草揮發(fā)油組分分析及體外評價(jià)

草莓的原始植物是科他克蘭科的甘草植物草。有關(guān)纈草揮發(fā)油成分的報(bào)道不盡相同,對纈草藥材中揮發(fā)油含量的影響因素研究則甚少。我們在承擔(dān)“纈草二類新藥研制”和“纈草馴化栽培和基地建設(shè)”的項(xiàng)目研究中對國產(chǎn)纈草藥材揮發(fā)油中主要化學(xué)成分、含量的影響因素及其主要活性部分進(jìn)行了研究。1采集同一區(qū)域不同海拔、不同立地條件下的人工栽培草1.1秋后采集自川東、陜南、鄂西北、神農(nóng)架、鄂西南、湘西的野生纈草。1.2分別于開花前、秋后采集同一地方的野生與人工栽培纈草。1.3秋后收獲同地域(神農(nóng)架林區(qū))不同海拔;同地域、同海拔不同土質(zhì)的人工栽培纈草,比較其畝產(chǎn)、油含量及品質(zhì)。1.4秋后采集同地的纈草,測量鮮品及晾藏2年干品的揮發(fā)油含量及品質(zhì)。2gc-ms分析結(jié)果2.1揮發(fā)油含量測定:藥材以揮發(fā)油測定器進(jìn)行提取、測定含量。鄂西、川東、陜南、湘西成熟期的野生鮮纈草含油量基本相近;高海拔、肥沃沙質(zhì)土壤栽培的纈草產(chǎn)量及含油量明顯高于低海拔、粘土;成熟期(秋后)含油量大大高于生長營養(yǎng)期;鮮纈草含油量遠(yuǎn)高于儲存2年后的干纈草,儲存的纈草干粉含油量更低,見表1。2.2取10kg產(chǎn)自神農(nóng)架鮮纈草根和根莖,置于0.1m3的多功能提取罐中,以高壓蒸汽直接蒸餾提取揮發(fā)油,獲得淡黃色油128mL,油密度為0.956,提取率1.22%。2.3取100mL蒸餾提取的揮發(fā)油,充分以69%乙醇溶取分離,分別獲得醇溶(單萜、倍半萜氧衍生物)和不溶部分(單萜、倍半萜)。2.4揮發(fā)油的氣相色譜分析:儀器:SP502氣相色譜儀、CDMC-2A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī);色譜條件:色譜柱OV-101,0.3mm×35m彈性石英毛細(xì)管柱;檢測器;氫焰分析器;汽化室溫:280℃;柱溫70℃(2min)?→???4℃/min85℃(2min)?→???2℃/min100℃(1min)?→???4℃/min230℃(10min)70℃(2min)→4℃/min85℃(2min)→2℃/min100℃(1min)→4℃/min230℃(10min);載氣:氮?dú)?.1MPa,尾吹0.05MPa;靈敏度103,進(jìn)樣量:0.4μL。分析結(jié)果顯示:大巴山脈不同地域、同地域不同海拔或土質(zhì)、野生與栽培、不同生長期的鮮-干纈草藥材的揮發(fā)油,以及新提取的與密封避光儲存5年的油成分大致相同,僅各種成分的相對含量稍有差異。2.5神農(nóng)架野生纈草揮發(fā)油的GC-MS聯(lián)檢:儀器:JMS-P300型GC-MS聯(lián)用儀。色譜條件:OV-101,0.33mm×36m彈性石英毛細(xì)管柱。檢測器:氫焰檢測器;柱溫:一階程序升溫,60℃(2min)?→???3℃/min220℃(30min)60℃(2min)→3℃/min220℃(30min);進(jìn)樣器溫度:250℃;分流:1∶10;柱前壓:882.9kPa,尾吹0.5kg/cm2。質(zhì)譜條件:離化方式:EI;離化電壓:70eV;離化電流:300μA;分辨率:700;離化室溫度:190℃;培增電壓:1.4kV。結(jié)果:共檢出46個成分,將各個峰的質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照,鑒定了其中22個成分,占揮發(fā)油成分全量的90.18%,主要成分為龍腦醋酸酯(bornylacetateC12H20O2,196)、莰烯(camphene,C10H16,136)、α-蒎烯(α-pinene,C10H16,136)、β-蒎烯(β-pineneC10H16,136)、龍腦(borneolC10H18O,154)、葛縷醋酸酯(carveylacetate,C12H18O2,194)、纈草烷酮(valeranone,C15H26O,222)、新辛酮(Neo-octanone,C15H22O,218)。該檢測結(jié)果與國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。見表2。另外,我們還選用含量最高的7種成分的純品(龍腦醋酸酯、莰烯、α-蒎烯、β-蒎烯、龍腦、檸檬烯、β-石竹烯)分別做了GC成分峰疊加分析,也得到了證實(shí)。3草揮發(fā)油中含氧衍生物的活性組份研究近年來關(guān)于纈草的研究相當(dāng)活躍,并基本上都集中于纈草揮發(fā)油與纈草環(huán)烯醚萜酯類(纈草波春valepotriates),研究表明有顯著的平滑肌解痙、增加冠脈流量、抗心律失常、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜安神等作用。Hendriks等指出纈草的藥理作用主要在其揮發(fā)油,作用最強(qiáng)的化合物是一些含氧的組份。我們同期進(jìn)行的纈草揮發(fā)油、揮發(fā)油中含氧的組份及單純萜類組分的藥效學(xué)研究結(jié)果表明:纈草揮發(fā)油和揮發(fā)油中含氧的組份對正常小鼠及垂體后葉素+20%聚蔗糖靜脈注射誘導(dǎo)缺血大鼠的心、腎組織營養(yǎng)血流有明顯的增進(jìn)與改善作用(86Rb攝入+組織γ-脈沖計(jì)數(shù)法,以生理鹽水為陰性對照、硝酸甘油為陽性對照);纈草揮發(fā)油和揮發(fā)油中含氧的組份對乙酰膽堿誘導(dǎo)的大鼠胃組織條痙攣有明顯的解痙作用(以生理鹽水為陰性對照、以硫酸阿托品為陽性對照);油中含氧組份的藥理活性比總揮發(fā)油更強(qiáng),而單純萜類組份則未顯示類似作用(資料將另行發(fā)表)。Wagner等報(bào)道除了揮發(fā)油外,纈草乙醇提取物中的纈草波春(環(huán)烯醚萜酯)具有平滑肌解痙和增加冠脈流量的作用,纈草浸膏的鎮(zhèn)靜或安定作用也是主要依賴于纈草波春。纈草揮發(fā)油與環(huán)烯醚萜酯具有相似的藥理作用。英、日最新版藥典的纈草藥材標(biāo)準(zhǔn)中都增添了揮發(fā)油含量的最低限量,德國藥典還收載有“纈草油”。上述事實(shí)表明國內(nèi)外醫(yī)藥界對纈草揮發(fā)油藥用價(jià)值的重視。纈草揮發(fā)油除藥用外,還是常用的食品、煙草香精。文獻(xiàn)報(bào)道的纈草揮發(fā)油含量差異極大(0.2%～8%)。我國纈草資源十分豐富。本資料顯示,大巴山脈纈草揮發(fā)油含量比較高;各地纈草的揮發(fā)油成分基本一致;栽培纈草的揮發(fā)油含量及成分與野生的相似,但受土質(zhì)、海拔影響甚大,以海拔1500～3000m、富有腐殖質(zhì)的砂質(zhì)土壤栽培、冬播次年秋后收獲的產(chǎn)量及含油量最高;生長二年或多年的植株并不能提高產(chǎn)量與品質(zhì),其前一年的須根多數(shù)已枯萎或壞死;纈草干燥儲存過程中將丟失大部分揮發(fā)油,其干藥材得率及含油量約為鮮品的25%。因此,僅以纈草生藥計(jì)量是難以保證其有效成分的足量攝入。理想的纈草制劑宜以鮮品為原料,以其揮發(fā)油及纈草環(huán)烯醚