基因診斷黃少軍市中心醫(yī)院PCR與基因診斷技術(shù)基因診斷即通過核酸的分子生物學檢測直接檢測基因的存在狀態(tài)或缺陷對疾病作出診斷的方法。Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶鏈式反應(yīng)，是一種DNA的快速擴增技術(shù)。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶的作用，可在3個小時內(nèi)把特定的DNA片段擴增1000萬倍。九十年代中期PCR臨床應(yīng)用在國內(nèi)全面開展，1998年，熒光定量PCR技術(shù)開始在中國應(yīng)用于臨床檢測?；蛟\斷基因蛋白質(zhì)性狀生化診斷基因診斷臨床診斷

檢測寄生蟲感染的診斷方法的比較基因診斷的特點特異性高檢測目標是基因，為原始的致病因素靈敏度高待測標本往往微量，目的基因只需pg水平穩(wěn)定性高基因的化學組成為核酸，比蛋白質(zhì)穩(wěn)定，且不需處于活性狀態(tài)診斷范圍廣，適應(yīng)性強確切的診斷，也能確定與疾病的關(guān)聯(lián)狀態(tài)臨床應(yīng)用前景好基因診斷優(yōu)點從基因水平徹底揭示疾病的病因及發(fā)病機制顯著提早產(chǎn)前診斷的時間無需對組織、器官或細胞進行選擇快捷準確、安全基因診斷常用的技術(shù)核酸分子雜交PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）限制性酶切分析SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析）DNA測序DNA芯片技術(shù)DNASouthernblot,FISH,PCR,Sequencing,micoarray,restrictionanalysis,RFLP，SSCPRNANorthernblot,RT-PCR,micoarraysProteinWesternblot,Immuno-histochemistry,microarray基因診斷的原理利用分子生物學和分子遺傳學的技術(shù)，從DNA或RNA水平檢測、分析基因的存在、變異和表達狀態(tài)，從而對疾病做出診斷的方法策略檢測已知的能產(chǎn)生某種特定功能蛋白的基因檢測與某種遺傳標志連鎖的的致病基因檢測表型克隆基因感染性疾病的診斷遺傳疾病的診斷腫瘤的診斷法醫(yī)學鑒定分子診斷的臨床應(yīng)用一、感染性疾病的診斷利用PCR技術(shù)或PCR與分子雜交標記相結(jié)合，可以快速準確地檢測出病原性物質(zhì)。瘧疾的分子診斷：檢測是否存在瘧原蟲抽取血樣進行鏡檢免疫診斷:ELISA檢測瘧原蟲蛋白或抗體

無法區(qū)分是以前感染還是現(xiàn)在感染DNA雜交診斷例一：PCR檢測針對瘧原蟲特有的一段188bp的DNA序列設(shè)計引物，特異地從錐蟲基因組中擴增得到188bp的條帶原位PCR(insituPCR,ISPCR)在細胞或細胞切片上對待測的低拷貝數(shù)基因進行擴增，并通過原位雜交進行檢測不僅能檢測出病原微生物的存在，且能夠在組織細胞中定位二、遺傳性疾病的診斷羊水和胎盤絨毛膜檢測鐮刀形細胞貧血癥(sickle-cellanemia)典型的單基因遺傳性疾病血紅蛋白的β鏈（β珠蛋白）的第六個氨基酸Glu發(fā)生突變成Val血紅蛋白

-鏈上谷氨酸變成纈氨酸

英國女王維多利亞。她帶有血友病基因，并將其傳給了她的兒女。血友病是一種遺傳性凝血障礙疾病，患者可能因很小的傷口而出血不止導致死亡。血友病在女性一般表現(xiàn)為隱性遺傳，較少發(fā)病，但會傳給后代；在男性則表現(xiàn)為顯性遺傳，顯示出病癥。維多利亞女王在科堡主持的一次歐洲王室成員集會，與會者有17人是她的后裔，其中有她的孫女亞歷山德拉（21），她同俄國沙皇尼古拉二世結(jié)婚，導致他們的兒子患有血友病。

血友病基因三、法醫(yī)學應(yīng)用DNA指紋每個人體細胞內(nèi)都含有23對染色體，每條染色體中部含有一個DNA分子，DNA分子中的核苷酸序列包含著遺傳信息，在DNA分子中存在三種類型：單拷貝序列、中等程度重復(fù)序列、高度重復(fù)序每個重復(fù)序列在300個核苷酸長度之內(nèi)，由于高度重復(fù)，序列經(jīng)過超離心后以衛(wèi)星帶出現(xiàn)在主要DNA帶的附近，所以也稱衛(wèi)星DNA，其中的重復(fù)序列單元則稱為“小衛(wèi)星DNA”“小衛(wèi)星”具有高度的可變性，但在“小衛(wèi)星DNA“中有一小段序列則在所有個體中都一樣，稱為“核心序列”。如果把核心序列串聯(lián)起來作為分子探針與不同個體的DNA進行分子雜交，就會出現(xiàn)各自特有的雜交圖譜。它們與人的指紋一樣具有專一性和特異性，因此稱作“DNA指紋”通過對人類基因組的解析，發(fā)現(xiàn)人與人之間99．99％的堿基序列都相同，而剩下的0.01%的堿基特征序列則來自于雙親，據(jù)此可用于“親子鑒定”滴骨驗親法：

以生者的血滴在尸骨上，觀察血能否浸入骨內(nèi)，浸入的則被認為兩者有血緣關(guān)系，在各種古籍中有多種記錄。三國時代（公園220—280年）謝承著《會稽先賢傳》中的《以弟血滴兄骨》可能是記錄此法的最早的史料：陳業(yè)的哥哥因海難不幸殞命，當時一同遇難的有五六十人，并且尸體都已嚴重腐敗而無法辨認死者的身份。陳業(yè)就用刀刺破自己的手臂將血分別滴在尸骨上，發(fā)現(xiàn)其血液只能浸入一具尸骨，其余皆不能。陳業(yè)就這樣確認其兄的尸骨。合血法：

等到了明代，更是采用了“合血法”來識別親權(quán)。明末清初的檢驗書籍中都有相同的記載：“親子兄弟或自幼分離，欲相認識。難辨真?zhèn)?。命各刺出血，滴一器?nèi)，真則共凝為一，否則不凝也。”方法：DNA指紋是指對待測樣品中的DNA進行分析所得到的具有特征性的DNA分子雜交圖譜最常用的DNA探針是微衛(wèi)星序列受害者血樣犯罪嫌疑人衣物上血樣犯罪嫌疑人血樣

在細胞內(nèi)核