實(shí)驗(yàn)四PartⅠ免疫標(biāo)記技術(shù)----間接法ELISAPartⅡ免疫病理實(shí)驗(yàn)

----超敏反應(yīng)（錄像）PartⅢ考核教師:林志娟免疫標(biāo)記技術(shù)

免疫熒光技術(shù)酶免疫技術(shù)

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）

放射免疫測(cè)定法免疫病理實(shí)驗(yàn)超敏反應(yīng)考核PartI免疫標(biāo)記技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：

特異、敏感、快速、定性、定量、定位、易于觀察某些小分子物質(zhì)（熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)）結(jié)合到抗原或抗體上，不影響抗原抗體反應(yīng)但使之更容易觀察從而提高檢測(cè)的靈敏度，稱為免疫標(biāo)記技術(shù)。與抗原或抗體結(jié)合的小分子物質(zhì)稱為標(biāo)記物。酶免疫測(cè)定法（EIA）用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果的技術(shù)。常用的標(biāo)記酶：辣根過(guò)氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶（AP）常用方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：可溶性物質(zhì)（ELISA）可定性、定量、不能定位酶免疫組化：組織和細(xì)胞中的抗原（IHC）可定性、定位酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，ELISA）概念用酶標(biāo)記抗原或抗體，將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的技術(shù)。

可敏感的檢測(cè)體液中微量的特異性抗體或抗原。EquipmentforperformingtheELISAtestPipettesIncubatorELISAreader原理使Ag或Ab結(jié)合到某種固相載體表面，保持其免疫活性。用酶標(biāo)記Ag或Ab，同時(shí)保留免疫活性和酶活性。將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)物質(zhì)按不同步驟與固相載體表面物質(zhì)反應(yīng)，洗滌游離物質(zhì)。酶將底物催化，顯色深淺與受檢Ag或Ab的量成正比。借助顏色反應(yīng)的深淺來(lái)定性、定量Ag或Ab。常用方法：間接法：最常用來(lái)檢測(cè)抗體。雙抗體夾心法：最常用來(lái)檢測(cè)抗原?？乖?jìng)爭(zhēng)法：可檢測(cè)抗原或抗體。BAS-ELISA：提高實(shí)驗(yàn)敏感性。

原理IndirectELISAtodetectAb(HIV,HCV)間接ELISA包被抗原，加待檢的血清，再加酶標(biāo)二抗，最后加酶的底物催化顯顏色，顏色的深淺反映待檢血清中抗體的量。實(shí)驗(yàn)器材抗原：脫纖維羊紅細(xì)胞；抗體：溶血素（兔抗羊紅細(xì)胞抗體、一抗，同學(xué)們制備的免疫血清），酶標(biāo)羊抗兔抗體（二抗）；洗滌液，底物溶液（OPD），H2SO4（終止液）；濾紙，溫箱，濕盒，酶標(biāo)板，酶標(biāo)儀。間接ELISA檢測(cè)兔抗SRBC抗體間接ELISA法檢測(cè)SRBC抗體步驟取用SRBC包被好的酶標(biāo)板，甩板后充分洗滌3-4次。第一孔加入100ul洗滌液做陰性對(duì)照，第二孔加入100ul兔抗SRBC抗體（一抗），37℃孵育45min。洗滌3-4次，每孔加入100ul酶標(biāo)羊抗兔IgG（二抗），37℃孵育30min。洗滌3-4次，每孔各加入酶底物100ul，避光顯色3min，加一滴2mol/l的H2SO4終止反應(yīng)。觀察結(jié)果。注意：洗滌應(yīng)徹底！12抗原一抗eee酶標(biāo)二抗加一抗洗滌（洗掉未結(jié)合的一抗）加酶標(biāo)二抗（抗一抗的抗體）eeeeeeeeeeee洗滌（洗掉未結(jié)合的二抗）eeee加酶的底物（OPD）底物（OPD）酶將底物催化，顯色加H2SO4（終止液）H2SO4（終止液）間接法ELISA結(jié)果陰性陽(yáng)性雙抗體夾心法ELISA包被抗體加待檢抗原加酶標(biāo)二