的Gadd45蛋白都定位在中心體上BRCA1-Gadd45信號通路和中心體復(fù)制相關(guān)的激酶Aurora-ACdc2以及Plk1有直接的相互作用。因此，我們重點研究BRCA1-Gadd45信號通路在中討B(tài)RCA1相互用蛋白與中心復(fù)制調(diào)控的分子制以及心體復(fù)異常導(dǎo)染色體形基因組亂細胞惡性增殖的分子機理；分析Gadd45蛋白與幾種重要的中心體復(fù)制相關(guān)激酶（如Aurora-A，Cdc2和Plk1）的相互作用及蛋白相互作用的方式；通過細胞和動物模型，研究BRA-Gd45通路異引起腫發(fā)生侵轉(zhuǎn)移聯(lián)及其關(guān)子機。C．細胞周期調(diào)控蛋白Aurora-A介導(dǎo)信通路腫侵襲移的作用細胞周期調(diào)控蛋白Aurora-A具有調(diào)節(jié)中心分離、熟以及錘體裝的功能，在調(diào)節(jié)細胞周期檢測點中發(fā)揮重要作用。Aurora-A異常表達在中心體擴增、染色體畸形、細胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成中有重要作用。最近發(fā)現(xiàn)Aurora-A蛋白過表達與床人類瘤的惡表型密相關(guān)，通過與Wnt信號通路的相互作用發(fā)揮致癌生物學(xué)作用我們將重點研究Aurora-A對Wnt信號通路的調(diào)控功能，包括確定Aurora-A與Wnt通路重要分子β-aein的相互作用，Aurora-A對β-ctnn的磷酸化及其對β-catenin亞細胞定位，穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄功能的影響，在細胞和動物研究模型中，闡明Aurora-A的癌基因功能和引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制。目標(biāo)：揭示細胞增殖失調(diào)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的內(nèi)在聯(lián)系。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院(2)細胞凋亡和分化異常與腫瘤侵襲性生長的關(guān)系：主要研究內(nèi)容：A．細胞死亡新機制的研究我們前期的研究提出了Bax/Bak缺失情況下細胞凋亡的新機制很可能2證8實這一現(xiàn)象分析在促凋亡機制缺失情況下細胞死亡的新機理特別是采用化學(xué)生物性方法分析細胞凋亡的新機制。．腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路與腫瘤細胞凋亡的調(diào)控TGFβ信號通路的異常在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中有非常重要的作用我們將研究與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路調(diào)控細胞凋亡的分子機制分析相關(guān)信號分子在腫瘤細胞中表達情況，探索抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新靶點。C．腫瘤干細胞凋亡的研究腫瘤干細胞在腫瘤發(fā)生中有重要作用我們最近建立了腫瘤干細胞系這些細胞具有干細胞的所有特征單個腫瘤細胞能形成克隆并在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤。我們將篩選和分析能有效殺傷腫瘤干細胞的小分子化合物深入分析腫瘤干細胞的凋亡機制，找到有效殺傷腫瘤干細胞的化合物。D．信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞凋亡調(diào)控規(guī)律的研究機體細胞數(shù)量的穩(wěn)定取決于體內(nèi)細胞增殖和細胞死亡的動態(tài)平衡我們最新的實驗數(shù)據(jù)顯示蛋白hSV1可同時抑制細胞增殖和促進細胞凋亡，除此之外我們通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)了一系列與hSV1相互作用的蛋白。我們將以hSV1蛋白為核心，通過研究這一系列蛋白與hSV1之間的相互作用來闡述其調(diào)節(jié)細胞增殖和細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制從而補充和完善人體細胞調(diào)節(jié)細胞增殖和細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的研究并為包括腫瘤在內(nèi)的許多增殖性疾病的生物治療提供了新的靶點。E．基于腫瘤細胞周期調(diào)控理論的、立足于調(diào)節(jié)亞基干預(yù)的腫瘤治療研究Rb基因是控制細胞生長及分化最關(guān)鍵的基因之一，其處于細胞周期調(diào)控的中心環(huán)節(jié)；磷脂酰肌-激（PIK）參與產(chǎn)酯第使激細內(nèi)大酶級應(yīng)瘤發(fā)發(fā)和襲著要用前研發(fā)現(xiàn)了中55KDa的調(diào)節(jié)亞基以其末端24（4和Rb相互作用，并直接影Rb磷酸化，從而調(diào)控細胞分裂。本課題將深入研pPK的功能，探在期中在生和的針對p5K有子腫，腫子療新方向。目通解亡制信導(dǎo)討生制，9同時為有效殺傷腫瘤細胞提供理論基礎(chǔ)。承擔(dān)單位：中國科學(xué)院動物研究所、華中科技大學(xué)(3)腫瘤干細胞和腫瘤微環(huán)境與腫瘤轉(zhuǎn)移的內(nèi)在關(guān)系：主要研究內(nèi)容：A．腫瘤干細胞相關(guān)研究現(xiàn)代腫瘤干細胞假說認為這些具有自我更新能力的干細胞賦予腫瘤無限生長和自我更新的能力，但腫瘤干細胞的臨床意義目前仍不明確，其生物學(xué)發(fā)生、與腫瘤轉(zhuǎn)移是否有關(guān)等問題尚存在較大爭議與實體瘤相比白血病干細胞的表型相對較為清楚。因此，白血病干細胞的研究一直處于前沿，其研究結(jié)果和方法對于我們認識其它類型腫瘤干細胞生物學(xué)特性及其臨床意義有很大價值。所以本課題組將以血液系統(tǒng)惡性腫瘤干細胞、特別是白血病干細胞為切入點，針對腫瘤干細胞研究領(lǐng)域亟待解決的問題如腫瘤干細胞的特異表型以及臨床相關(guān)性與正常干細胞比較腫瘤干細胞特異的細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)性質(zhì)惡性腫瘤干細胞與微環(huán)境間的相互作用機制腫瘤干細胞與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系特異性殺傷惡性腫瘤干細胞的方法等，著重進行下列幾方面的研究：1）進一步明確胚胎干細胞和成體干細胞自我更新與遷移相關(guān)的基因在人白血病干細胞中的表達水平、細胞內(nèi)分布以及和其他分子的相互作用影響；2）著重對那些在白血病干細胞中具有特異表達的分子進行功能干預(yù)試驗；3）白血病微環(huán)境對白血病干細胞形成與轉(zhuǎn)移的作用機制；4）將上述相關(guān)研究成果通過與其它參加單位合作擴展至實體瘤通過上述幾方面的研究將從干細胞自我更新的角度為尋找具有能夠特異消滅白血病干細胞方法提供必要的理論基礎(chǔ)無疑也將對其它腫瘤干細胞研究具有重要指導(dǎo)意義。同時本課題組在前期以肝癌為研究對象已經(jīng)開展了實體腫瘤干細胞的研究熟練掌握了肝癌干細胞研究的關(guān)鍵技術(shù)如用業(yè)內(nèi)公認的磁式分選和流式分選技術(shù)，獲得了部分候選肝癌干細胞分子標(biāo)志物cA如CD133，DLK1、EpCAM等。在基上，通過下幾方面研對實瘤中細胞行深入研1（C2腫；3胞e與肝癌轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系4胞3以；5C干10。．腫瘤局部微環(huán)境變化與侵襲轉(zhuǎn)移除上述腫瘤干細胞與微環(huán)境的關(guān)系探討外，本研究前期還證明了質(zhì)子泵（，并對其作用機制進行了探討今后的研究將聚焦于腫瘤酸性微環(huán)境和腫瘤微環(huán)境中的分泌性蛋白家族新成員和基質(zhì)蛋白家族新成員在腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用系統(tǒng)研究腫瘤轉(zhuǎn)移過程中e酶MMPs等誘導(dǎo)活調(diào)控機制；入究分型蛋家新成員D1和基白新員CTHR1在腫瘤微環(huán)境中與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的新功能。研究內(nèi)容主要包括：1）靶向腫瘤酸性微環(huán)境的抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移新策略2中DK1等分泌型蛋白家族新成員和CTHRC1等基質(zhì)蛋白家族新成員在腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用。目標(biāo)明確腫瘤干細胞特異的細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)性質(zhì)惡性腫瘤干細胞與微環(huán)境間的相互作用機制腫瘤干細胞與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系特異性殺傷惡性腫瘤干細胞的方法等，并從腫瘤微環(huán)境的角度研究抗腫瘤轉(zhuǎn)移的新策略。承擔(dān)單位：上海交通大學(xué)、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院(4)腫瘤血管、淋巴管生成與腫瘤轉(zhuǎn)移：主要研究內(nèi)容：A.PF4-CXCR3B相互作用與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的研究血小板因子4（4，PF4）結(jié)合人微血管內(nèi)皮細胞表面的受CXCR3是。CXC3B只比CXCR3A在N端多出51個氨基酸，但兩者作用卻截然相反，說明這51個氨基酸具有重要作用。擬重點研究PF4與CXCR3-B的相互作用CXCR3B分子N端ELR序列的意義及相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，闡明P4抑制增的用理并實動模中評抗CXCR3-B單抗的抑制效應(yīng)。.腫究主要研究內(nèi)容包括：1）腫瘤血管內(nèi)皮與正常血管內(nèi)皮表型、功能及血管形成的比較和鑒定2）建立大容量腫瘤血管內(nèi)皮功能性單抗庫400個克，體內(nèi)外篩選、鑒定特異識別腫瘤血管內(nèi)皮的功能性膜蛋白單抗和抗原；3）腫瘤1血管內(nèi)皮特異表達的膜蛋白分子的體內(nèi)外功能及作用機制的研究對現(xiàn)有已獲得的2個功能基因作用機制進行研究。C.腫瘤細胞與腫瘤血管內(nèi)皮的相互作用對血管生成的影響及分子機制的研究主要研究內(nèi)容包括：1）腫瘤細胞與腫瘤血管內(nèi)皮體外直接、間接相互作用對內(nèi)皮增殖、粘附、遷移、成管表型和體內(nèi)腫瘤血管生成的影響；2）上述兩種細胞在體內(nèi)外相互作用后腫瘤血管內(nèi)皮基因表達譜的比較篩選有重要作用的候選功能基因；3）對相互作用誘導(dǎo)表達的腫瘤血管內(nèi)皮相關(guān)基因進行體內(nèi)外基因功能及調(diào)控血管生成的分子機制的研究。D.腫瘤血液、淋巴轉(zhuǎn)移及器官選擇性轉(zhuǎn)移機制研究研究內(nèi)容包括：1）腫瘤內(nèi)皮及其與腫瘤細胞相互作用對血液轉(zhuǎn)移的作用及分子機制研究；2）腫瘤淋巴內(nèi)皮及其與腫瘤細胞相互作用對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用和分子機制的研究，重點是淋巴內(nèi)皮細胞膜靶分子VG3和介導(dǎo)的是參與腸癌歸巢性肝轉(zhuǎn)移過程中的作用和對已獲得的2個促進轉(zhuǎn)移的功能基因作用機制進行研究。E.基于腫瘤血管淋巴管內(nèi)皮特異性新分子靶點的抗血管治療腫瘤及轉(zhuǎn)移的研究包括1）基于上述分子機制研究所獲的候選靶標(biāo)基因的抗血管、淋巴管治療腫瘤及轉(zhuǎn)移的研（基因治療2基于腫瘤血管內(nèi)皮和淋巴內(nèi)皮特異表達的3體。， 內(nèi)，相、， 對。院)腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物與腫瘤轉(zhuǎn)移靶向識別：主要研究內(nèi)容：12A.PRL3的促腫瘤轉(zhuǎn)移機制及外周血PL3檢測方建在斷瘤轉(zhuǎn)中義PL3是新近發(fā)現(xiàn)的酪氨酸磷酸酶，在體內(nèi)外實驗中能促進腫瘤細胞的遷移侵襲和轉(zhuǎn)移但其確切分子機制不清本課題擬在前期工作基礎(chǔ)上繼續(xù)深入開展PL3的促瘤移研明確PR3與同白及PRL-3不同細內(nèi)的物義腫移找靶定礎(chǔ)還立血中PRL3的檢方（括親力高異單的備直在0，并對其與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性進行評價。B.hAD1表達腫瘤生中作用相機制究hAD1是用結(jié)腸病人清篩噬體肽獲得小肽隆同源因，是乙轉(zhuǎn)移的重催化基前期究表，hAR1在多種腫瘤均有對特異高表，并結(jié)腸的后有。本題將繞hAR1對細胞表型影響及關(guān)機體內(nèi)hARD1抗體水平臨床義hR1作為預(yù)測腫轉(zhuǎn)移或/和預(yù)后標(biāo)物的床用可性等展研探討hAR1在腫瘤發(fā)生展中的作及血清hARD1抗體水（或hAD1）的臨床義。C.SNCG作為腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的應(yīng)用基礎(chǔ)研究SNCG（Synuclein）最初是作為乳癌特異基因發(fā)現(xiàn)的，隨后的不少研究均發(fā)現(xiàn)其表達水平同多種腫瘤的臨床分期有關(guān)，我們擬在建立血清中SNCG檢測方法的基礎(chǔ)上，對乳腺癌、結(jié)直腸癌等病人血清SNCG的水平進行檢測，并對其臨床意義特別是對腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)測的臨床意義進行評價并在此基礎(chǔ)上進行相關(guān)的機制研究。目標(biāo)探討腫瘤轉(zhuǎn)移機制及為預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移提供新的技術(shù)和方法并為腫瘤的靶向治療奠定理論和實驗依據(jù)。承擔(dān)單位：北京大學(xué)、首都醫(yī)科大學(xué)(6)腫瘤轉(zhuǎn)移潛伏細胞和微轉(zhuǎn)移病灶的早期診斷及清除：主要研究內(nèi)容：A.靶向腫微小移灶異多肽相關(guān)究前期我們利用細菌鞭毛肽庫對高低轉(zhuǎn)移腫瘤配對細胞株進行篩選后得到一13個高轉(zhuǎn)移潛能腫瘤特異性靶向多肽特別對于亞臨床微小轉(zhuǎn)移病灶有很好的識別作用，并選擇性對腫瘤細胞具有殺傷作用。后續(xù)研究將包括：1）對其受體蛋白進行驗證和分析確定受體蛋白與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的分子機制闡明腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機制，并為腫瘤治療提供新靶點；2）確定導(dǎo)向肽治療的效靶關(guān)系，并將促凋亡蛋白TRAI藥移、特向?qū)崿F(xiàn)對腫瘤微小轉(zhuǎn)移病灶的靶向殺傷作用；3）利用量子點對其進行修飾，研究、開發(fā)針對腫瘤及其轉(zhuǎn)移灶的新的診斷試劑。.新究攜義3序列后驗，可有的抑制腫細胞中3游的3進，，時。行。C.抑制腫瘤細胞侵襲遷移能力增強微小腫瘤病灶清除效應(yīng)的研究前期研究中我們通過調(diào)控免疫應(yīng)答能夠有效清除微小腫瘤病灶，同時發(fā)現(xiàn)，免疫治療雖可清除腫瘤細胞但也可能導(dǎo)致殘留腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力增強此外我們制備了一種重組多肽能夠調(diào)控腫瘤細胞整合素活性而有效抑制腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。后續(xù)研究將包括：1）研究化療或免疫治療后腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力變化的相關(guān)分子機制；2）利用已制備的重組多肽抑制腫瘤細胞侵襲遷移能力，增強導(dǎo)向生物制劑和重組腺病毒治療載體清除微小腫瘤病灶的效應(yīng)；3）研究遏制腫瘤轉(zhuǎn)移能力與免疫治療相結(jié)合的治療策略及相關(guān)分子機制通過抑制腫瘤細胞侵襲遷移能力、增強清除微小殘留病灶和/或已存在的微小轉(zhuǎn)移病灶的效應(yīng)。目標(biāo)對腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性進行早期評估通過生物治療手段清除微小潛伏腫瘤病灶及已存在的微小轉(zhuǎn)移腫瘤病灶。承擔(dān)單位：華中科技大學(xué)(7)惡性腫瘤增殖拮抗阻遏研究：14主要研究內(nèi)容：A．小RNA干擾治療腫瘤的機制腫瘤的RNA干擾治療是腫瘤分子生物學(xué)熱門研究課題之一RNA在腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用是腫瘤治療的理想靶點我們將以前六個課題組篩選出的腫瘤相關(guān)基因為靶點子RNA子RNA對腫瘤新因1影響，MR-1及其相關(guān)蛋白在細胞粘附、遷移信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的作用。重點研究MR-1與MC分子的相互作用對下游分子K對腫瘤細胞粘附、阻。．生物治療劑和小分子物質(zhì)抗腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移作用及其機制研究具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移的生物治療劑和小分子物質(zhì)闡明藥物作用靶標(biāo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機制體內(nèi)抗腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移效果為臨床研究提供理論基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容：力達霉素的抗腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移作用，分子機制，體內(nèi)療效為其臨床抗瘤譜的確定提供理論基礎(chǔ)研制靶向腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移的基因治療或單抗藥物探討其抗腫瘤作用機制體內(nèi)療效以及與臨床化療藥物聯(lián)合增效作用，為臨床抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療提供后備新型生物藥物。C．腫瘤體內(nèi)增殖與轉(zhuǎn)移阻遏的實時研究主要研究內(nèi)容采用活體動物成像技術(shù)篩選與確認腫瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，12移瘤，將轉(zhuǎn)移能力得到最大限度的增強，觀測其腫瘤干細胞特征；3）基因芯片分析原發(fā)瘤與高3用RNA干擾技術(shù)驗證腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因4構(gòu)建轉(zhuǎn)移相關(guān)基因缺陷和高表達動物模型，體內(nèi)驗證的轉(zhuǎn)移基因的功能通過研究為臨床治療提供更符合實際的腫瘤生成與轉(zhuǎn)移阻遏策略和手段。目標(biāo)從腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移等調(diào)節(jié)機制研究入手探索腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移阻遏新方法、新手段。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院15(8)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移分子靶向干預(yù)：主要研究內(nèi)容：A.腫瘤轉(zhuǎn)移潛在阻遏靶點的驗證和臨床前研究項目組在前期得到了一批腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)調(diào)節(jié)靶基因靶分子通過生物信息高通量分析和前期體內(nèi)外實驗部分靶基因靶分子顯現(xiàn)出明顯干預(yù)阻遏腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的潛能本課題將深入進行組織類別特異性和功能效應(yīng)性研究與此同時我們擬利用斑馬魚等模式生物學(xué)的方法大規(guī)模充分驗證這些靶分子的生物功能，并通過結(jié)合小分子RNA多基因沉默、腺病毒載體負載的靶基因手段開展一系列臨床前應(yīng)用研究，獲得若干有效的遏制腫瘤轉(zhuǎn)移實用的干預(yù)策略。.針究通過前期研究我們觀察到腫瘤血管和淋巴管與正常組織中血管淋巴管有明顯差異新生血管內(nèi)皮和淋巴管內(nèi)皮細胞組成成分在啟動腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，特別是在它們的成型過程中，促使腫瘤局部免疫監(jiān)視無能、腫基對腫瘤的依從化。大量實驗證據(jù)顯示新生血管和淋巴管在腫瘤侵襲、擴散及遠處器官淋巴結(jié)選擇性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮越來越重要的作用我們擬應(yīng)用獨特的大容量功能性抗體庫噬菌體肽庫和生物菌株庫通過高通量篩選鑒定腫瘤特異性血管和淋巴管內(nèi)皮的功能性拮抗物獲得可能具有重要臨床治療價值的功能性膜蛋白分子靶標(biāo)及小分子肽和拮抗劑通過體內(nèi)外功能效應(yīng)實驗評價實現(xiàn)通過調(diào)控改造腫瘤血管和淋巴管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)和功能以達到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的目的。C.腫瘤選擇性復(fù)制腺病毒相關(guān)應(yīng)用研究腫瘤轉(zhuǎn)移的分子干預(yù)重要環(huán)節(jié)之一是具備優(yōu)良的靶向載體。通過5年努力，我們構(gòu)建了數(shù)個腫瘤選擇性復(fù)制腺病毒作為新的分子治療途徑經(jīng)體內(nèi)和體外驗證，這些病毒構(gòu)建體表現(xiàn)出了高效的抗腫瘤活性，而對正常細胞和組織無殺傷。但是腺病毒載體在體內(nèi)分布受其天然嗜性的影響不能特異性濃聚在腫瘤的局部而只能采用腫瘤局部注射應(yīng)用從而影響了其臨床效能本課題將采用多種新的手段實現(xiàn)新一代腺病毒的優(yōu)化改造，1)對腺病毒的纖突蛋白進行改造：將針對腫瘤特異性導(dǎo)向肽和穿膜肽復(fù)合體耦聯(lián)到溶瘤病毒纖突上使病毒載體具備導(dǎo)向識別腫瘤病灶的特性；2)對腫瘤患者自身的效應(yīng)細胞(如)在體外通過16選擇性復(fù)制腺病毒轉(zhuǎn)染，利用這些細胞定向識別腫瘤的能力（即“歸巢作用”，將選擇性復(fù)制腺病毒及負載的靶分子運載濃集至腫瘤局部通過再釋放復(fù)制及擴增清除腫瘤殘留灶若獲成功將有可能解決目前病毒載體不用全身用藥和對血液惡性腫瘤療效不好的兩大國際難題。目標(biāo)通過對細胞分化腫瘤干細胞自我更新新生血管淋巴管介導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移及腫瘤“基質(zhì)”與轉(zhuǎn)移病灶的共容關(guān)系的進一步查闡明，建立有效的分子靶向干預(yù)措施。承擔(dān)單位：華中科技大學(xué)、首都醫(yī)科大學(xué)17四、年度計劃研究內(nèi)容腫瘤細胞BR相互作用蛋白、Aurora-A以及β-catenin的相關(guān)研究。細胞死亡新機制的研究；腫瘤細胞標(biāo)志物的研究；腫瘤肝細胞分選方法的研究；腫瘤血管、淋巴內(nèi)皮細胞相關(guān)研究；第PRL特異性單抗的制備及體液中PR方法的建立PR3作用蛋白的鑒定；研究針對高效應(yīng)靶分子功能的腫瘤一選擇性復(fù)制重組腺病毒突變體；DA相關(guān)研究；小干擾R設(shè)計修飾合成和載體構(gòu)建；年建立裸鼠原位乳腺癌模型并探討其淋巴管研究的方法；腺病胸苷激酶基因制劑的臨床試驗；肝癌肝轉(zhuǎn)移動物模型的構(gòu)建；

預(yù)期目標(biāo)在既往研究基礎(chǔ)上，確定BRA1其相互作用蛋白N在中心體的定位和調(diào)控中心體穩(wěn)定性的生物學(xué)作用；確定Aurora-A與β-catenin的相互作用，以及Aurora-A對β-cein亞細胞定位、核／膜轉(zhuǎn)位，以及蛋白穩(wěn)定性的影響；進一步闡明腫瘤細胞凋亡的新機制；獲得幾種腫瘤的特異性分子標(biāo)志物；建立和完善腫瘤肝細胞研究平臺；構(gòu)建功能性抗體庫，確定腫瘤內(nèi)皮與腫瘤細胞間的相互作用；完成高效基因治療載體的構(gòu)建和驗證的動物模型；建立淋巴管研究的體內(nèi)研究方法。建立和完善食管癌和鼻咽癌的組織計劃在國內(nèi)核心期刊上發(fā)表15～20樣品庫包括正常原位侵襲和轉(zhuǎn)移的腫瘤。

篇論文；國外期刊上發(fā)表10～15篇論文。18研究內(nèi)容繼續(xù)BR研究；

預(yù)期目標(biāo)確定BRCA1與AuroA腫瘤干細胞模型的建立和癌癥干細Cdc2uroraB/Nlp/Survivi胞的特異性標(biāo)志的分析； 白復(fù)合物的相互作用，以及了解探討干細胞特征性基因在正常胚胎NlpNlp/Auro復(fù)合B/Cdc2干細胞和成體干細胞與人白血病干細胞中表達水平細胞內(nèi)分布等方面

物對中心體復(fù)制和穩(wěn)定性的作用；進一步完善干細胞相關(guān)研究；的異同探討腫瘤干細（以白血病、篩選出多個促進腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分肝癌食管癌為主與非干細胞的腫瘤轉(zhuǎn)移能力方面的差異；通過動物模型體內(nèi)鑒定功能性抗體

子；明確血清中PRL-3檢測的臨床應(yīng)用可行性；對腫瘤血管形成、腫瘤轉(zhuǎn)移的影響完成重組腺病毒載體生物學(xué)特性的分析其抗原作為抗腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤血管靶標(biāo)的潛力鑒定功能性抗體的抗原分子。腫瘤內(nèi)皮與腫瘤細胞相互作用促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因的作用能夠分子機理研究。

體內(nèi)外研究；完成小干擾RNA腫瘤作用的體外研究；建立用于腫瘤轉(zhuǎn)移的模式動物研究實驗室。在500以上結(jié)直腸癌病人血清中計劃在國內(nèi)核心期刊上發(fā)表15～20第檢測PRL-3水平與腫瘤預(yù)后和轉(zhuǎn)移的關(guān)系PR作用蛋白及二相關(guān)的信號通路研究；研究表達重組抗體的腫瘤選擇性復(fù)年制重組腺病毒突變體。分析DA子促進腫瘤細胞侵襲遷移的相關(guān)機制DA導(dǎo)巨噬細胞

篇論文；國外期刊上發(fā)表10～15篇論文。促進腫瘤細胞侵襲能力的效應(yīng)機制。研究重組F多肽在DA和M巨噬細胞存在時抑制腫瘤細胞侵襲能力的作用。小干擾R相關(guān)基因表達的影響；小干擾RNA合應(yīng)用對腫瘤細胞增殖的不同影響在裸鼠原位乳腺癌模型中驗證SEM對新生淋巴管的誘導(dǎo)作用；體外試驗了解SEM誘導(dǎo)C腫瘤組織中巨噬細胞轉(zhuǎn)分化為淋巴內(nèi)皮細胞；建立模式動物實驗室初步進行相關(guān)技術(shù)探索；繼續(xù)建立食管癌和鼻咽癌的組織樣品庫。19研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo)利用報告基因技術(shù)和β-aein下游確定Aurora-對β-catenin轉(zhuǎn)錄功能基因的表達分析，確定Aurora-A對β-cann轉(zhuǎn)錄功能的調(diào)控在動物研究模型中，觀察Aurora-A的癌基因功能異常引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象和分子機制；利用體內(nèi)體外癌癥干細胞模型篩選特異殺傷癌癥干細胞的藥物探討腫瘤干細胞和微環(huán)境ni相互作用并探討化療藥物對上述相互作用的影響；通過動物模型體內(nèi)鑒定功能性抗體

的調(diào)控，進一步通過動物模型確定Aurora-A在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用；通過體內(nèi)外干細胞模型篩選針對腫瘤干細胞的治療藥物；完善腫瘤淋巴內(nèi)皮細胞在腫瘤轉(zhuǎn)移中可能作用的理論；通過新的基因治療載體與導(dǎo)入手段的結(jié)合提高腫瘤轉(zhuǎn)移基因治療的效果；闡明腺病胸苷激酶基因制劑阻遏肝癌肝轉(zhuǎn)移的作用機制。對腫瘤血管形成、腫瘤轉(zhuǎn)移的影響計劃在國內(nèi)核心期刊上發(fā)表20～30分析其抗原作為抗腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤第血管靶標(biāo)的潛力鑒定功能性抗體的抗原分子；腫瘤內(nèi)皮與腫瘤細胞相互作用促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移分子機理研究；三檢測Sem過表達對淋巴內(nèi)皮細胞的影響；SEM瘤免疫逃逸的

篇論文；國外期刊上發(fā)表15～20篇論文其中～篇影響因子2分以上論文。關(guān)系；SE平與乳腺癌的臨床相關(guān)性研究；年結(jié)合生物信息學(xué)尋找那些有意義的mi基因，研究其調(diào)控機理；進行體液中PRL-3來源及生物學(xué)意義的研究繼續(xù)PR瘤轉(zhuǎn)移的機制研究；以臍帶間充質(zhì)干細胞為“通用”細胞載體，靶向輸送治療性病毒載體；用已經(jīng)建立的靶向腫瘤選擇性復(fù)制重組腺病毒構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建針對導(dǎo)致各通路異常的關(guān)鍵“藥靶分子”的一系列病毒突變體在一系列腫瘤轉(zhuǎn)移模型中進行驗（持續(xù)三年至第五年完成；腺病胸苷激酶基因制劑阻遏肝癌肝轉(zhuǎn)移的作用機制研究。20研究內(nèi)容結(jié)合臨床食管癌樣本和臨床信

預(yù)期目標(biāo)通過臨床樣本的驗證確定W路息，分析Aurora-A和β-ctnn β-cann是介導(dǎo)細胞周期調(diào)控因子在人類食管腫瘤中表達的相關(guān)性以及臨床意義；

Aurora-A促進腫瘤轉(zhuǎn)移的重要分子；探討腫（白血病食管癌肝癌等）建立干細胞特異表型與腫瘤轉(zhuǎn)移的干細胞的特異表型與腫瘤臨床尤其相關(guān)性理論；是腫瘤微轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性通過臨床驗證腫瘤標(biāo)志物的有效性；質(zhì)子泵抑制劑或靶向糖酵解途徑的建立以模式動物進行